不同细胞siRNA转染效率检测，如何检测

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2018-05-30 00:55 标签： 怎样提高细胞转染效率
不同细胞siRNA转染效率的检测问题 不同细胞siRNA转染效率的检测问题(1)最近在做RNAi,用的siRNA,然后Real-Time PCR,发现抑制率仅20-30%左右,与说明书说的70-90%相去甚远,咨询相关人员后,认为可能是转染效率的问题,如果转染效率仅有20-30%, 那抑制20-30%也就不少了.因此想请教一下,一般不同细胞通常转染效率是多少?我用的是MT4(悬浮)、CEM(悬浮)、HepG2(贴壁)听说悬浮 细胞转染效率要低,原代更低,贴壁好一些,是否如此?(2)针对GFP的siRNA是不是在设计siRNA时就将GFP的表达序列设计进去? 博凌科为1.通常情况下悬浮细胞转染效率较低,贴壁细胞的转染效率因细胞不同,有些很高有些很低.HepG2的DNA转染效率大概有50%,siRNA暂时没做过.如 果你有GFP质粒和针对GFP的siRNA共转染,用只转染GFP质粒的孔做对照,可以看出转染效率.如果没有针对GFP的siRNA就只能转染GFP质 粒,一般情况下转染DNA好的话,转染siRNA也不会差的.个人觉得细胞本身的性质决定了转染效率.2.不是的.针对GFP的siRNA和我们通常用的化学合成的siRNA一样,只不过是针对GFP基因的.
摘要 : 最近在做RNAi，用的siRNA，然后Real-Time PCR，发现抑制率仅20-30%左右，与说明书说的70-90%相去甚远。咨询一些相关人员后，认为可能是转染效率的问题，如果转染效率仅有20-30%，那抑制20-30%也就不少了。因此想请教一下，一般不同细胞通常转染效率是多少? 【求助】不同细胞效率，如何检测? 最近在做RNAi，用的siRNA，然后，发现抑制率仅20-30%左右，与说明书说的70-90%相去甚远 咨询一些相关人员后，认为可能是转染效率的问题，如果转染效率仅有20-30%，那抑制20-30%也就不少了。 因此想请教一下，一般不同通常转染效率是多少? 我用的是MT4(悬浮)、CEM(悬浮)、HepG2(贴壁) 听说效率要低，原代更低，贴壁好一些，是否如此? 另外就是的转染如何确定转染效率? 有人建议加上，但是已经定了，好几千块钱，再定也不好; 或者阴性对照加上荧光，那样的话如何检测? 还有建议用个阳性对照，找个别人都做得很好的，抑制率很明确的基因来做个，再与自己的比较，那各位战友有什么建议没? littleemma认为： 通常情况下悬浮细胞转染效率较低，贴壁细胞的转染效率因细胞不同，有些很高有些很低。HepG2的DNA转染效率大概有50%，siRNA暂时没做过。 如果你有GFP质粒和针对GFP的siRNA共转染，用只转染GFP质粒的孔做对照，可以看出转染效率。 如果没有针对GFP的siRNA就只能转染GFP质粒，一般情况下转染DNA好的话，转染siRNA也不会差的。个人觉得细胞本身的性质决定了转染效率。 littleemma认为： 如果HEK293或293T有你的目的基因的话，可以试一试在HEK293或293T中的干扰效率。因为HEK293或293T是认为转染效率较高的细胞。如果HEK293或293T效率好而你的细胞不好就是转染的问题;如果HEK293或293T干扰效果都不好，那你的siRNA可能设计的不太好。 请教littleemma，针对GFP的siRNA是不是在设计siRNA时就将GFP的表达序列设计进去?谢谢!! littleemma： 不是的。针对GFP的siRNA和我们通常用的化学合成的siRNA一样，只不过是针对GFP基因的。 作者：keeii 点击：次 热门文章TOPsiRNA实验方法和设计常见问题解答_百度文库 赠送免券下载特权 10W篇文档免费专享 部分付费文档8折起 每天抽奖多种福利 两大类热门资源免费畅读 续费一年阅读会员，立省24元！ siRNA实验方法和设计常见问题解答 阅读已结束，下载本文需要 想免费下载本文？ 定制HR最喜欢的简历 下载文档到电脑，同时保存到云知识，更方便管理 加入VIP 还剩2页未读， 定制HR最喜欢的简历 你可能喜欢

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