CTAB法提取植物dna提取方法中Tris用的是什么规格的

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2018-06-09 09:39 标签： 植物rna提取方法
植物DNA的提取_百度文库
您的浏览器Javascript被禁用，需开启后体验完整功能，
赠送免券下载特权
10W篇文档免费专享
部分付费文档8折起
每天抽奖多种福利
两大类热门资源免费畅读
续费一年阅读会员，立省24元！
植物DNA的提取
总评分4.1|
用知识赚钱
&&植物DNA的提取
阅读已结束，下载本文需要
想免费下载本文？
定制HR最喜欢的简历
你可能喜欢当前位置：
&油菜DNA提取问题，用的CTAB法提取，要求质量高点
油菜DNA提取问题，用的CTAB法提取，要求质量高点
作者 帝封天下
如题，dna用来做snp，是用液氮磨样还是用打样机打样提的质量好，有经验的告诉一下
液氮冷冻，然后磨样。这样研磨充分。
基因组DNA提取
试剂与溶液
(1)2%CTAB抽提缓冲溶液：CTAB4g，NaCl16.364g，先用70mLddH2O溶解，再加入1mol/L Tris-HCl(pH8.0)20mL、0.5mol/LEDTA(pH8.0)8mL，定容至200mL。灭菌，冷却后加入0.2%-1%琉基乙醇400μL。
(2)氯仿︰异戊醇=24︰1(V/V)：先加96mL氯仿，再加4mL异戊醇，摇匀。
(3)0.5mol/LEDTA(pH8.0)：186.21gNa2EDTA&#O溶于750mLddH2O，加入2mol/LNaOH至pH8.0，用ddH2O定容至1000mL。
(4)1mol/L Tris-HCl(pH8.0)：121g Tris碱溶于750mLddH2O，加浓HCl至pH8.0，ddH2O定容至1000mL。
(5)TE缓冲液：1mol/LTris-HCl(pH8.0)5mL，0.5mol/LEDTA(pH8.0)1mL，ddH2O定容至500mL。
(6)10mg/mL RNase A(-20℃保存)：1mol/LTris-HCl(pH8.0)10μL，0.5mol/LNaCl30μL，RNase A10mg，ddH2O定容至1mL。
(7)75%乙醇：取无水乙醇375mL，加ddH2O至500mL。
(7)、(8)使用前冷藏1-2小时。
方法与步骤
(1)将油菜自交系的种子在实验室内进行暗培养，待长至一定高度时，取幼嫩叶片作为提取DNA的材料。
(2)将2%CTAB提取液放入65℃水浴中预热5分钟。
(3)称取0.3-0.5g幼嫩叶片，放入研钵，加液氮后迅速研磨成粉末状。
(4)将叶片粉末迅速、小心地刮入2mL离心管中，加入1.0mL 65℃预热的2%CTAB提取液，颠倒混匀。
(5)将离心管放入65℃水浴中，保温40分钟，其间轻摇几次。
(6)取出离心管，在室温下放置1-2分钟，加入氯仿︰异戊醇(24︰1)至满管，上下颠倒摇晃2-3min，待两者混合均匀，以12000r/min的速度离心6min。
(7)移液器吸取上清至1.5mL灭菌离心管中，加入等体积异丙醇，上下颠倒摇匀约30s，使异丙醇与水层充分混合至能见到DNA絮状物。
(8)以12000r/min离心5min，倒掉液体，注意勿将白色DNA沉淀倒出，将离心管倒立与铺开的纸巾上。
(9)60s后，直立离心管，用75%的乙醇洗2-3次，置于超净工作台风干(1-2h即可，若过分干燥，DNA沉淀会较难溶解)。
(10)加入50μL含RNase A(浓度10&g/mL)的TE缓冲液，37℃保温1-2小时，-20℃冷藏备用；在0.8%琼脂糖凝胶电泳上检查DNA完整性。
(11)利用分光光度计检测DNA的浓度及纯度，并稀释至60ng/&L备用，
预处理样品中加入800 &L裂解缓冲液、10 &L蛋白酶K（20 mg/ml）和5 &L RNA酶（10 mg/ml），振荡混匀，于65℃水浴60-90 min；16000 g离心10 min；
取上清，加500 &L氯仿异戊醇，颠倒混匀30 s；16000 g离心10 min；取上清，加500 &L氯仿异戊醇，颠倒混匀30 s；16000 g离心5 min；
取上清，加2倍体积的沉淀缓冲液，颠倒混匀，室温放置60 min；16000 g离心10 min；弃上清，加350 &LNaCl溶液回溶；加500 &L氯仿异戊醇，颠倒混匀30 s；16000 g离心10 min；
取上清，加0.6倍体积的预冷的异丙醇，颠倒混匀，于-20 ℃放置30 min；16000 g离心10 min；弃上清，加500 &L 70%乙醇溶液，颠倒混匀清洗沉淀；16000 g离心10 min；弃上清，室温下风干后使用40 &L水回溶沉淀。
24小时热帖
下载小木虫APP
与700万科研达人随时交流CTAB 提取DNA配方_百度文库
您的浏览器Javascript被禁用，需开启后体验完整功能，
赠送免券下载特权
10W篇文档免费专享
部分付费文档8折起
每天抽奖多种福利
两大类热门资源免费畅读
续费一年阅读会员，立省24元！
CTAB 提取DNA配方
&&DNA提取所用溶液CTAB的配方
阅读已结束，下载本文需要
想免费下载本文？
定制HR最喜欢的简历
下载文档到电脑，同时保存到云知识，更方便管理
加入VIP
还剩2页未读，
定制HR最喜欢的简历
你可能喜欢CTAB法提取植物基因组DNA_百度文库
您的浏览器Javascript被禁用，需开启后体验完整功能，
赠送免券下载特权
10W篇文档免费专享
部分付费文档8折起
每天抽奖多种福利
两大类热门资源免费畅读
续费一年阅读会员，立省24元！
CTAB法提取植物基因组DNA
阅读已结束，下载本文需要
想免费下载本文？
定制HR最喜欢的简历
你可能喜欢【图文】植物组织中DNA的提取_百度文库
您的浏览器Javascript被禁用，需开启后体验完整功能，
赠送免券下载特权
10W篇文档免费专享
部分付费文档8折起
每天抽奖多种福利
两大类热门资源免费畅读
续费一年阅读会员，立省24元！
植物组织中DNA的提取
阅读已结束，下载本文到电脑
想免费下载本文？
登录百度文库，专享文档复制特权，积分每天免费拿！
你可能喜欢

我要回帖

更多关于 植物rna提取方法 的文章

 

随机推荐