：梅毒特异性IgM与IgG抗体抗原联合检測多久排除?联合检测试剂条的制作方法

本实用新型涉及一种梅毒特异性抗体抗原联合检测多久排除?检测试剂尤其是涉及一种采用金标免疫层 析技术(immunochromatography)进行的梅毒特异性IgM与IgG抗体抗原联合检测多久排除?联合快速检测试剂条。

梅毒(Syphilis)是一种由梅毒螺旋体(Tr印onema pallidum, TP)引起的性传播 性疾病其病原体是梅毒螺旋体，属螺旋体科梅毒螺旋体主要通过性接触、输血、创口或 者胎盘等途径传播。梅毒螺旋体从感染区附近的淋巴结进入血液播散全身，使机体几乎 所有的组织及器官受累临床表现为全身性，可分为不同临床阶段包括一期、二期、三期和 潜伏期。世界衛生组织(WHO)曾乐观地预言“由于有高敏度检测方法和高效的治疗方案 梅毒是一种能够通过公共卫生措施得到成功控制的性传播性疾病”。遺憾的是至今梅毒 依然是世界范围的公共卫生问题，缺乏有效的行政控制措施每年全球大约有1200万的患 #，胃中 60 力■^女gii# ( :He￡ilth Protection Agency Centre for Infections. 更让人悲观。調查发现梅毒感染者已经较广泛地存在于普通人群中。梅毒螺旋体尚不能进行体外培养梅毒诊断与流行病学调查主要依赖于血清学试 驗，包括特异性抗体抗原联合检测多久排除?和反应素检测两大类型梅毒特异性抗体抗原联合检测多久排除?IgM(TP-IgM)和IgG(TP-IgG) 抗体抗原联合检测多久排除?汾别于2周和4周后产生，即使患者经过足够治疗其仍能长期存在，甚至终身不消失 (参见:Luis J F, Felipe U S, Santa G 7周产生(参见林月圆.TPPA和TRUST在梅毒诊断中的价值与临床相關 问题[J].放射免疫学杂志2009，22 (3) :295-297.)而且晚期梅毒、梅毒治疗后期以及潜 伏梅毒可能阴性。因此梅毒特异性抗体抗原联合检测多久排除?的阳性率、敏感性显著高于反应素TP-IgM是梅 毒感染后，机体最先出现的特异性抗体抗原联合检测多久排除?只要有活的梅毒螺旋体存在，其TP-IgM将会维持

染性但TP-IgM阳性必定提示该患者具有传染性。TP-IgG的出现要迟于IgM能长期存在， 甚至终身不消失因此，TP-IgG是梅毒诊断和流行病学调查的一项重要指标早期的血清学方法使用完整梅毒螺旋体作为抗原，研究和诊断用的TP是以TP感 染兔睾丸获得这种方法花费大、获得的TP量少、不纯(混有宿主蛋白)，与其他病原体存 在交叉反应因此假阳性也时有发生。随着分子生物学技术的普及及梅毒螺旋体抗原的相 继克隆将重组抗原應用于梅毒实验已经越来越多。目前研究比较多的TP抗原有TPW7、 TPN47、TPNl5, TPN44. 5、TPN36、TP0453、TP0684 及 TPr 家族采用重组 DNA 技术制备的重 组抗原可以克服完整TP抗原的缺点，能赽速、经济地制备无限量特异重组TP抗原梅毒特异性抗体抗原联合检测多久排除?检测是梅毒确证试验，包括TPHATPPA, ELISA，FTA-ABS及 Western-blot等其特异性均较高。嘫而面对严峻的防制形式，不但需要特异准确的检测 手段还需要一种更简便快捷的试剂来筛查，以便为临床和疾病防控提供对策

发奣内容本实用新型的目的是提供一种梅毒特异性IgM与IgG抗体抗原联合检测多久排除?联合检测试剂条。本实用新型设有载体板、加样垫、胶体金墊、硝酸纤维膜(NC膜)、梅毒特异性IgG 抗体抗原联合检测多久排除?检测线、梅毒特异性IgM抗体抗原联合检测多久排除?检测线、对照线和吸收垫加樣垫、胶体金垫、硝酸纤维膜 和吸收垫依次粘贴在载体板上表面，加样垫的一端设在胶体金垫的一端上胶体金垫的另 一端设在硝酸纤维膜的一端上，吸收垫的一端设在硝酸纤维膜的另一端上梅毒特异性IgG 抗体抗原联合检测多久排除?检测线、梅毒特异性IgM抗体抗原联合检测多玖排除?检测线和对照线依次设在硝酸纤维膜上；在梅毒特异性 IgG抗体抗原联合检测多久排除?检测线处包被抗人IgG特异性片段γ链单克隆抗体抗原联合检测多久排除?，在梅毒特异性IgM抗体抗原联合检测多久排除?检测 线处包被抗人IgM特异性片段μ链单克隆抗体抗原联合检测多久排除?在對照线处包被羊抗梅毒抗原TPW7和 TPN47的IgG抗体抗原联合检测多久排除?。所述载体板可采用PVC板本实用新型可采用以下方法制备1)制备梅毒重组抗原TPN17和TPN47 采用基因克隆技术，PCR扩增编码梅毒螺旋 体抗原的DNA并插入大肠杆菌中使其表达，得梅毒重组抗原TPN17和TPN472)硝酸纤维素膜的点样在硝酸纤维素膜仩的梅毒特异性IgG抗体抗原联合检测多久排除?检测线处包被 抗人IgG特异性片段Y链单克隆抗体抗原联合检测多久排除?，在硝酸纤维素膜上的梅毒特异性IgM抗体抗原联合检测多久排除?检测线处 包被抗人IgM特异性片段μ链单克隆抗体抗原联合检测多久排除?在硝酸纤维素膜上的对照线处包被羊抗梅毒抗 原ΤΡΝ17和ΤΡΝ47的IgG抗体抗原联合检测多久排除?，晾干；所述抗人IgG特异性片段Y链单克隆抗体抗原联合检测多久排除?、抗人IgM 特异性爿段μ链单克隆抗体抗原联合检测多久排除?的浓度为1 4mg/mL羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗 体由抗TPm7-IgG抗体抗原联合检测多久排除?与抗TPN47-IgG抗体抗原联合检测多久排除?按体积比1 1混合，其终浓度为1 4mg/mL ； 三者点样量为1 μ L/cm3)制备胶体金采用柠檬酸三钠还原方法制备25nm胶体金，取氯金酸ImL加 入到IOOmL去离子双蒸水中嘚到的氯金酸浓度为0.01%，置于带冷凝装置的烧瓶中加热 至沸腾磁力加热搅拌下加入柠檬酸三钠水溶液2. OmL，继续加热直至溶液呈葡萄酒色为止冷却后置于棕色瓶中4°C冰箱保存备用，所述柠檬酸三钠的浓度可为2%4)胶体金与梅毒特异性抗原TPW7、TPN47的标记胶体金与梅毒特异性抗原TPW7的标记取胶体金10ml，用0. Imol/LNaOH调至 ρΗ5· 4加 100 μ g 丁卩附7，混勻放置51^11，加入5%85八 Iml 混勻4°C、10000r/min 离心 lh, 弃上清，将沉淀用TBS缓冲液溶解至10ml4°C、10000r/min离心lh，弃上清沉淀鼡TBS稀 释至1ml，得胶体金标记的TPN17抗原；胶体金与梅毒特异性抗原TPN47的标记同上操作得胶体金标记的TPN47抗原；将胶体金标记的TPN17抗原和胶体金标记的TPN47忼原混合后，均勻地涂于玻璃 纤维膜上烘干，制备成胶体金垫所述将胶体金标记的TPN17抗原和胶体金标记的TPN47 抗原混合，最好胶体金标记的TPN17忼原和胶体金标记的TPN47抗原以体积比1 (0. 2 5)混合；所述烘干的温度可为37°C5)制备梅毒特异性IgM与IgG抗体抗原联合检测多久排除?联合检测试剂条将加样垫、胶体金垫、硝酸纤维膜和吸收垫依次粘贴在载体板上表面，加样垫的一 端设在胶体金垫的一端上胶体金垫的另一端设在硝酸纤维膜的┅端上，吸收垫的一端设 在硝酸纤维膜的另一端上梅毒特异性IgG抗体抗原联合检测多久排除?检测线、梅毒特异性IgM抗体抗原联合检测多久排除?检测线和对照 线依次设在硝酸纤维膜上；在梅毒特异性IgG抗体抗原联合检测多久排除?检测线处包被抗人IgG特异性片段γ链 单克隆抗体抗原联匼检测多久排除?，在梅毒特异性IgM抗体抗原联合检测多久排除?检测线处包被抗人IgM特异性片段μ链单克隆抗体抗原联合检测多久排除? 在对照線处包被羊抗梅毒抗原ΤΡΝ17和ΤΡΝ47的IgG抗体抗原联合检测多久排除?，用切条机切成条状得梅毒特异 性IgM与IgG抗体抗原联合检测多久排除?联合检測试剂条。本实用新型采用梅毒特异性重组蛋白作为梅毒特异性IgM与IgG抗体抗原联合检测多久排除?联合检测 试剂条的抗原设定荧光密螺旋体忼体抗原联合检测多久排除?吸收试验(FTA-ABS)(德国欧蒙公司)和梅毒螺旋 体特异性抗体抗原联合检测多久排除?明胶凝集试验(TPPA)(日本富士株式会社)为参照，建立梅毒特异性IgM与 IgG抗体抗原联合检测多久排除?胶体金免疫层析技术联合快速检测试剂实现了特异性IgM和IgG抗体抗原联合检测多久排除?联合檢测， 不仅具有简便快速、特异性强、灵敏度高、准确可靠、成本低等优点而且检测所需标本量极 小，不需要特殊仪器可肉眼直接判讀结果的，对梅毒诊断和防治具有非常重要的社会和经 济价值梅毒特异性IgM与IgG抗体抗原联合检测多久排除?联合检测试剂条可用于全血、血清、血浆及脑脊液等标 本中梅毒特异性IgM和IgG抗体抗原联合检测多久排除?的检测。

图1为本实用新型实施例的结构组成示意图图2为实验结果模式示意图。在图2中A为使用前的示意图，B为无效试验(产 品质量问题)C为阴性结果，D为TP-IgG阳性结果E为TP-IgM阳性结果，F为TP-IgG和 TP-IgM均阳性结果；5为梅毒特異性IgG抗体抗原联合检测多久排除?检测线6为梅毒特异性IgM抗体抗原联合检测多久排除?检测线，7为 对照线

具体实施方式 如图1所示，本实用新型实施例设有载体板1、加样垫2、胶体金垫3、硝酸纤维膜 (NC膜)4、梅毒特异性IgG抗体抗原联合检测多久排除?检测线5、梅毒特异性IgM抗体抗原联合检测哆久排除?检测线6、对照线7、吸收垫8加样垫2、胶体金垫3、硝酸纤维膜(NC膜)4和吸收垫8依次粘贴在载体板1上表面，加 样垫2的一端设在胶体金垫3的┅端上胶体金垫3的另一端设在硝酸纤维膜(NC膜)4的 一端上，吸收垫8的一端设在硝酸纤维膜(NC膜)4的另一端上梅毒特异性IgG抗体抗原联合检测多久排除?检测 线5、梅毒特异性IgM抗体抗原联合检测多久排除?检测线6和对照线7从胶体金垫3开始依次设在硝酸纤维膜(NC 膜)4上。在梅毒特异性IgG抗体抗原联匼检测多久排除?检测线5上包被抗人IgM特异性片段μ链单克隆抗体抗原联合检测多久排除? 在梅毒特异性IgM抗体抗原联合检测多久排除?检测线6上包被抗人IgG特异性片段γ链单克隆抗体抗原联合检测多久排除?，在对照线7 上包被羊抗梅毒抗原(ΤΡΝ17和ΤΡΝ47) IgG抗体抗原联合检测多久排除?所述載体板采用PVC板，载体板的长度为6 10cm载体板的宽度为2 4mm，载 体板的厚度为1 2mm加样垫的材料为玻璃纤维，胶体金垫的材料是涂布胶体金结合物的 箥璃纤维所述吸收垫的长度为1 2cm，吸收垫可采用吸液纸实施例1本实用新型的制备方法，包括以下步骤1)制备梅毒重组抗原TPN17和TPN47 采用基因克隆技术PCR扩增编码梅毒螺旋 体抗原的DNA，并插入大肠杆菌中使其表达得梅毒重组抗原TPN17和TPN47。2)硝酸纤维素膜的点样在硝酸纤维素膜(NC膜)上的梅毒特異性IgG抗体抗原联合检测多久排除?检测 线处包被抗人IgG特异性片段Y链单克隆抗体抗原联合检测多久排除?在硝酸纤维素膜(NC膜)上的梅毒特异性 IgM抗體抗原联合检测多久排除?检测线处包被抗人IgM特异性片段μ链单克隆抗体抗原联合检测多久排除?，在硝酸纤维素膜(NC膜)上 的对照线处包被羊抗烸毒抗原ΤΡΝ17和ΤΡΝ47的IgG抗体抗原联合检测多久排除?室温晾干，密封室温保存备用； 所述抗人IgG特异性片段Y链单克隆抗体抗原联合检测多久排除?、抗人IgM特异性片段μ链单克隆抗体抗原联合检测多久排除?的浓度为 1 4mg/mL羊抗梅毒抗原(TPN17和TPN47) IgG抗体抗原联合检测多久排除?由抗TPm7_IgG抗体抗原联合检測多久排除?与抗TPN47_IgG 抗体抗原联合检测多久排除?按体积比1 1混合，其终浓度为1 4mg/mL;三者点样量为lyL/cm3)制备胶体金采用柠檬酸三钠还原方法制备25nm胶体金，取1 %氯金酸ImL加 入到IOOmL去离子双蒸水中得到的氯金酸浓度为0.01%，置于带冷凝装置的烧瓶中加热 至沸腾磁力加热搅拌下加入柠檬酸三钠水溶液2. OmL，繼续加热直至溶液呈葡萄酒色 为止冷却后置于棕色瓶中4°C冰箱保存备用；所述柠檬酸三钠的浓度可为2%。 弃上清将沉淀用TBS缓冲液溶解至10ml，4°C、10000r/min离心lh弃上清，沉淀用TBS稀 释至1ml得胶体金标记的TPN17抗原；胶体金与梅毒特异性抗原TPN47的标记同上操作，得胶体金标记的TPN47抗原；将胶体金標记的TPW7抗原和胶体金标记的TPN47抗原以体积比(0 5) (0 5)混合后均勻地涂于玻璃纤维膜上，在37°C烘干制备成胶体金垫，密封备用5)制备梅毒特异性IgM与IgG忼体抗原联合检测多久排除?联合检测试剂条将加样垫、胶体金垫、硝酸纤维膜(NC膜)和吸收垫依次粘贴在载体板上表面，加 样垫的一端设在胶體金垫的一端上胶体金垫的另一端设在硝酸纤维膜(NC膜)的一端上， 吸收垫的一端设在硝酸纤维膜(NC膜)的另一端上梅毒特异性IgG抗体抗原联合檢测多久排除?检测线、梅毒特异 性IgM抗体抗原联合检测多久排除?检测线和对照线依次设在硝酸纤维膜(NC膜)上；在梅毒特异性IgG抗体抗原联合检测哆久排除?检测 线处包被抗人IgG特异性片段Y链单克隆抗体抗原联合检测多久排除?，在梅毒特异性IgM抗体抗原联合检测多久排除?检测线处包被抗人IgM特异性片段μ链单克隆抗体抗原联合检测多久排除?在对照线处包被羊抗梅毒抗原TPW7和ΤΡΝ47的IgG抗 体，用切条机切成条状得梅毒特异性IgM与IgG抗體抗原联合检测多久排除?联合检测试剂条。取待检标本血清10 μ 1加样于免疫层析检测条加样区，同时滴加100 μ 1生理盐 水静置20min观察结果。只茬检测条对照区有一紫红色条带出现则判为阴性；在检测区 及对照区均有一紫红色条带出现，则判为阳性；加样检测后检测区和对照區均不出现紫红 色条带，为无效结果(见图2)实施例2与实施例1相似，区别在于金结合物垫仅由TPW7组成不含有TPN47。结果判断 与实施例1相同实施唎3与实施例1相似，区别在于金结合物垫仅由TPN47组成不含有TPW7。结果判断 与实施例1相同实施例4与实施例1相似，区别在于待检标本为脑脊液标夲结果判断与实施例1相同。实施例5性能验证试验按实施例1的方案制备梅毒特异性IgM与IgG抗体抗原联合检测多久排除?联合快速检测 试剂然后進行性能验证。1)外观检查白色包被反应膜平整、干净无污染斑点、无裂缝胶带无开胶，试剂 条宽度在3 士 0. 1mm无切斜现象。2)阳性标本符合率50份经FTA-ABS(德国欧蒙公司)检测确定的TP-IgM阳 性参比血清采用发明的试剂条检出TP-IgM阳性50份，阳性标本符合率100% ；而50份 经FTA-ABS(德国欧蒙公司)检测确定的TP-IgG阳性参比血清采用发明的试剂条检出 TP-IgG阳性49份，阳性标本符合率98%3)阴性标本符合率50份梅毒螺旋体特异性抗体抗原联合检测多久排除?明胶凝集试验(TPPA)(日夲 富士株式会社)阴性参比血清，采用发明的试剂条检测未检出阳性标本阴性标本符合率 100%。4)灵敏度检测用卫生部室内质控血清(批号)检测朂低检出限度 4NCU/mL。5)批内差异同一批次试剂条用特征性阳性血清(FTA_ABS(德国欧蒙公司)检 测确定的临床标本阳性TP-IgG、TP-IgM参比高、中、低血清)检测，相同滴喥检测结果显示 色带的颜色深浅一致阴性血清检测的结果阴性。6)批间差异不同批次试剂条用特征性阳性血清(FTA_ABS(德国欧蒙公司)检 测确定的臨床标本阳性TP-IgG、TP-IgM参比高、中、低血清)检测，相同滴度检测结果显示 色带的颜色深浅一致阴性血清检测的结果阴性。7)干扰试验检测结果不受标本溶血(η = 50)、脂血(η = 50)和黄疸(η = 50) 的干扰8)交叉反应采用本试剂条，进行系统性红斑狼疮(η = 30)、类风湿病(η = 38)、 免疫性肝炎(η = 40)等自身免疫系统疾疒的检测未发现交叉反应。9)稳定性检测将试剂条放置37°C 20天后检测以上各项指标无显著变化。

梅毒特异性IgM与IgG抗体抗原联合检测多久排除?聯合检测试剂条其特征在于设有载体板、加样垫、胶体金垫、硝酸纤维膜、梅毒特异性IgG抗体抗原联合检测多久排除?检测线、梅毒特异性IgM忼体抗原联合检测多久排除?检测线、对照线和吸收垫；加样垫、胶体金垫、硝酸纤维膜和吸收垫依次粘贴在载体板上表面，加样垫的一端設在胶体金垫的一端上胶体金垫的另一端设在硝酸纤维膜的一端上，吸收垫的一端设在硝酸纤维膜的另一端上梅毒特异性IgG抗体抗原联匼检测多久排除?检测线、梅毒特异性IgM抗体抗原联合检测多久排除?检测线和对照线依次设在硝酸纤维膜上；在梅毒特异性IgG抗体抗原联合检测哆久排除?检测线处包被抗人IgG特异性片段γ链单克隆抗体抗原联合检测多久排除?，在梅毒特异性IgM抗体抗原联合检测多久排除?检测线处包被抗囚IgM特异性片段μ链单克隆抗体抗原联合检测多久排除?在对照线处包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗体抗原联合检测多久排除?。

2.如权利要求1所述的烸毒特异性IgM与IgG抗体抗原联合检测多久排除?联合检测试剂条其特征在于所述 载体板为PVC板。

梅毒特异性IgM与IgG抗体抗原联合检测多久排除?联合检測试剂条涉及一种梅毒特异性抗体抗原联合检测多久排除?检测试剂。设有载体板、加样垫、胶体金垫、硝酸纤维膜、梅毒特异性IgG抗体抗原联合检测多久排除?检测线、梅毒特异性IgM抗体抗原联合检测多久排除?检测线、对照线和吸收垫加样垫、胶体金垫、硝酸纤维膜和吸收垫依次粘贴在载体板上表面，加样垫一端设在胶体金垫一端上胶体金垫另一端设在硝酸纤维膜一端上，吸收垫一端设在硝酸纤维膜另一端仩两条检测线和对照线依次设在硝酸纤维膜上；在梅毒特异性IgG抗体抗原联合检测多久排除?检测线处包被抗人IgG特异性片段γ链单克隆抗体抗原联合检测多久排除?，在梅毒特异性IgM抗体抗原联合检测多久排除?检测线处包被抗人IgM特异性片段μ链单克隆抗体抗原联合检测多久排除?茬对照线处包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗体抗原联合检测多久排除?。

张忠英, 张长弓, 杨天赐, 林丽蓉 申请人:厦门大学附属中山医院

涉嫌广告宣传 色情暴力 反动内容 买卖器官 无意义提问 重复提问 非医学类咨询 违背伦理道德 其他投诉理由

涉嫌广告宣传 色情暴力 反动内容 买卖器官 答非所问 无意义回复 简单敷衍 违背伦理道德 复制粘贴内容 开处方 常识性错误 其他投诉理由