为什么目标DNA需要在Southern blottingDNA杂交技术中变性?

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基因工程原理 Principle of Gene Engineering 学习内容 概论 DNA重组(限制性内切酶) 运输工具——基因克隆载体 目的基因的制备 目的基因导入受体细胞 外源基因的表达 基因工程的应用 基本要求 掌握基因克隆的基本工具特别是不同的载体。 克隆基因的基本方法 怎样利用基因重组技术研究基因的结构、表达和调控。 利用基因工程生产重组疍白基因工程在医药和农业上的应用。 能够设计一个基因克隆的程序 PCR技术基本原理和应用 能够根据酶切结果判读酶切图谱,以及判读DNA序列的能力 《基因工程》,龙敏南 等著科学出版社,普通高等教育“十一五”国家级规划教材 参考书 Gene cloning, T.A. Brown. Third edition. 基因工程原理吴乃虎编著,科學出版社 基因工程概论张惠展编著,华东理工大学出版社 植物基因工程原理与技术,王关林方宏筠主编,科学出版社 分子克隆实驗指南,J. Sambtook, EF Frish, T Maniatis, 金冬雁黎孟枫等译,科学出版社 第一章 绪论——基因工程概况 1.1引言 1.1.1基因工程含义 基因工程研究的基本路线 1.1.4基因工程发展史 (1)理论上的三大发现: 1.1.4基因工程发展史 (1)理论上的三大发现: 1.1.4基因工程发展史 (1)理论上的三大发现: DNA分子的体外切割与连接技术1970年,Smith等在流感嗜血杆菌中分离纯化了核酸限制性内切酶HindⅢ;1972年EcoR Ⅰ。 DNA分子的核苷酸序列分析技术 基因工程载体pBR322和pUC13等载体 Cohen发现质粒pSC101,并作为基洇工程的载体使用. (3)基因工程的诞生 Cohen体外重组实验的意义: 1977年E. coli中合成了人生长激素基因。 胰岛素基因在大肠杆菌中表达 1982年,培育出叻超级鼠 1985年Horsch发明了植物基因工程的基本方法:叶圆盘法,并获得转基因植株 1990年,患有遗传免疫疾病的4岁女孩接受了基因疗法 1990年,Perlak 将B.T.基因导入棉花获得抗虫棉 1991年,美国开始人类基因组计划 1997年,“多利”绵羊诞生 1.2 基因工程研究内容 琼脂糖凝胶电泳(0.2-50kb DNA)聚丙烯酰胺凝胶电泳(1-1000bp DNA) 原理:带有互补的特定核苷酸序列的单链DNA或RNA混合,互补区段会退火形成双链结构 1985年,美国Mullis:体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法。成果发表在Science上 1.4 基因克隆需要特殊的工具和技术 运输工具: 细菌质粒 病毒染色体 DNA操作技术 纯化DNA 剪切DNA分子 分析DNA片段大小连接DNA分子 将DNA转入受体细胞重组子的鉴定 1.5 基因工程的意义 大规模的生产生物分子 设计构建新物种 搜寻、分离和鉴定生物体尤其是人体内的遗传信息。 医药 重组药物 基因治疗 检测遗传疾病、病原 农业 抗病虫 提高品质 提高花卉的观赏价值 抗逆性 家畜:瘦肉比;饲料利用率;加快生长 主要基因工程产品的研制、开发、上市时间 (2)核酸的分子DNA杂交技术 1968年华盛顿卡内基学院 Roy Britten等 常见的分子DNA杂交技术: Southern blotting: DNA DNA/RNA

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