酵母培养能用苹果酸怎么办调节pH吗

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2020-04-08 13:46 标签： 苹果酸怎么办

【摘要】：本论文以一株高产丙酮酸的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)TAM为研究对象,运用代谢工程策略,从构建L-苹果酸怎么办的胞质还原路径(rTCA路径)、增强L-苹果酸怎么办的外转运、解除C4-二羧酸转运蛋皛的泛素化修饰、优化代谢路径的平衡等四个方面调控碳代谢流,从而实现L-苹果酸怎么办的高效生产主要研究结果如下:1.研究了Afpyc、Afmdh、Ropyc和Romdh基因組合表达对酿酒酵母积累L-苹果酸怎么办的影响。通过敲除酿酒酵母TAM的色氨酸(trp1)及组氨酸(his3)基因,构建了一株三重营养缺陷型(尿嘧啶、色氨酸、组氨酸)菌株thTAM以此为出发菌株导入黄曲霉rTCA路径的关键基因Afpyc、Afmdh,重组菌株W1001的L-苹果酸怎么办积累量为1.85 g·L-1,但共表达米根霉rTCA路径的关键基因Ropyc、Romdh的重组菌株W2001及共表达基因Ropyc、Afmdh的重组菌株W3001均不能积累L-苹果酸怎么办。而共表达基因Afpyc和Romdh的重组菌株W4001的L-苹果酸怎么办产量由1.85 g·L-1提高到2.5 g·L-12.研究了外转运系統的强化对L-苹果酸怎么办生产的影响。菌株W4001的胞内L-苹果酸怎么办浓度达到9.52 mg·gDCW-1,较对照组W0001提高了2.28倍为提高L-苹果酸怎么办的外转运水平,过量表達源于大肠杆菌(DcuC)、黄曲霉(Afmae)和栗酒裂殖酵母(Spmae)的C4-二羧酸转运蛋白,其中基因DcuC及Afmae的表达使得L-苹果酸怎么办的产量分别下降37.33%和41.78%,而Spmae的过量表达使得L-苹果酸怎么办的产量由2.5 g·L-1提高到5.15 g·L-1。为了进一步提高L-苹果酸怎么办的产量,解除转运蛋白Spmae的泛素化修饰,将Spmae的三个高置信度泛素化位点进行定点突變(K395R、K409R和K416R)后过量表达,其L-苹果酸怎么办产量提高到10.5 g·L-13.研究了rTCA路径中基因的表达强度对L-苹果酸怎么办积累的影响。结果发现仅有两个菌株的L-苹果酸怎么办积累量高于对照组W4401,其中菌株W4409的L-苹果酸怎么办产量最高达到13.2 g·L-1,生产强度为0.16 g·L-1·h-1,DCW为2.42 g·L-1,比W4401分别提高了26.2%、33.3%和3.0%分析原因,W4409L-苹果酸怎么办高產的原因主要由于Afpyc的低表达导致进入TCA循环用于菌体生长的碳流增加,菌体浓度提高。同时Spmae*的高表达将胞质中的L-苹果酸怎么办及时的转运出细胞外,提高了单位细胞生产L-苹果酸怎么办的能力4.研究了接种量和硫胺素添加量对L-苹果酸怎么办积累的影响。当初始接种细胞干重为2.31

【学位授予单位】：江南大学
【学位授予年份】：2016
【分类号】：TQ921


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