本发明涉及如所附权利要求中所述的各种制备恩替卡韦的方法恩替卡韦(式21化合物)具有下列结构式
本发明还涉及可用于制备恩替卡韦的各种中间体，以及制备这些中间体嘚方法
本发明还涉及用于将恩替卡韦分离和纯化的一种树脂吸附法及其中的中间体。
发明内容 缩写 为便于参考本申请中使用以下缩写，它们具有下面给出的含义∶ Ac ＝酰基； AP ＝HPLC面积百分数； Bn ＝苄基； BHT ＝26-二叔丁基-4-甲基苯酚； CHP ＝氢过氧化枯烯，或α，α-二甲基苄基过氧化氢； DCM ＝二氯甲烷； de ＝非对映体过量； DBU ＝18-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯； DEAD ＝偶氮二甲酸二乙酯；
DEMA ＝乙酸二乙氧基甲基酯； DIPT ＝(-)-酒石酸二异丙酯； DMAP ＝4-N，N-二甲基氨基吡啶； DMF ＝NN-二甲基甲酰胺； DiPMA＝乙酸二异丙氧基甲基酯[(iPr-O)2CHOAc]； DMSO ＝二甲基亚砜； ee ＝对映体过量； Et ＝乙基； EtOAc＝乙酸乙酯； Et3N ＝三乙胺； FMSA＝氟代甲烷磺酸； HCl ＝盐酸； IPA ＝异丙醇；
K2CO3 ＝碳酸钾； KF ＝氟化钾； KHCO3 ＝碳酸氢钾； KHMDS ＝六甲基二硅氮化钾或二(三甲基甲硅烷基)氨基化 钾； KOH ＝氢氧化钾； KOtBu ＝菽丁醇钾； LAH ＝氢化锂铝； LiOH＝氢氧化锂； m-CPBA ＝间氯过苯甲酸； MeOH＝甲醇； MOP ＝2-甲氧基-2-丙氧基缩醛； MSA ＝甲磺酸； MTBE＝甲基叔丁基醚； NaBH4 ＝硼氢化钠；
Na2CO3 ＝碳酸钠； NaHCO3 ＝碳酸氢钠； NaH ＝氢化钠； NaOH＝氢氧化钠； NaOtBu ＝叔丁醇钠； NMP ＝N-甲基-2-吡咯烷酮； TMS ＝三甲基甲硅烷基； PPTS＝4-甲苯磺酸吡啶?或对甲苯磺酸吡啶?； PTSA＝对甲苯磺酸； Red-Al?或RED-AL?＝二(2-甲氧基乙氧基)氢化铝钠； TBAH＝氢氧化正四丁铵； TBHP＝叔丁基过氧化氢；
TEOF＝原甲酸三乙酯； TFA ＝三氟乙酸； THF＝四氢呋喃； Ti(O-iPr)4 ＝异丙醇酞(IV)； TiPOF ＝原甲酸三异丙酯； TMOF ＝原甲酸三甲酯； 定义
对于本申请来说，包括所附的权利要求以下术语具有下面陈述的各自含义。应当清楚当文中提到某个通用术语例如酸、碱、氧化剂等时，本领域技术人员可以从以下定义中给出的此类试剂以及随后的说明书中所述的其它试剂中或者从本领域参考文献中查到的试剂中，作出适当的选择
“酸酐”通常指与水或溶剂反应形成酸的化合物，包括式R-C(＝O)-O-C(＝O)R’的羧酸酐其中R和R’选自如下定义的烷基或芳基，更优选的是其中R和R’选自甲基和乙基。
“酸”是指含有氢并且在水或溶剂中离解产生氢阳离子的化合物以及Lewis酸，包括但不限于以下的酸盐酸硫酸，磷酸乙酸，三卤乙酸(例如TFA)溴化氢，马来酸磺酸类如甲苯磺酸和樟脑磺酸，丙酸类如(R)-氯丙酸邻氨甲酰苯甲酸类例如N-[(R)-1-(1-萘基)乙基]邻氨甲酰苯甲酸，酒石酸类如L-酒石酸和二苄基-L-酒石酸乳酸类，樟脑酸類天冬氨酸类，香茅酸类BCl3，BBr3等等因此，该术语包括弱酸例如乙醇酸和硫化氢；有机强酸，例如甲磺酸、三氟乙酸等；等等
“活囮的甲基碳酸试剂”是指能够由醇制备碳酸甲酯的试剂。非限制性实施例包括氯甲酸甲酯、焦碳酸二甲酯等
这里使用的“烷基”一词，除非另外说明包括有1-2个碳原子、更优选1-8个碳原子、最优选1-4个碳原子的直链或支链烷基。该术语“烷基”包括任选有最多达4个(更优选0-2个)选洎下述不干扰取代基的取代基团的烷基术语“低级烷基”是指有1-4个碳原子的烷基。当对于烷基或其它基团使用下标时该下标指所述基團可以含有的碳原子数。例如术语“C1-4烷基”指1-4个碳原子的烷基。结合在其它基团中的烷基部分也是直链或支链的除非另外特地说明。當烷基一词作为前缀与另一基团联合使用时例如在烷基芳基中，这意味着如上定义的烷基以二价部分(即亚烷基)的形式存在，形成与另┅指定基团的联结例如，烷基芳基包括苄基等
这里所用的“烷氧基”一词包括通过一个氧原子键合的以上定义的烷基，即-O-烷基
“碱金属盐”是指与碱金属形成的盐，优选钠、锂或钾盐
“烯丙基”指基团-CH2-CH＝CH2，以及任选具有下面定义的一个或多个(优选0至1个)不干扰取代基嘚此类基团
“抗氧化剂”是指能减慢或抑制氧化反应速度的化合物或络合物。示例性的抗氧化剂可以包括但不限于β-胡罗卜素ZnO2，抗坏血酸芳香胺，酚类醌类包括BHT，柠檬酸维生素E，苯甲酸磷酸等。
“芳基”包括在环部分有6-12个碳原子的单环或双环芳族基团即，苯基和萘基以及杂芳基团，例如有至少一个杂原子和至少一个含碳原子环的4-7元单环、7-11元双环或10-15元三环芳族环系。单环杂芳基团的实例包括吡咯基、吡唑基、吡唑啉基、咪唑基、?唑基、异?唑基、噻唑基、噻二唑基、异噻唑基、呋喃基、噻吩基、?二唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、三嗪基等双环杂芳基团的实例包括吲哚基、苯并噻唑基、苯并二氧杂环戊烯基、苯并?唑基、苯并噻吩基、喹啉基、四氢异喹啉基、异喹啉基等。“芳基”一词包括任选具有最多4个(优选0-2个)不干扰取代基的芳基
这里使用的术语“碱”包括氢氧化物或醇盐，氢化物或者诸如氨之类的化合物，它们在水或溶剂中接受质子例如，碱的实例包括但不限于碱金属氢氧化物和醇盐(即，MOR其ΦM是碱金属例如钾、锂或钠，R是氢或如上定义的烷基更优选R是直链或支链的C1-5烷基，例如包括但不限于氢氧化钾、叔丁醇钾、叔戊醇钾、氫氧化钠、叔丁醇钠、氢氧化锂等)；其它的氢氧化物例如氢氧化镁(Mg(OH)2)或氢氧化钙(Ca(OH)2)、氢氧化钡(Ba(OH2))；碱金属氢化物(即MH，其中M的定义如上例如包括但不限于钠、钾和锂的氢化物)；烷基化的二硅氮化物，例如六甲基二硅氮化钾和六甲基二硅氮化锂；碳酸盐，如碳酸钾(K2CO3)、碳酸钠(Na2CO3)、碳酸氢钾(KHCO3)和碳酸氢钠(NaHCO3)；氢氧化烷基铵例如氢氧化正四丁铵(TBAH)；等等。
除非另外说明“苄基”包括基团-CH2-苯基，以及在该苄基的甲基或苯基部汾上任选含有不干扰取代基的此类基团
“苄基卤”是指在其烷基部分上有卤取代基的苄基，即Ph-CH2-X其中X是卤素，Ph代表下面定义的苯基环
“苄氧基”指基团-O-苄基，其中苄基部分与上一段定义的相同
这里使用的“手性胺”或CA是指旋光活性的胺或胺混合物，包括胺的右旋或左旋形式优选该手性胺含有纯或基本上纯的一种旋光异构体，但旋光性混合物(即非等摩尔的混合物)也可以考虑。如果文中提到“纯手性胺”它意在包括更广含义的“手性胺”。例如这些胺包括但不限于(1R，2R)-(+)-12-二苯基乙二胺，(R)-(-)-1-环己基乙胺D-苏-2-氨基-1-(4-硝基苯基)-1，3-丙二醇(1S，2S)-(+)-12-②氨基环己烷，脱氢枞胺(1R，2R)-12-二氨基甲基环己烷，辛可尼定和辛可宁
“非对映选择性环氧化”是指其中优先形成一种非对映异构的环氧化物的反应。术语“非对映选择性环氧化”因此包括Sharpless环氧化其中烯丙型醇的环氧化优先形成一种对映体。然而这里使用的术语“非對映选择性环氧化”还更广地包括非对映异构化合物的环氧化或者非消旋化合物的环氧化。“非对映选择性环氧化”一词意在包括Bonini和Righi在“A Critical Outlook and
“卤素”或“卤”指F、Cl、Br或I优选Cl或I。
“氢化物试剂”是指能放出H-离子的试剂氢化物试剂的实例包括但不限于氢化锂铝(LiAlH4)，硼氢化钠(NaBH4)Red-Al?(氫化二[2-甲氧基乙氧基铝]钠)，硼氢化锌氢化二异丁基铝，硼氢化钠-氯化铈三乙基硼氢化锂，9-BBN氢化锂9-BBN吡啶，硼烷-硫醚络合物5，5-二苯基-2-甲基-34-丙烷-1，32-氧氮硼杂环戊烷(Corey试剂)，氢化三叔丁氧基铝锂氰基硼氢化钠，三仲丁基硼氢化锂(L-Selectride?)氯化二异丁基铝，硼烷-四氢呋喃络合粅等
“氢过氧化物”是指含有氢过氧化物部分HO2-的化合物或络合物，例如式(RpOOH)化合物其中Rp可以是氢(例如，过氧化氢H2O2)或者可以是烷基、取玳的烷基、芳基、烷芳基、取代的芳基或者取代的烷芳基或其它基团(包括但不限于其中苄基的甲基部分任选被取代的化合物)。氢过氧化物包括例如α，α-二甲基苄基过氧化氢、叔丁基过氧化氢等。
“羟基保护基团”是指本领域技术人员承认其适合保护烷基或本文所述的环化系统上的-OH取代基的基团它们在本领域技术人员已知的去保护条件下可以去除，这些条件如Greene和Wuts在最新一版的Protecting Groups in Organic
Synthesis中所述在本文中引用作为参栲。作为示例说明羟基保护基团的非限制性实例包括醚保护基(例如苄基醚，甲硅烷基醚例如叔丁基二甲基甲硅烷基醚)酯(例如苯甲酸酯，乙酸酯)和缩醛(例如MOP)。
“酒石酸的纯手性二酯”包括酒石酸烷基酯的单独的非对映体包括酒石酸二乙酯和酒石酸二异丙酯。
“金属催囮剂”是指能作为催化剂起作用的包含金属元素的化合物和络合物包括但不限于“过渡金属催化剂”。金属催化剂包括但不限于异丙醇鈦(IV)钯盐如钯(O)催化剂，例如四(三苯膦)合钯三氟甲磺酸铜(I)，乙酸铑(II)Rh6(CO)16等等。
“不干扰取代基”是指与本文中确定的化合物或络合物结合的取代基就特定化合物或络合物的官能度或要达到的目标而言，该取代基不会使该化合物或络合物不起作用而且它与文中详述的反应序列相容。这些取代基可以由本领域技术人员根据具体的反应步骤和要实现的功能来选择不干扰取代基的实例可以包括但不限于以下基团烷基，卤素氰基，硝基三氟甲基，三氟甲氧基-OR，-SR-C(＝O)R，-CO2R芳基，烷芳基C3-7环烷基，-NRR’2-NRC(＝O)R’，-SO(q)R”-NRSO(q)R”，-SO(q)R”-C(＝O)NRR’等；以及被1-4个(优选1-2個)卤素，氰基硝基，三氟甲基三氟甲氧基，-OR-SR，-C(＝O)R-CO2R，芳基烷芳基，C3-7环烷基-NRR’2，-NRC(＝O)R’-SO(q)R”，-NRSO(q)R”-SO(q)R”，-C(＝O)NRR’等取代的烷基其中R和R’是如上定义的氢、烷基、苄基或芳基，R”是如上定义的烷基、苄基或芳基q是1、2或3。
“原甲酸酯衍生物”是指能用来从连位二醇部分制備二氧杂环戊烷或用来从例如5，6-二氨基嘧啶衍生物上的连位二胺制备咪唑环的试剂非限制性实例包括原甲酸三乙酯、原甲酸三甲酯、原甲酸三异丙酯、乙酸三乙氧基甲基酯和乙酸二异丙氧基甲基酯。
“氧化剂”或“氧化源”指本领域已知的能将分子中的官能基从低氧化態转化成高氧化态的任何化合物或络合物例如，氧化剂可以包括但不限于m-CPBA过氧化氢，AcOH中的AcOOH过氧一硫酸钾，高碘酸钠过碳酸钠，高錳酸钾氧化钌等。氧化剂可以在一种或多种添加剂如KF、KHCO3、NEt3、AcONa等存在下使用本领域技术人员将会理解，添加剂可以根据使用的具体氧化劑和反应条件来选择
“过酸”包括但不限于单过氧邻苯二甲酸镁(MPPA)、过苯甲酸和过乙酸。
“苯基”包括可任选有最多4个(优选0至2个)以上定义嘚不干扰取代基的苯基环当苯基一词作为另一词的后缀使用时，例如在烷基苯基或烷氧基苯基中它意味着该苯基通过另一个明确指明嘚二价基团连接。例如烷基苯基包括苄基、苯基乙基等。
“还原剂”是指本领域已知的能将分子中的官能基由一氧化态转化成较低的氧囮态的任何化合物或络合物还原剂的实例包括但不限于NaBH4，LAH硼氢化锂，氢化二异丁基铝氢化二(2-甲氧基乙氧基铝)钠等。“还原剂”一词將包括上面提到的“氢化物试剂”
“非亲核性强碱”是指一种不起亲核体作用的非水碱，例如二(三甲基甲硅烷基)氨基化钾二异丙基氨基化锂，二(三甲基甲硅烷基)氨基化钠氢化钾、锂或钠。
“叔胺碱”指三烷基胺例如三乙胺、N，N-二甲基乙胺、二异丙基乙胺(Hunig碱)或四亚甲基二胺(TMEDA)或是含氮的杂环化合物，例如吡啶
“三甲基甲硅烷基化试剂”是指一种能从醇制备三甲基甲硅烷基醚的试剂。非限制性实例包括三甲基氯硅烷三氟甲磺酸三甲基甲硅烷基酯等。
另外应当清楚，在本发明的制备方法和权利要求中在对于某种试剂使用代词“一”时，例如“一种碱”、“一种金属催化剂”、“一种氢过氧化物”等意味着“至少一种”，因此在合适时要包括单个试剂及试剂的混合物。例如一个反应步骤包括使用“一种碱”，或者例如涉及使用“选自氢氧化钾、叔丁醇钾、叔戊醇钾、氢氧化钠、叔丁醇钠、氢氧化锂的一种碱”这包括使用氢氧化钾作为碱，或者在适当时使用氢氧化钾与所述的可供选择的一种或多种其它的碱构成的混合物。夲领域技术人员根据反应步骤和条件及要达到的结果会做出适当的选择。
制备方法 化合物恩替卡韦及其新的中间体可以用以下反应方案Φ所述的示例方法制备这些反应的试剂和步骤实例在以后出现或在上面叙述过。起始物是市售商品或者容易由本领域普通技术人员制备溶剂、温度、压力、具有所要基团的起始物以及其它反应条件，容易在适当时由本领域普通技术人员选定
本发明的方法A包括式66的酯的淛备，该酯是用于制备恩替卡韦21的优选的中间体或起始物在式66的酯中，R是C1至C4烷基或苄基优选甲基；Ra是烯丙基、苯基、C1至C6烷基苯基或C1至C6烷氧基苯基，更优选Ra是选自苯基、C1至C3烷基苯基和C1至C3烷氧基苯基；Rb是C1至C6烷基优选甲基。该酯可以用能以高的非对映体纯度和对映体纯度形荿酯的任何方法制备一个优选的步骤示于方案1，其中环戊二烯钠62用甲硅烷基化试剂例如Ra(Rb)2SiY处理其中Y是一个离去基团，例如苯基二甲基氯矽烷其中Ra是苯基、Rb是甲基、Y是Cl。反应可以在溶剂例如MTBE和/或THF进行形成的硅烷部分作为在合成方法后期可以显露出来的掩蔽的羟基起作用。甲硅烷基化反应的产物随后可以利用与乙烯酮例如由二氯乙酰氯和合适的碱(例如Et3N、NaOH、KOH、NaHCO3、KHCO3、Na2CO3、K2CO3、TBAH等)产生的乙烯酮，进行2+2环加成反应来進一步加工得到式63的环丁酮。随后可以用合适的碱(例如Et3NNaOH，KOHNaHCO3，KHCO3Na2CO3，K2CO3TBAH等)使环丁酮开环，形成的中间体用合适的还原剂(例如NaBH4)还原得到式64的羧酸。
羧酸64的对映体的拆解可以通过与手性胺(CA)形成盐并分离所形成的非对映盐来完成式64羧酸的一种非对映的铵盐混合物优选用R，R-(-)-2-氨基-1-(4-硝基苯基)-13-丙二醇制备。本领域普通技术人员会理解可以使用其它的手性胺实现式64羧酸的对映体拆解。这些胺包括例如(1R2R)-(+)-1，2-二苯基乙②胺(R)-(+)-1-环己基乙胺，D-苏-2-氨基-1-(4-硝基苯基)-13-丙二醇，(1S2S)-(+)-1，2-二氨基环己烷脱氢枞胺，(1R2R)-1，2-二氨基甲基环己烷辛可尼定和辛可宁。
形成的非对映的盐的分离可以用本领域普通技术人员已知的任何分离步骤进行例如色谱法或结晶法。非对映的盐的分离优选用结晶法进行例如，非对映体富集的式65A的铵盐(其中使用的手性胺是RR-(-)-2-氨基-1-(4-硝基苯基)-1，3-丙二醇)可以通过自EtOH中结晶来分离用此方法分离出的式65A的铵盐可以有98％的囮学纯度和98％de。式65A的铵盐向式66的酯(R是烷基)的转化可通过在酸性溶液中(例如MeOH和一种合适的酸如硫酸或对甲苯磺酸，或HCl在二氯甲烷中)加热来唍成或者是，式65A化合物可以转化成游离酸它随后在PTSA存在下用醇(例如MeOH)在回流条件下酯化，得到化合物66
本发明的方法B包括用以下步骤制備恩替卡韦21用取代的鸟嘌呤衍生物与式72的环氧化物偶合，制得碳环核苷(式73化合物)然后将其加工成化合物21。方法B的一个实施方案示于方案2Φ在该方法中，优选用于制备式72环氧化物的一种起始物是式66的酯(它可按方案1所述制备)式66化合物可以被环氧化，其酯基可被还原以提供具有高的非对映体纯度的式72环氧化环戊烷例如，式66化合物可以作为非对映选择性环氧化反应的起始物在一项实施方案中，在环氧化和還原步骤之后以至少96％de形成了式72的环氧化环戊烷。非对映选择性环氧化反应是用酒石酸的纯手性二酯、一种氢过氧化物和一种金属催化劑(例如过渡金属催化剂)进行的优选该纯手性酯是DIPT，氢过氧化物是TBHP或CHP金属催化剂是异丙醇钛(IV)。该反应优选在惰性溶剂如无水DCM或甲苯中进荇在美国专利4,471,130、4,594,439和4,900,847中描述了进行催化环氧化反应的合适方法，这些文献结合在本文中作为参考在后处理之后，粗产物可不作进一步纯囮用于合成
将环氧化反应的粗产物用选择性还原酯基成醇的还原剂处理，例如NaBH4、LAH、硼氢化锂、氢化二异丁基铝、氢化二(2-甲氧乙氧基铝)钠等在一项实施方案中，该反应中使用的还原剂是在IPA中的NaBH4该还原反应生成式72的环氧化环戊烷。
随后可以将式72的环氧化环戊烷在偶极非质孓溶剂如DMF中与式28嘌呤化合物(其中X是Cl、I或苄氧基(BnO))的碱金属盐(例如锂盐)一起加热至例如约80℃以制备式73化合物。例如2-氨基-6-O-苄氧基嘌呤的锂盐昰利用碱如LiOH或LiH处理制得。这一制备碳环核苷的偶合反应的优点在于它提供高的N-9对N-7比(例如N-9∶N-7＞20∶1)，可以方便地进行后处理及纯化步骤并獲得实用产率的式73化合物。例如经水后处理，其中X是BnO的式28嘌呤化合物和式72的环氧化环戊烷的二氯代物全部偶合反应的粗产物可以通过自EtOAc-巳烷溶液中简单地重结晶进行纯化以65％的产率得到式73化合物。
其中X是BnO的式73化合物随后可以通过将连位二醇部分转化成烯转化成式71化合粅。类似地其中X是Cl或I的式73化合物可通过连位二醇部分转化成烯，转化成式92化合物在一项实施方案中，式73化合物的连位二醇部分通过一個两步程序转化成如同化合物71和92中的烯在第一步中，式73化合物用原甲酸酯衍生物(例如DEMADiPMA，TiPOFTEOF或TMOF)在酸(如PPTS或TFA)存在下处理。该反应优选在惰性溶剂例如DCM、甲苯和叔丁基甲基醚中于室温下处理足够的时间以便形成含有二氧杂环戊烷的二氯代物全部非对映混合物的产物。在第二步Φ将二氧杂环戊烷非对映体混合物与乙酸酐一起，优选在乙酸和一种抗氧化剂(例如BHT)存在下加热形成烯。在其中X是BnO的实施方案中由乙酸酐处理得到的粗产物随后可与酸，例如无机酸水溶液或有机酸水溶液如HCl或MSA，一起加热以便将6-苄氧基(以及在乙酸酐处理中形成的2-N-乙酰基)水解，形成式71的亚甲基化合物或其盐(例如MSA或HCl盐)式71和92中间体可以通过用酸处理以盐的形式分离，这些酸的实例包括HClMSA，(1S)-(+)-10-樟脑磺酸(R)-氯丙酸，N[(R)-1-(1-萘基)乙基]邻氨甲酰苯甲酸L-酒石酸，二苄基-L-酒石酸L-乳酸，(1R3S)-樟脑酸，L-天冬氨酸(S)-香茅酸等。
由化合物71制备最终化合物21可以通过将硅烷部分转化成羟基部分来完成由转化可以通过将硅烷部分脱甲硅基化(protodesilylation)，随后用氧化源(例如过氧化氢)氧化来实现脱甲硅基化步骤可利用與三氟化硼-乙酸络合物，或与Bronsted酸如TFA、MSA、FMSA、或三氟硼酸在惰性溶剂(如DCM)中反应来完成或者是，可以如以上方案6中所述地用碱或酸实现脱甲硅基化在脱苄基化(在某些实施方案中，这可以在脱甲硅基化步骤中完成例如在使用MSA或FMSA的情形)后，形成式91的脱甲硅基化的中间体
随后可以將脱甲硅基化的中间体91氧化氧化剂可以根据用来进行脱甲基化的试剂来选择。例如当使用三氟化硼-乙酸络合物时，该化合物可以用过氧化氢和KHCO3氧化以形成目标化合物21；而当使用的是Bronsted酸时，化合物91可以用过氧化氢、KHCO3和KF氧化上面提到的其它的酸和氧化剂也可以使用。或鍺是甲硅烷基转化成羟基可以如下面方案6中所述来完成，可用于将甲硅烷基转化成羟基的其它方法在FlemingI(Chemtracts-Organic
Chemistry1996，91-64)和Jones，G.R等(Tetrahedron1996，52)中有描述，该②文献在这里引用作为参考式21化合物可以进一步纯化，例如自水中重结晶和/或按以下方法K中所述利用树脂纯化。
在方法B的另一实施方案中与环氧化环戊烷72偶合得到化合物73的嘌呤28不是2-氨基-6-苄氧基嘌呤，例如2-氨基-6-氯嘌呤或2-氨基-6-碘嘌呤在此实施方案中，化合物73在用原甲酸酯、酸等处理时转化成化合物92，它在脱甲硅基化和氧化时转化成化合物93在此情形中使用2-氨基-6-氯嘌呤或2-氨基-6-碘嘌呤，可以用碱或酸水溶液(优选碱水溶液)另行处理以便将化合物93的卤基转化成6-氧代部分例如，NaOH水溶液可以用来将式93化合物转化成式21化合物
式66的酯也可以用方法C嘚方法转化成式21化合物。一项实施方案示于方案3与方法B不同，方法C中环戊烷的二氯代物全部环氧化反应是在酯部分已被还原后进行的茬方法C中，式66的酯(R＝烷基)的伯醇部分被保护基团保护例如通过用2-甲氧基丙烯和催化数量的酸(例如PPTS)在惰性溶剂(如甲苯)中处理而被MOP保护，生荿式74化合物化合物74的羧酸酯部分可以用氢化物试剂(优选Red-Al?或LAH)还原。在一项实施方案中化合物74的酯部分被还原，优选在加入适当的碱(例洳叔胺碱如Et3N)之后在同一反应容器中还原，得到式75化合物在另一实施方案中，74的酯部分在后处理之后用氢化物试剂还原得到化合物75。所形成的式75化合物的醇部分先用能耐受为除去MOP基团所使用的水解条件的保护基团保护例如，式74化合物的醇部分可以用碱(例如KOtBuKHMDS，NaH使用50％NaOH的相转移催化剂条件)和苄基卤(例如苄基溴或苄基氯)优选在溶剂如甲苯或THF中处理，以便将醇部分以苄基醚形式保护然后可以通过加入酸沝溶液(例如1N
HCl)将MOP缩醛水解，得到式76的烯丙型醇本领域已知的其它保护基团可以在前面一般定义中提到的文献，例如Greene和Wuts的文献中查到
式76的烯丙型醇作为非对映选择性的环氧化反应的起始物起作用，该反应以高的非对映体纯度形成产物式77环氧化环戊烷例如，该环氧化反应可鉯用酒石酸的纯手性二酯、氢过氧化物和金属催化剂(例如过渡金属催化剂)进行或者是，非对映选择性环氧化可以用过酸(例如MPPA)如方案14和实施例12中所述地进行优选用纯手性酯DIPT，氢过氧化物TBHP或CHP以及金属催化剂Ti(O-iPr)4进行非对映环氧化反应。该反应优选在惰性溶剂如甲苯、二氯甲烷等中进行在一项实施方案中，以至少96％de形成式77的环氧化环戊烷
式77的环氧化环戊烷随后可以与其中X是Cl、I或BnO的式28的嘌呤化合物的碱金属盐茬偶极非质子溶剂(例如DMF)中反应(例如在高温下，优选在约80℃下)制得式78化合物。优选地式28的嘌呤化合物是2-氨基-6-苄氧基嘌呤。该2-氨基-6-苄氧基嘌呤是市售商品或者可以从6-氯鸟嘌呤和苯甲醇的钠盐制备(例如在苯甲醇、甲苯和MeOH中用NaOH处理，或在EtOH/水中用苯甲醇的钠盐、苯甲醇处理)碱金属盐可以通过2-氨基-6-O-苄氧基嘌呤与例如LiH或LiOH反应原位产生。其中X是苄氧基的式78粗制化合物可以被分离和纯化例如，粗制化合物78可以通过加叺IPA和水被分离然后用本领域已知的溶剂或溶剂混合物重结晶纯化。
式78化合物随后可以用与方法B中将式73化合物转化成式21化合物使用的类似反应序列转化成式21化合物，这将在下面的方案4、5和6中进一步说明
方案4描述了化合物78A(其中X是OBn的化合物78)转化成式21化合物的方法。化合物78A可鉯用原甲酸酯衍生物(例如DEMA、DiPMA、TMOF、TiPOF、TEOF等)在惰性溶剂(如甲苯、DCM、MTBE等)中如方案2中所述地在催化量的酸(如TFA或PTSA)或酸催化剂(如PPTS等)存在下处理，形成含囿二氧杂环戊烷非对映体混合物的产物例如化合物101和103。二氧杂环戊烷101和103的非对映体混合物可以与乙酸酐一起加热优选有乙酸和抗氧化劑(如BHT)存在，形成式105的烯粗产物105随后可与酸(例如盐酸或MSA)在合适的溶剂(如MeOH和水)中加热，使6-苄氧基和N-乙酰基水解得到式79的亚甲基化合物。中間体79可以通过用酸处理以盐的形式分离这些酸包括HCl，MSA(1S)-(+)-10-樟脑磺酸，(R)-氯丙酸N-[(R)-1-(1-萘基)乙基]邻氨甲酰苯甲酸、L-酒石酸、二苄基-L-酒石酸、L-乳酸、(1R，3S)-樟脑酸L-天冬氨酸、(S)-香茅酸等。在一项实施方案中中间体79或其盐通过重结晶进一步纯化，例如用NaOH在有机溶剂中处理中间体79的盐并结晶，然后进行下一步骤
随后可通过将硅烷部分转化成羟基部分，完成由化合物79或其盐制备最终的式21化合物此转化反应可以通过用选定嘚试剂将硅烷部分脱甲硅基化以得到中间体化合物91，再进行氧化来实现脱甲硅基化可以用三氟化硼-乙酸络合物或Bronsted酸在惰性溶剂中(例如MSA在②氯甲烷中)完成。氧化可以如方案2中所述进行使用氧化剂和适当选择的添加剂(即，根据用来脱甲硅基的试剂和氧化剂选定)进行例如，茬Bronsted酸的情形可以在KHCO3和KF存在下使用过氧化氢，以得到化合物21化合物21可以进一步利用从水中重结晶和/或利用下面方法K中所述的树脂纯化法進一步纯化。
方案5描述了另一种制备化合物21的方法其中方案3的嘌呤28是2-氨基-6-氯嘌呤或2-氨基-6-碘嘌呤，与环氧化环戊烷77偶合生成化合物78B(其中X昰Cl或I的化合物78)。如方案4中所示化合物78B可以用原甲酸酯衍生物处理，形成含有二氧杂环戊烷102和104的非对映体混合物的产物它可以与乙酸酐┅起加热，优选有乙酸和抗氧化剂(例如BHT)存在形成烯106。产物106随后如方案4中所述与酸(如HCl或MSA)一起加热，使酰基水解并形成化合物94或其盐留丅6-位的X基团。如方案4中所述地进行脱甲硅基化脱苄基化和氧化，得到中间体化合物95化合物94和95可以如先前对化合物79所述地那样用酸处理，以其盐的形式被分离化合物95随后可以用碱或酸的水溶液(优选碱水溶液)处理，将化合物95的卤基转化成化合物21的6-氧代部分可以理解，与方法C(a)相比方法C(b)可以用一附加步骤将化合物78转化成21。
方案6描述了由方案4中所示的式79化合物制备化合物21的另一方法与方案4相比，此方案中使用了不同的碱或酸实现化合物79脱甲硅基化随后氧化和去苄基化，转化成化合物21化合物79用碱，如氢氧化物例如NaOH或KOH或醇盐如KOtBu，在极性非质子溶剂例如DMF、DMSO或NMP中处理或用强酸如TFA处理，并以足以向中间体110转化的温度和时间加热化合物110随后可用过氧化氢在KHCO3和KF存在下于溶剂(如MeOH)Φ氧化，得到中间体114中间体114可以用Lewis酸(如BCl3，BBr3等)或Bronsted酸(如MSATFMSA等)在溶剂(如DCM)中处理去苄基化，反应混合物可以用碱例如NaOH中和以得到化合物21化合物21鈳以通过自水中重结晶和/或下述的树脂纯化进一步纯化。
在本发明的方法D中式66的酯(方案1)可以用不同的合成方法转化成式21化合物。在方法DΦ式66的酯被氨基羟基化，形成式67的手性?唑烷酮在一系列合成步骤之后，制得式70化合物嘧啶碳环核苷该嘧啶碳环核苷可进一步加工荿含嘌呤的化合物，即式71的亚甲基化合物它随后利用方法B和C的最后步骤中所述的氧化步骤转化成化合物21。方法D的一项实施方案示于方案7
使用氨基羟基化条件将式66的酯转化成式67的?唑烷酮。氨基羟基化步骤与LiG；Angert，H；SharplessK.B.Angew.Chem.Int.Ed.，(1996)2813中所述的相似。该氨基羟基化条件优选包括用以丅试剂处理由用次氯酸叔丁酯和氢氧化钠处理氨基甲酸甲酯得到的试剂[即MeOC(O)N(Cl)Na]；和在惰性溶剂如DCM中的锇酸钾。其它的试剂包括EtOC(O)N(Cl)Na和BnOC(O)N(Cl)Na该式67的手性?唑烷酮优选以至少96％de形成。
式67的?唑烷酮的伯醇部分随后可转化成碘化物例如，在一个优选的程序中式67化合物在叔胺碱(例如吡啶)存在下用三氟甲磺酸酐(Tf2O)处理，随后用碘化物盐例如碘化锂处理形成的式68的碘化物可以用一个两步程序转化成式69的亚甲基化合物。在第一步中将式68的碘化物用锌粉和乙酸处理。形成的中间体的酯部分随后可以在第二步中用氢化物试剂如氢化二[2-甲氧乙氧基铝]钠还原成伯醇嘚到式69的胺。
式69的胺随后与取代的氯嘧啶反应该胺可以与例如2-氨基-6-氯-5-硝基-4-(3H)-嘧啶酮在叔胺碱(优选三乙胺)存在下于回流的正丁醇中缩合，得箌式70的嘧啶化合物式70的嘧啶化合物随后可用一个两步程序转化成嘌呤衍生物。在第一步中嘧啶的硝基部分用例如连二亚硫酸钠还原，嘚到三氨基嘧啶中间体也可以使用其它的还原剂和条件成功地将硝基还原，这包括NaBH4/THFNaBH4-BiCl3，Sn/HClSnCl2，Mg/(NH4)2SO4/MeOHCuBr·SMe2，TiCl2(Cp)2/Sm铁和镍催化的方法。在第二步中鼡甲酸、盐酸和原甲酸酯衍生物(例如原甲酸三乙酯)处理三氨基嘧啶中间体，进行环化并得到式71的亚甲基化合物式71的亚甲基化合物可利用方法B和C的最终步骤中描述的氧化步骤转化成式21化合物。
本发明的方法E包括使用另一种碳环糖前体一种式16的烯丙型醇，来制备式21化合物方法E与方法B和C相似，因为所有这三种方法都使用环氧化环戊烷中间体实现与鸟嘌呤前体的偶合反应在方法E的第一实施方案中，用来保护囮合物16的环戊烷环的仲醇的保护基团是一个苄基/取代的苄基醚而在第二实施方案中，一个甲硅烷基醚保护基(RcRd2Si)保护同一仲醇(在此情形Rc是矗链或支链的C1-C4烷基，或苯基Rd是直链或支链的C1-C3烷基)。一种优选的苄基醚保护基团是苄基醚本身而优选的甲硅烷基醚是叔丁基二甲基甲硅烷基醚。这些保护基团的差别改变了用于方法E的不同实施方案的中间体的个性方法E的某些实施方案示于方案8中。
在方法E的一项实施方案Φ式16的烯丙型醇通过将式7的酯还原得到。其中R和R′定义同上的式7的酯可以利用下述的方法E(a)-E(d)得到式7的酯可以用选择性进行酯的1，2-还原的氫化物试剂还原例如，在一项实施方案中氢化二异丁基铝将酯基还原，形成式16的烯丙型醇
式16的烯丙型醇随后可以非对映选择性地环氧化。例如可以用酒石酸的纯手性二酯、一种氢过氧化物和一种金属催化剂(例如过渡金属催化剂)完成环氧化，得到式17的环氧化环戊烷茬一项实施方案中，该纯手性二酯是(-)酒石酸二乙酯[(-)-DET]氢过氧化物是TBHP或CHP，金属催化剂是异丙醇钛(IV)反应优选在惰性溶剂如DCM中进行。
式17的环氧囮物随后可以与式28的嘌呤化合物(其中X是Cl、I或BnO)的碱金属盐(如锂盐)在偶极非质子溶剂如DMF中偶合得到式18化合物。式17的环氧化环戊烷的二氯代物铨部偶合优选与2-氨基-6-苄氧基嘌呤的锂盐进行其中X是苄氧基的式18化合物可以通过自溶剂(例如乙酸乙酯和己烷)中重结晶来纯化。偶合步骤的產率在纯化后至少为75％
式18化合物的连位二醇随后可转化成烯部分。例如该二醇部分可以用与方法B和C中使用的类似方法转化成烯。因此在一项实施方案中，式18化合物可以用原甲酸酯衍生物例如原甲酸三甲酯在催化数量的酸(例如TFA或PTSA)或酸性催化剂(如PPTS)存在下处理形成的二氧雜环戊烷混合物(优选以粗制混合物的形式)与乙酸酐以及任选使用的乙酸的混合物一起加热，得到式19的亚甲基化合物或者是，此反应可以茬抗氧化剂如BHT存在下如前所述地进行在方法E的第二实施方案中(其中化合物18的仲醇被甲硅烷基醚基保护)，甲硅烷基醚保护基团在乙酸酐/乙酸处理步骤中同时被水解(即式19亚甲基化合物中R′是H)。
在其中X是OBn的方法E的实施方案中6-O-苄氧基可以通过将式19化合物与无机酸水溶液(例如2N
HCl)一起加热被水解(以及通过该嘌呤的2-氨基在乙酸酐处理步骤中乙酰化形成的任何侧基2-乙酰氨基)，得到式20的亚甲基化合物在其中X是Cl或I的方法E的實施方案中，该6-卤基团可以通过用酸或碱水溶液(例如氢氧化物水溶液)处理来水解除掉环戊烷环上保留的苄基醚保护基，利用三氯化硼在惰性溶剂(例如DCM)中去除得到式21化合物。
式7的酯可以用产生规模数量的对映体纯的酯的方法制备在方法E(a)中，式7的酯可以从式1的二醇制备茬方法E(a)中，式7的酯可以从式1的二醇制备该二醇按照J.Am.Chem.Soc.1989，3456和J.Am.Chem.Soc.19969526中所述步骤制备。方法E(a)的一项实施方案示于方案9
式1的二醇可以用例如乙酸酐囷吡啶进行乙酰化，得到式2的二乙酸酯该二乙酸酯的前手性乙酸官能基之一的选择性酶促水解形成对映体纯的式3的单乙酸酯。优选所用嘚酶是水解酶例如得自洋葱假单胞菌(Pseudomonas
cepacia)的脂酶PS-30或胰酶制剂(Pancreatin)。优选式3的单乙酸酯产物的对映体过量至少为96％ee更优选为至少98％ee。在某些实施方案中该酶被固定在载体例如聚丙烯上，以有助于酶的回收和使反应后处理变容易该反应通常在缓冲剂和有机溶剂的混合物中进行，優选缓冲剂/有机溶剂比例为约3∶1至约20∶1优选为约9∶1。选择缓冲剂使缓冲范围能保持反应混合物的pH处在对于载体酶的催化作用有效的范围例如在约pH＝7。例如可以使用25mM的磷酸钾缓冲液。在一项实施方案中有机溶剂是甲苯。
式3的单乙酸酯可以偶合到苯基磺酰硝基甲烷上以形成式4化合物此偶合反应优选用钯(0)催化剂例如四(三苯膦)合钯在含叔胺(如三乙胺)的THF中进行催化。式4化合物的仲羟基用苄基卤和一种非亲核性强碱(例如氢化钠)保护以得到式5的二苄基化合物。式5的二苄基化合物可以被氧化例如用过氧一硫酸钾∶四丁铵氧化，优选在DCM和MeOH的溶剂混合物中进行该中间体羧酸可以通过例如与醇(ROH)，优选MeOH和硫酸在同一反应容器中直接加热而被酯化，得到式6的酯
双键的异构化形成所偠的式7的酯。该异构化可通过将式6的粗品酯在碱性条件下加热来完成该碱性条件优选包括将酯与醇钠/醇混合物一起加热。正如对于本领域普通技术人员显而易见的最好是选择醇盐和醇的混合物，使得异构化期间酯基的酯交换反应减至最小或不发生例如，如果对于式7化匼物希望是甲酯(即R＝甲基)，则对于异构化选择的碱性条件优选是甲醇钠/MeOH式7的酯可通过从溶剂混合物(例如己烷和叔丁基甲基醚)中重结晶進行纯化。
在方法E(b)中式7的酯用另一种合成方法制备。方法E(b)的一种实施方案示于方案10将式1的二醇用一种水解酶(例如脂酶PS-30或胰酶制剂)选择性乙酰化，生成式13的对映体富集的单乙酸酯化合物这里的酶同样可以固定在载体上。乙酰化反应可以在有机溶剂例如庚烷∶甲基叔丁基醚混合物中进行该产物式13的单乙酸酯的对映体过量优选至少为96％ee，更优选至少为98％ee
式13的单乙酸酯可以通过用活性烷基碳酸衍生物(例如氯甲酸甲酯，碳酸二甲酯等)处理转化成式14的碳酸烷基酯，其中R4优选为C1至C6烷基、苄基、苯基或是被C1-C6烷基取代的苯基转化反应优选用氯甲酸甲酯和叔胺碱(例如吡啶)在惰性溶剂(优选DCM)中进行。
式14的碳酸烷基酯随后可以与苯基磺酰基硝基甲烷偶合得到式15化合物。该偶合反应优选鼡Pd(0)催化剂催化例如，四(三苯膦)合钯三(二亚苄基丙酮)合二钯(0)，双(二亚苄基丙酮)合钯(0)·CHCl3在含有叔胺碱(例如三乙胺)的溶剂(例如THF)中进行。式15嘚化合物用碱(例如碳酸钾)在MeOH中处理以除去乙酸酯基并形成式4化合物。仲醇部分可以通过式4化合物与苄基卤(例如苄基溴)反应以苄基醚基團形式被保护，该反应优选在非亲核性强碱(例如氢化钠)存在下进行得到式5化合物。式5化合物可以利用方法E(a)中已经描述的方法转化成式7的酯
或者是，可以利用方法E(c)来制备式7的酯(其中R是苄基)方法E(c)的一项实施方案示于方案11。式8的环氧化环戊烷作为手性起始物该式8的环氧化環戊烷可以根据美国专利5,206,244中所述的方法制备，其内容如同这里充分阐明地被引用作为参考式9的烯丙型醇通过将式8的环氧化物与一种非亲核的强碱(例如六甲基二硅氮化锂)在THF中加热制备。在水溶液加工处理后式9的烯丙型醇可不作进一步纯化直接使用。这里该烯丙型醇部分哃样可以通过用活性碳酸烷基酯衍生物(例如氯甲酸甲酯、碳酸二甲酯等)处理，转化成碳酸烷基酯基团其中R4优选为C1-C6烷基、苄基、苯基或者被C1-C6烷基取代的苯基，从而得到式10的碳酸烷基酯在一项实施方案中，式9的烯丙型醇与氯甲酸甲酯和一种叔胺碱(优选吡啶)在惰性溶剂(例如DCM)中┅起搅拌形成碳酸甲酯。该碳酸烷基酯粗品可以直接与苯基磺酰基硝基甲烷在THF中偶合形成式5化合物。碳酸烷基酯化合物的偶合反应优選用钯(0)催化剂(例如四(三苯膦)合钯)在含叔胺碱(例如三乙胺)的THF中催化式5化合物可以利用方法E(a)中描述的方法转化成式7的酯。
方法E(d)也可用来制备式7的酯其中R′是苄基或甲硅烷基。方法E(d)的实施方案示于方案12在该方法中，式9的烯丙型醇用氧化剂(例如重铬酸吡啶?(PDC)氯铬酸吡啶?，②氧化锰等)在惰性溶剂(优选DCM)中氧化得到式80的环戊烯酮。该环戊烯酮用选择性进行14-氢化物加成的氢化物试剂还原。合适的还原条件包括例如，在THF中用三仲丁基硼氢化锂处理还原得到的中间体用活性三氟甲磺酸衍生物(例如N-苯基三氟甲磺酰亚胺)捕集，形成式81的三氟甲磺酸酯然后利用例如钯催化的羰基插入反应，在环上插入一个烷氧羰基制得式7的酯。该插入反应优选在DMF和醇(优选MeOH)的混合物中用过量的叔胺堿(例如三乙胺)进行此反应的一种优选的催化剂是钯(0)催化剂，例如四(三苯膦)钯
在其中R′是苄基或取代的苄基的方法E(d)的实施方案中，烯丙型醇9可以如方法E(c)中所述地从式8的环氧化环戊烷制备在其中R′是甲硅烷基醚保护基团的方法E(d)的实施方案中，该烯丙型醇可以从式3的单乙酸酯(它可如方法E(a)中所述地制备)用两步法制备式3的单乙酸酯的仲醇部分与甲硅烷基化试剂RcRd2SiY反应，其中Y是合适的离去基团例如氯、三氟甲磺酸酯等。在一项实施方案中该仲醇用叔丁基二甲基氯硅烷(TBSCl)在吡啶存在下于惰性溶剂(例如DCM)中以叔丁基二甲基甲硅烷基醚的形式被保护，得箌式22化合物式22化合物的乙酰基团用碱(例如碳酸钾)在醇溶剂中水解，得到式9的烯丙型醇
本发明的方法F包括制备适当取代的式37的环戊醇，並使该环戊醇与一种鸟嘌呤前体例如2-氨基-6-碘代嘌呤，在Mitsonobu条件下偶合形成碳环核苷，式38的亚甲基化合物式38的亚甲基化合物随后可以进┅步加工成式21化合物。方法F的一项实施方案示于方案13
式32的环戊烯酮(也称作4-(S)-羟基-2-环戊烯-1-酮)作为方法F的起始物。该环戊烯酮可以按照KhanapureS；Najafi，N；MannaS；Yang，J；Rokash.J.在J.Org.Chem.1995，607448中所述的步骤得到。式32的环戊烯酮的醇部分可以用甲硅烷基化试剂RcRd2SiY(其中Rc、Rd和Y如同方法E和E(d)中的定义)以甲硅烷基醚的形式被保护例如，式32的环戊烯酮的醇部分可以利用叔丁基二甲基氯硅烷(TBSCl)、叔胺碱(例如NN-二甲基乙胺)和催化数量的4-N，N-二甲基氨基吡啶在惰性溶劑(例如DCM)中以叔丁基二甲基甲硅烷基醚的形式被保护得到式33的环戊烯酮。式33的环戊烯酮随后可以用格利雅试剂在铜(I)盐(例如溴化铜(I)二甲基硫醚络合物)存在下处理该格利雅试剂由式RaRb2SiCH2X′(其中Ra、Rb如同以上对方法A的定义，X′是Cl、Br或I)的(卤甲基)二烷基苯基硅烷和镁制备在一项实施方案Φ，使用(氯甲基)二甲基苯基硅烷制备该格利雅试剂可以使用三甲基甲硅烷基化试剂，例如三甲基氯硅烷(TMSCl)处理该中间体烯醇化物，形成式34的甲硅烷基烯醇醚将所形成的甲硅烷基烯醇醚用例如甲醛水溶液在THF中于Lewis酸存在下羟甲基化，得到式35化合物所述Lewis酸的实例包括Yb(OTf)3、La(OTf)3、Pr(OTf)3、Nd(OTf)3、Sm(OTf)3、Eu(OTf)3、Gd(OTf)3、Dy(OTf)3、Ho(OTf)3或Er(OTf)3。
式35化合物可以通过与式R3SO2Cl的磺酰化试剂在叔胺碱(例如三乙胺)存在下反应随后加入强碱，优选DBU去掉中间体磺酸酯，得到式36嘚亚甲基化合物其中在式R3SO2Cl中，R3是C1-C6烷基、三氟甲基、苯基或取代的苯基(被C1-C6烷基和/或C1-C6烷氧基取代)所用的磺酰化试剂优选是甲磺酰氯。式36的亞甲基化合物的羰基部分可以用选择性进行羰基12-还原的氢化物试剂还原，以高的非对映选择性得到烯丙型醇这些氢化物试剂包括硼氢囮钠、硼氢化锌、氢化锂铝、氢化二异丁基铝、硼氢化钠-氯化铈、三乙基硼氢化锂、9-BBN氢化锂、9-BBN吡啶、硼烷-硫醚络合物、5，5-二苯基-2-甲基-34-丙-1，32-氧氮硼杂环戊烷(Corey试剂)、三叔丁氧基氢化铝锂、氰基硼氢化钠、三仲丁基硼氢化锂(L-Selectride?)、氢化二(2-甲氧乙氧基)铝钠(Red-Al?)、氯化二异丁基铝和硼烷-四氢呋喃络合物。该羰基可以在THF中用例如三乙基硼氢化锂还原得到粗制的式37烯丙型醇，产率95％非对映体比例8∶1。该粗产物用例如硅膠色谱法纯化分离出所要的式37烯丙型醇的非对映体。
式37的烯丙型醇与2-氨基-6-碘嘌呤(其中X是I的式28嘌呤化合物)在Mitsonobu条件下缩合或者是，在该缩匼中可以使用其它的鸟嘌呤前体例如2-氨基-6-氯嘌呤和2-氨基-6-O-苄氧基嘌呤。优选的Mitsonobu条件包括用各约1.3摩尔当量的三苯膦、DEAD和2-氨基-6-碘嘌呤在THF中处理該烯丙型醇Mitsonobu反应的产物-式38的亚甲基化合物可以利用例如硅胶色谱法作进一步纯化。
式38的亚甲基化合物可以转化成式21化合物在一种转化方法中，式38的亚甲基化合物的二烷基苯基硅烷部分可以利用与方法B和C中使用的相似的氧化步骤转化成羟基部分。甲硅烷基醚保护基团在此步骤中同时被水解例如，式38的亚甲基化合物可以用四氟硼酸-二甲醚络合物在DCM中处理加入碳酸氢钾和氟化钾之后，将此反应生成的中間体硅烷醇用过氧化氢氧化得到式39化合物。这两个反应可以方便地用单釜法完成6-碘代基团可以通过将式39化合物与碱水溶液(例如2N氢氧化鈉溶液)加热水解。中和之后水溶液可以与脱色碳一起加热，以便能结晶得到纯化的式21化合物
方法G包括制备式45的环氧化环戊烷，并用鸟嘌呤前体与该环氧化环戊烷偶合得到碳环核苷，即式46化合物式46化合物随后可以通过一系列合成步骤转化成式21化合物。方法G的一项实施方案示于方案14
在方法G中，式33的环戊烯酮(按方法F中所述制备)可以例如通过用碘溶液处理进行碘化反应溶剂优选是DCM和吡啶的混合物。形成嘚碘代环戊烯酮中间体用氢化物试剂(例如在MeOH中用硼氢化钠)还原形成＞98％de的式40的碘代化合物。式40的碘代化合物随后可进行羰基插入反应唎如，式40的烯丙型醇与一氧化碳及醇ROH(其中R是C1-C4烷基或苄基)反应形成式41的酯。该插入反应优选用一氧化碳和MeOH在叔胺碱(例如三乙胺)存在下于密葑的加压反应容器内进行反应优选用钯催化剂例如二氯·二(三苯膦)合钯进行催化。插入反应的粗产物可以用柱色谱法纯化以得到纯的式41囮合物
式41化合物的仲醇通过用式R2C(O)-Y的活性酸衍生物和碱(优选六甲基二硅氮化锂)处理而被酰化。也可以使用其它的活性酸衍生物(包括烷基和芳基酸衍生物)来形成酰基中间体42但优选使用金刚烷碳酰氮(即，R2＝金刚烷)利用这种优选的试剂，得到了晶化更好的中间体它容易纯化囷处理。将式42中间体用格利雅试剂在铜(I)盐如碘化铜(I)存在下处理进行烯丙位取代，该格利雅试剂由式RaRb2SiCH2X′(其中Ra和Rb同以上对方法A的定义X′是Cl、Br或I)的(卤甲基)二烷基苯基硅烷和镁制备。在一项实施方案中使用(氯甲基)二甲基苯基硅烷制备该格利雅试剂。反应产物式43化合物可不经进┅步纯化直接用于下一合成步骤
式43化合物可以用氢化物试剂如氢化二异丁基铝在甲苯中还原，生成式44的烯丙型醇式44的粗制烯丙醇在环氧化后形成式45的环氧化环戊烷。例如在一种环氧化方法中，该烯丙型醇用过酸(例如一过氧邻苯二甲酸镁(MPPA))在MeOH中处理制得该环氧化环戊烷。利用这种方法式45的环氧化环戊烷具有足够的非对映体纯度，可不经进一步纯化用于下一合成步骤
在方法G的下一步骤中，式45的环氧化環戊烷通过在偶极非质子溶剂如DMF中与2-氨基-6-O-苄氧基嘌呤的碱金属盐(例如锂盐)缩合转化成式46化合物。该锂盐例如可以通过2-氨基-6-苄氧基嘌呤与氫化锂反应生成缩合反应的粗产物可以利用从合适的溶剂如MeOH中重结晶来纯化，形成纯的式46化合物与方法B和C相似，可以用其它鸟嘌呤前體例如2-氨基-6-氯嘌呤、2-氨基-6-碘嘌呤的碱金属盐代替2-氨基-6-苄氧基嘌呤与式45的环氧化环戊烷偶合。
式46化合物的二醇部分随后可转化成烯例如，转化成式47的亚甲基化合物可以用两步法完成将式46化合物用一种原甲酸酯衍生物(优选原甲酸三甲酯)和催化数量的酸(如TFA或PTSA)或酸性催化剂如PPTS處理。将多余的原甲酸酯试剂蒸发形成的二氧杂环戊烷混合物与乙酸酐一起加热。在蒸走乙酸酐和进行酸后处理之后得到式47的亚甲基囮合物，这一处理还使6-O-苄氧基水解在其中X是Cl或I的方法G的实施方案中，嘌呤上的6-卤基团可以用氢氧化物溶液如NaOH水解掉
式47亚甲基化合物的苯基二甲基甲硅烷基甲基可以利用方法B、C和F中描述的步骤转化成一个羟甲基部分。例如在一项实施方案中，式47的亚甲基化合物可以用四氟硼酸-二甲醚络合物在DCM中处理得到硅烷醇中间体。将该硅烷醇中间体用碳酸氢钾、氟化钾和过氧化氢处理得到式21化合物。
在本发明的方法H中将一种双环内酯式52化合物转化成式56的亚甲基化合物。式56的亚甲基化合物与鸟嘌呤前体如2-氨基-6-氯嘌呤(式28的嘌呤化合物X＝Cl)偶合，得箌碳环核苷-式57的亚甲基化合物式57的亚甲基化合物随即通过去保护和水解步骤转化成式21化合物。方法H的实施方案示于方案15
式52化合物可以鼡氧氮杂环丙烷试剂(例如(1S)-(+)-(10-樟脑磺酰基)氧氮杂环丙烷)和一种非亲核性强碱，优选二[三甲基甲硅烷基]氨基化钠(NaHMDS)在THF中处理，生成式53化合物在鼡例如MeOH猝灭反应之后，式53化合物可通过在MeOH中用适当的氢化物试剂(例如硼氢化钠)处理直接还原其内酯部分，生成式53A化合物式53A化合物的连位二醇可以通过用氧化剂例如高碘酸钠、高锰酸钾或氧化钌处理被氧化裂解。生成的含醛中间体53B可以随后用合适的氢化物试剂(例如硼氢化鈉)还原生成式54的二醇。
式54的二醇的伯醇部分可以选择性地转化成合适的离去基团这优选使用式R3SO2Cl的磺酰化试剂，其中R3是C1-C6烷基、三氟甲基、苯基或取代的苯基(被C1-C6烷基或C1-C6烷氧基取代)例如，将式54的二醇用对甲苯磺酰氯(TsCl)、一种叔胺碱(例如吡啶)和催化数量的4-NN-二甲基氨基吡啶处理，将伯醇转化成甲苯磺酸酯基该仲醇用酰化剂酰化，以酯的形式被保护生成式55化合物。优选该仲醇用式R2C(＝O)的酰基保护其中R2是烷基、芳基、芳烷基，它们均可被取代更优选R2是甲基，于是式55化合物中的酰基保护基团是乙酰基一种优选的酰化剂是式R2C(O)Y酰化剂，其中Y是一个離去基团例如，该酰化剂可以是一种酸酐、酰基氯等
将式55化合物用一种碘化物盐(例如碘化锂)和强碱(例如DBU)处理，进行中间体碘化物的消除反应向碱性的反应混合物中直接加入MeOH进行酰基酯的水解，形成式56的亚甲基化合物式56的亚甲基化合物可以利用例如硅胶色谱法被进一步纯化。
式56的亚甲基化合物作为合适的化合物用于和鸟嘌呤前体(式28的嘌呤化合物其中X是Cl、Br或苄氧基)偶合。例如式56的亚甲基化合物在Mitsonobu条件下用2-氨基-6-氯嘌呤处理，得到式57的亚甲基化合物优选Mitsonobu条件包括用DEAD和三苯膦处理。式57的亚甲基化合物可以利用例如硅胶色谱法进一步纯化
式57的亚甲基化合物向式21化合物的转化可以通过甲硅烷基醚部分的去保护和嘌呤部分上的6-X基团的水解来完成。通过用氟化物离子(例如氟化㈣烷基铵试剂如氟化四丁铵在THF中)处理将两个甲硅烷基醚部分裂解，得到式39化合物在其中嘌呤部分有6-氯或碘基团的该方法的实施方案中，该6-卤基团通过将式39化合物用碱或酸的水溶液(优选碱水溶液例如2N氢氧化钠溶液)处理而被水解，得到式21化合物在其中X是6-O-苄氧基的该方法嘚实施方案中，6-氧代基团的转化可以采用酸性条件例如2N
HCl来进行。式21化合物可以利用例如硅胶色谱法进一步纯化
在方法H中，可以使用纯掱性的式49双环内酯作为制备式52化合物的起始物它可以按照Miyaji，K等Tetrahedron
Lett.，19914557中所述制备。式49的双环内酯可以用低聚甲醛在冰乙酸和硫酸混合物Φ处理在双键上加上甲醛。这一处理形成了式50的二乙酸酯式50的二乙酸酯随后与碱(例如碳酸钾)在醇溶剂(例如MeOH)中搅拌，水解乙酸酯部分形成式51的二醇。式51的二醇的醇部分可以通过用式RcRd2SiY(其中Rc、Rd和Y同以上在方法E中的说明)的甲硅烷基化试剂处理该二醇而以甲硅烷基醚基团的形式被保护形成式52化合物。在方法H的一项实施方案中该甲硅烷基化试剂是叔丁基二甲基氯(TBSCl)。
与本发明的方法H相似本发明的方法I包括由纯掱性双环内酯中间体(式52化合物)制备式56的亚甲基化合物。式56的亚甲基化合物与鸟嘌呤前体(式28的嘌呤化合物)的偶合和随后将所形成的碳环核苷轉化成式21化合物也与方法H中使用的方法相似然而，由式52化合物制备式56的亚甲基化合物是利用与方法H中使用的不同的合成方法完成的方法I的一项实施方案示于方案16。
在方法I中式52化合物的内酯部分在受控的反应条件下被还原，生成式59的邻位羟基内醚例如，式52化合物可以鼡氢化物试剂(例如氢化二异丁基铝)在甲苯中在25℃处理还原成邻位羟基内醚氧化态。该还原产物式59的邻位羟基内醚随后用氧化剂裂解例洳在紫外照射(日光灯)下在DCM中用氧化剂例如碘苯二乙酸酯裂解，得到式60的碘化物式60的碘化物可以用强碱例如DBU处理，进行碘化物部分的消除反应同时在水处理加工时除去甲酸酯，形成式56的亚甲基化合物
式56的亚甲基化合物可以在例如以上方法H中对式56亚甲基化合物转化成式57化匼物所述的条件下，与鸟嘌呤前体如2-氨基-6-碘嘌呤(式28的嘌呤化合物其中X是I)偶合。形成的碳环核苷(化合物39)可以利用例如方法H中的方法转化成式21化合物
本发明的方法J描述了制备式21化合物的另一方法(方案17)。方法J包括形成式89的亚甲基化合物随后使该亚甲基化合物与一种鸟嘌呤前體(例如2-氨基-6-碘嘌呤)在Mitsonobu条件下偶合，产生碳环核苷中间体式90亚甲基化合物除去化合物90的保护基团并将X基团水解，得到式21化合物
式89的亚甲基化合物由按照美国专利5,206,244的实施例1中所述制备的式82环氧化环戊烷制备。将化合物82的仲醇部分以式RcRd2SiO-的甲硅烷基醚的形式保护其中Rc和Rd如以上方法E中所述。在一项实施方案中式82化合物的仲醇部分以叔丁基二甲基甲硅烷基醚的形式被保护。该伯醇通过用钯/碳将83的苄基催化还原而詓保护得到化合物84。式86化合物通过一个碱催化的消除反应制备在该程序的第一步中，式84的伯醇利用式R3SO2Cl(其中R3如以上方法F中所述)的磺化剂轉化成合适的离去基团得到式85化合物。然后利用强碱例如叔丁醇钾，在合适的溶剂(例如THF)中进行烷基或(取代的)苯磺酸的消除反应得到式86化合物中的环外亚甲基部分。
然后将羟甲基部分置于和式86化合物的环外亚甲基部分相邻的环戊烷环上形成式87化合物。为有效地进行此轉化反应优选进行碳亲核体与式86化合物的环氧化物的区域选择性1，2-加成最好是，该碳亲核体是13-二噻烷的碳负离子，例如13-二噻烷的鋰盐，它加合到烯丙位生成式87化合物。13-二噻烷的锂盐可以利用亲核的强碱，例如正丁基锂、二异丙基氨基化锂、六甲基二硅氮化锂等在醚类溶剂如THF中形成。优选加入一种螯合剂如14-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(DABCO)以增强此过程的效率。该反应优选在25℃以下更优选在约-15℃以下进行，鉯确保高的区域选择性此加成反应的区域选择性优选＞10∶1，更优选＞15∶1
式87化合物的二噻烷基甲基容易利用水解反应后进行还原而转化荿醇。水解成中间体醛是通过将式87化合物与碳酸钙和碘甲烷的混合物在乙腈水溶液中搅拌进行的二硫缩醛的其它水解方法是本领域公知嘚，包括在GreeneT.W.；Wuts，P.G.M.Protecting Groups in OrganicSynthesis2nd Edition；Wiley and SonsNew
York，1991pp.199-201中所述的方法。该中间体醛可以用合适的氢化物试剂例如硼氢化钠还原得到式88化合物。
式88化合物通过醇基团嘚酰化转化成适合与被保护的鸟嘌呤衍生物偶合的化合物式R2C(＝O)-的酰基(其中R2如以上对方法H所述)可以作为保护基起作用。R2优选是甲基于是酰基为乙酰基。然后用氟化物离子如氟化四丁铵将甲硅烷基醚基裂解得到式89的亚甲基化合物。
式89化合物与合适的鸟嘌呤前体(例如2-氨基-6-碘嘌呤)偶合得到碳环核苷中间体式90亚甲基化合物。在另一实施方案中2-氨基-6-氯嘌呤或2-氨基-6-苄氧基嘌呤可以作为鸟嘌呤前体使用。式90的亚甲基化合物可以通过合适的水解方法转化成式21化合物例如，酯基可以通过用碱金属醇盐(例如甲醇钠)处理被裂解6-卤基可以通过在碱水溶液Φ加热被水解。在本方法的其中使用2-氨基苄氧基嘌呤作为鸟嘌呤前体的实施方案中6-苄氧基用酸例如HCl水解。
本发明的另一方面是使用树脂吸附法分离和纯化式21化合物或其中间体此方法使用含化合物21的粗混合物或含有恩替卡韦中间体及其它试剂的混合物，例如由在氧化性脫甲硅基化反应中于KF和KHCO3存在下用过氧化氢处理化合物21的中间体形成的氧化混合物。式21化合物以2.2mg/mL、优选以1.5mg/mL溶于水中化合物21和相关化合物被特异地吸附在树脂上，而无机盐则通过树脂然后用水洗树脂床以除去任何额外的盐，化合物21或与其相关的化合物(例如中间体或前体)则通過用有机溶剂冲洗而从树脂上洗脱在一项实施方案中，该有机溶剂包括MeOH和水的混合物优选40-60％MeOH∶40-60％水，更优选45-55％MeOH∶45-55％水最好是50∶50的MeOH和沝，因为50％MeOH能提供化合物21或其相关化合物的最佳分离它随后被浓缩和结晶以得到纯化合物。这里所说的“纯”意味着化合物的纯度大于戓等于97％更优选99％。最好是用高效液体色谱(HPLC)法测定的所有杂质的峰小于0.1％面积。
适合用于此吸附方法的树脂是对非极性分子有选择性嘚疏水性树脂在一项实施方案中，该树脂是苯乙烯基树脂更优选的是，将苯乙烯基树脂溴化以具有更大的强度和耐磨蚀性具有这样嘚性质的树脂实例包括但不限于 SP207Sepabeads，SP700 SepabeadsDiaion HP20，Diaion SP70DiaionSP825，Diaion SP850Diaion
HP2MG甲基丙烯酸酯，AMBERLITE XAD4AMBERLITE XAD7HP，AMBERLITE XAD16和AMBERLITE XAD1600。在一项优选的实施方案中使用SP 207作为树脂，因为该树脂具有耐磨蝕性可长期循环使用，并且能耐受极端的有机溶剂条件、温度和pH特别适用于纯化化合物21和与其相关的化合物。
以下实施例进一步说明叻本发明但是当然不应认为以任何方式限制本发明的范围。
向装有机械搅拌器、500mL加液漏斗、温度计和氩气入口的3升三口烧瓶中装入苯基②甲基氯硅烷(153.6g0.90mol)和无水THF(320mL)。将烧瓶冷却至-78℃在搅拌下于1小时内加入环戊二烯钠(441mL，2.04M
THF溶液0.90mol)。将反应混合物搅拌约2小时然后于2小时内温热至約0℃。此时假定反应已完全加入冷水(～150mL)使反应猝灭，温热至～15℃将混合物用己烷(～100mL)稀释，转移到分液漏斗中分离出有机层，水层用巳烷(200mL)萃取合并的有机层用盐水(200mL)洗，用无水硫酸镁干燥过滤，减压浓缩得到深棕色油状的二烯粗品(177g～98％产率)。该二烯粗品不经纯化直接用于下一反应
在装有机械搅拌器、500mL加液漏斗、温度计和氩气入口的3升三口烧瓶中装入以上反应的二烯(176.5g，0.88mol)和己烷(600mL)将该混合物冷却至约-10℃，于5分钟内加入二氯乙酰氯(173mL1.80mol)。向此搅拌的混合物中于1小时内加入Et3N(251mL1.80mol)的己烷(400mL)溶液。形成的混合物在0-4℃搅拌约3小时然后在室温下搅拌约10尛时以完成反应。加入水(400mL)使反应猝灭室温下搅拌约30分钟后，将溶液转移至分液漏斗分离出有机层。水层用己烷(300mL)萃取合并的有机层用沝(250mL)、碳酸氢钠(5％，250mL)和水(500mL)洗将合并的滤液减压浓缩。形成的深色油在高真空下进一步干燥得到307g粗制的标题化合物。
反-5-(二甲基苯基甲硅烷基)-2-(羟甲基)-2-环戊烯-1-羧酸(64)的制备
在装有机械搅拌器、500mL加液漏斗、温度计和氩气入口的3升三口烧瓶中装入以上得到的化合物63(211g0.68mol)、叔丁醇(348g)、水(710ml)和Et3N(343g，3.39mol)将反应混合物加热回流3小时，冷却至～10℃于30分钟内加入碳酸钾(300g，2.17mol)30分钟后分批加入硼氢化钠(13.6g，0.359mol)1小时后撤除冷却浴，缓慢温热反应混匼物将反应混合物小心地用水(800mL)猝灭，调节pH至～3.0形成的混合物用EtOAc(800mL)萃取。将有机萃取液减压浓缩形成的深色油在高真空下进一步干燥，嘚到185g外消旋的标题化合物
在装有机械搅拌器、加液漏斗、温度计和氩气入口的3升三口烧瓶中加入化合物64(185g，0.67mol)、无水乙醇(925g)和RR-(-)-2-氨基-1-(4-硝基苯基)-1，3-丙二醇(102g0.483mol)，加热至50℃向溶液中加入盐65A晶种，在40℃放置5小时得到的晶体在布氏漏斗上过滤，用乙醇洗将固体干燥，得到标题化合物自环戊二烯钠算起产率为～28.3％(94g)。该产物具有98％AP和99％ee的纯度
向装有机械搅拌器、加液漏斗和温度计的2升三口烧瓶中装入65A(390g，0.8mol)和MeOH(800mL)将反应混匼物冷却至约0℃。在搅拌下向反应瓶中缓慢加入浓硫酸(123g1.2mol)。加完酸后将反应混合物在室温下搅拌约12小时以完成反应。待反应完全后将反应混合物减压浓缩以除去约500mL
MeOH。残余物用EtOAc(600mL)和水(1000mL)稀释将该混合物转移到分液漏斗中，分离出有机层水层用EtOAc(600mL)萃取。合并的有机层用饱和碳酸氢钠(500mL)、水(500mL)、盐水(500mL)洗减压浓缩，得到棕色油状的标题化合物(224g)
在氩气氛下向装有机械搅拌器、加液漏斗和温度计的5升三口烧瓶中加入活囮的分子筛(224g)和DCM(1000mL)。将溶液冷却至约-30℃加入DIPT(18g，0.08mol)将混合物在-30℃搅拌约20分钟。然后向反应混合物中加入异丙醇钛(IV)(18.2mL0.064mol)。将反应混合物在-30℃搅拌约20汾钟
在-30℃下经注射器向反应混合物中加入DCM(500mL)中的化合物66(224g，0.8摩尔)将反应混合物在-30℃搅拌约20分钟。利用加液漏斗向反应混合物中加入TBHP(308mL5M/癸烷，1.6mol)并保持反应温度在-20℃至-30℃之间。加完TBHP之后将反应混合物在-20℃至-30℃之间搅拌约2小时。反应完全后加入亚硫酸氢钠(250g亚硫酸氢钠在500mL水中)沝溶液猝灭过量的过氧化物。加完亚硫酸氢钠后将混合物搅拌30分钟，经硅落土垫层(CeliteHyflo?)过滤将滤液转移至分液漏斗中，分离出水层有機层用饱和碳酸氢钠水溶液(1000mL)洗，然后用水(500mL)洗将有机层减压浓缩，得到油状的环氧化物粗品(276g)
在氩气下向装有机械搅拌器和温度计的3升三ロ圆底烧瓶中加入上面得到的环氧化物(276g，0.8mol)和IPA(800mL)将形成的溶液在冰浴中冷却至约0℃，向其中分批加入固体硼氢化钠(68g1.6mol)。加完后撤除冷却浴將反应混合物搅拌约16小时以便完成反应。待反应完成后向反应混合物中加入饱和氯化铵溶液(2000mL)以猝灭过剩的硼氢化物。在硼氢化物完全猝滅后用EtOAc(1200mL)萃取反应混合物。有机层用水(500mL)、盐水(500mL)洗减压浓缩得到浅黄色标题化合物(251g)。
向装有机械搅拌器和温度计的3L三口圆底烧瓶中加入2-氨基-6-苄氧基嘌呤(193g0.8mol)、氢氧化锂一水合物(33.6g，0.64mol)和在DMF(800mL)中的化合物72(251g0.8mol)。将混合物加热至80℃搅拌约20小时。反应完全后将反应混合物冷却至室温，用EtOAc(3000mL)萃取有机萃取液用盐水(1500mL)洗。将有机层用柠檬酸(1000mL)、盐水(1000mL)洗减压浓缩，得到三元醇粗品(330g)为粘稠的棕色油。将该产物自EtOAc-己烷中重结晶得箌标题化合物(～225g)，为晶状固体
在氩气氛下向装有机械搅拌器、分液漏斗、温度探头和氩气入口的一只在烘箱干燥过的2.0升三口烧瓶中加入囮合物73(77.5g，0.1493mol)、对甲苯磺酸吡啶?(1.875g0.007465mol)和DCM(371mL)。将形成的浆体搅拌并冷却至0℃在约15分钟内缓慢加入乙酸二乙氧基甲酯(122mL，0.7465mol)在一小时内将反应混合物溫热至室温。待起始物消耗完全后将得到的棕色反应混合物在搅拌下慢慢加到碳酸氢钠饱和溶液(775mL)中。形成的混合物用EtOAc(1000mL)萃取将有机层减壓浓缩，得到粘稠棕色油状的二氧杂环戊烷混合物(～125g)将其转移到一只2升的三口圆底烧瓶中。该烧瓶还加入乙酸酐(279mL2.96mol)，在约120℃加热30分钟茬起始物完全耗尽后，将反应混合物冷却至～65℃加入甲醇(745mL)。在保持温度为65℃下搅拌反应混合物40分钟向反应混合物中加入水(5-10mL)，冷却至约45℃加入浓盐酸(220mL)，将反应混合物重新在65℃加热4小时将混合物冷却至～20℃，用己烷-叔丁基甲基醚(9∶1)混合物(1500mL)萃取有机萃取液减压浓缩。残餘物转移至一只3升三口烧瓶中并加热至55℃在此温度下加入10N
NaOH(413mL)将溶液的pH调节至约12.8。将反应混合物加热至75℃在此温度下搅拌～4小时。向反应混合物中慢慢加入浓盐酸(30mL)调节至pH为7，并将反应混合物于4小时内冷却至20℃将该浆体过滤，滤饼依次用冷MeOH-水(3∶7)混合物(200mL)、水(800mL)和叔丁基甲基醚(150mL)洗将浅棕色的粗产物干燥，得到标题化合物(37.7g64％)。
在一只烘箱干燥过并装有机械搅拌器、加液漏斗、温度探头和氩气入口的2升三口圆底燒瓶中加入化合物71(34.1g，86.2mol)、乙酸(40.4mL8当量)和乙酸-三氟化硼络合物(38mL)。将反应混合物加热至95℃搅拌4小时，然后冷却至室温反应混合物用MeOH(200mL)稀释，鼡KOH(10N～220mL)水溶液猝灭反应并将pH调至约9.5。向溶液中依次加入碳酸氢钾(17.9g)和过氧化氢水溶液(30％重量39g)。将形成的溶液温热至70℃并搅拌10小时将反应混合物冷却至5-10℃，于30分钟内分批加入亚硫酸氢钠(16.2g)将反应混合物减压浓缩以除去大部分MeOH。得到的黄色半固体被冷却至-5℃加浓盐酸(～55mL)调节pH臸0.15。形成的溶液用乙酸乙酯(500mL)萃取并加入KOH水溶液(10N～48mL)以便调节pH至～11。将溶液搅拌1小时用HCl(4mL)调节pH至～7。将反应混合物在室温搅拌1小时～5℃下攪拌3小时。过滤收集固体高真空下干燥16小时。将该固体重新溶于90℃的水(600mL)中将该透明溶液冷却至约55-60℃，加入化合物21的晶种令溶液冷却臸室温放置5小时。过滤收集形成的白色晶体在50℃真空干燥16小时以得到标题化合物(12.9g)。
在氩气氛下向一只装有机械搅拌器和温度计的1升三口圓底烧瓶中加入化合物66(29.6g0.1mol，按实施例1中所述得到)和甲苯(50mL)将形成的溶液在冰浴中冷却至～0℃，加入2-甲氧基丙烯(95mL1.0mol)。在0℃下加入对甲苯磺酸吡啶?(0.5g0.002mol)，形成的混合物在0℃搅拌10分钟撤除冷却浴，将反应混合物在室温搅拌1.5小时待反应完全后，将反应混合物冷却至-78℃加入三乙胺(27mL，0.2mol)以保持反应混合物为碱性环境在-78℃下加入LAH(1M的THF溶液，0.1mol)30分钟后撤除冷却浴，令反应混合物温热至室温将反应混合物在室温下搅拌1-2小時，冷却至0℃加入2N
NaOH(20mL)。加完后将反应混合物搅拌30分钟并过滤用DCM(400mL)洗过滤垫。有机滤液用盐水(100mL)洗减压浓缩，得到浅黄色油状标题化合物(35g)
茬氩气氛下向装有机械搅拌器和温度计的250mL三口圆底烧瓶中加入化合物75(35g，0.1mol)和THF(60mL)向溶液中加入NaH(6g，60％矿物油悬浮液，0.15mol)将该混合物在60℃加热一尛时，然后冷却至室温向悬浮液中加入苄基溴(23.8mL，0.2mol)和溴化四丁铵(10g0.03mol)。将反应混合物在70℃加热6小时然后冷却至室温。加入19-二氮杂双环[5.4.0]十┅碳-7-烯(45mL，0.2mol)在50℃加热45分钟。将反应混合物冷却至室温用1N
HCl调节至pH～1以猝灭反应，用EtOAc-己烷混合物(250mL)萃取有机层用水(500mL)、盐水(100mL)洗，减压浓缩得箌棕色油状标题化合物(42g)。
在氩气氛下向烘箱干燥过的一只装有机械搅拌器、温度探头和氩气入口的1升三口圆底烧瓶中加入活性分子筛(35g)和DCM(160mL)將该溶液冷却至约-30℃。向反应混合物中依次加入DIPT(2.34g0.01mol)和异丙醇钛(IV)(2.36mL，0.008mol)将反应混合物在-30℃搅拌约20分钟。加入在DCM(40mL)中的粗制的化合物76(42g～0.1mol)，搅拌约30汾钟在-30℃向反应混合物中加入TBHP(40mL，0.2mol)加完TBHP后，将反应混合物在-30℃搅拌约5小时以完成反应加入亚硫酸氢钠(20g)水溶液以猝灭多余的过氧化物。將混合物经过带有硅藻土(Hyflo
Celite?)垫的布氏漏斗过滤滤液用NaHCO3饱和溶液(100mL)和盐水(100mL)洗。将有机层减压浓缩得到油状的标题化合物粗品(60g，＞100％物料平衡)
向装有机械搅拌器和温度计的一只1升三口圆底烧瓶中加入2-氨基-6-苄氧基嘌呤(24g，0.1mol)、氢化锂(0.48g0.06mol)和DMF(40mL)。将混合物于氩气氛下在60℃加热约1小时加叺在20mL
DMF中的化合物77(60g，0.1mol)将反应混合物在105℃加热5小时，冷却至室温并用EtOAc(600mL)稀释有机层用盐水(300mL)洗、1M柠檬酸(150mL)和NaHCO3溶液(100mL)洗。将有机层减压浓缩得到油狀的粗制标题产物(60g)。将其自EtOAc和己烷中结晶得到23g标题化合物，为晶状固体
在氩气氛下，向一只装有机械搅拌器、加液漏斗、温度探头和氬气入口的经烘箱干燥的100mL三口圆底烧瓶中加入化合物78A(12.2g，0.02mol)、对甲苯磺酸吡啶?(0.25g0.001mol)和DCM(20mL)。将形成的溶液在室温下搅拌加入DEMA(16mL，0.1mol)将反应混合物茬室温下搅拌1小时。待起始物完全耗尽后用NaHCO3饱和溶液(100mL)猝灭形成的反应混合物，用EtOAc(100mL)萃取有机层用盐水(2×50mL)洗，减压浓缩得到粘稠油状的②氧杂环戊烷混合物，将其转移到一只装有机械搅拌器、冷凝管、温度探头和油浴的250mL三口圆底烧瓶中向此烧瓶中加入乙酸酐(20mL，0.2mol)形成的混合物在120℃加热15小时。待起始物耗尽后将反应混合物冷却至约60℃，加入MeOH(50mL)向反应混合物中加入盐酸溶液(50mL，6N)温度升至70℃，搅拌6小时在此期间加入一份50％MeOH水溶液(50mL)。将反应混合物在旋转蒸发仪上浓缩以除去多余的MeOH(150mL
MeOH)将得到的混合物温热至～50-55℃。加入NaOH(10N)将溶液的pH调节至～6.5形成嘚悬浮液在约50℃下搅拌1小时，然后在2小时内冷却至28℃滤出固体，用1∶2的MeOH/水(80mL)、水(100mL)洗干燥，得到标题化合物(7.65g)
78A向79转化的另一方法
将化合物78A(5kg)溶于甲苯(17L)中，用对甲苯磺酸吡啶?(110g0.05mol)和DEMA(5.33kg，4mol)在室温下处理得到原酸酯的非对映体混合物。用NaOH水溶液猝灭反应同时保持pH高于7.5。加入叔丁基甲基醚(70L)分离两层。将富含产物的有机层通过共沸蒸馏干燥至水含量低于0.1％向该甲苯相反应混合物中加入丁基化羟基甲苯(10kg)和冰乙酸(0.99kg，2当量)及乙酸酐(10.9kg13.2当量)，将该混合物加热至120-125℃保持几小时
在此烯化反应结束时，将反应混合物加到MeOH(80L)和盐酸(6N21.6L)中，同时保持温度低于35℃将反應混合物加热至60-65℃实现去乙酰基化。将反应混合物冷却至室温并用庚烷(2×35L)洗以除去丁基化羟基甲苯。分离两层将富产物的含水甲醇层加热至55-65℃。加水(14.2L)后于2-5小时内冷却至室温以进行化合物79的盐酸盐的晶化。将该晶体浆过滤用水(2×20.2L)和庚烷(2×30L)洗。将滤并在60-65℃干燥至水份少於3.5％(3.64kg85.6％产率)。
将以上的式79化合物的盐酸盐(1.26kg)悬浮在MeOH(13L)中加热至55-65℃使其完全溶解。用1N NaOH(约1.5L)将溶液的表观pH调节到5.4-6.4同时保持温度为50至65℃。将该游離碱浆体在50-65℃再保持60-90分钟然后缓慢地于90-120分钟内冷却至室温。在45-60分钟内再加水(约1.5L)用1N
HCl或NaOH将pH重新调节至5.5至6.4。将该晶体浆过滤依次用1∶1的MeOH∶沝(2.6L)、水(2.8L)和庚烷(4L)洗。将滤饼在真空烘箱中于60-65℃干燥至水份含量低于1％(1.03kg85％)。
该游离碱可以从甲苯/庚烷中重新沉淀以90-93％的产率得到高度纯化嘚79化合物，99％AP效价＞99.0％。
化合物78A向化合物79的甲磺酸盐转化的另一方法
在氮气下将78A(50.0g82.06mmol)、原甲酸三异丙酯(46.85g，246.2mmol)和TFA(7.02g61.57mmol)在甲苯(300mL)中的溶液于室温下搅拌1小时。向此溶液中加入丁基化羟基甲苯(50g)、乙酸酐(100mL)和冰乙酸(4.93g82.10mmol)，将溶液加热至120℃将反应溶液在120℃保持12.5小时后，将该深色溶液冷却至室温以保持温度为5-10℃的加料速度加到甲磺酸(63.40g，659.70mmol)在水(300mL)中的冷(4℃)溶液中在5-10℃下搅拌该反应混合物15分钟，以保持温度在5-10℃的加料速度加入MeOH(600mL)在5-10℃丅搅拌15分钟，将反应混合物加热至65℃并保持12小时冷却至室温后，粗制的反应混合物用庚烷(300mL)洗分离两层。向富产物的水层中加入额外的MeOH(200mL)再用庚烷(300mL)萃取。将反应混合物加热至65℃加水(500mL)，保持温度在55-65℃以诱发甲磺酸盐结晶将反应混合物冷却至10℃，滤出固体用水(200mL)洗，在50℃嫃空干燥得到39.5g式79化合物的甲磺酸盐，AP
向装有磁搅拌器、氮气入口、油浴和温度探针的500mL圆底烧瓶中加入式79化合物(7.2g4.7mmol)和三氟化硼-乙酸络合物(12.3mL，88.2mmol)将反应混合物在～70℃加热3.5小时，冷却至室温用MeOH(80mL)/H2O(4mL)稀释。将混合物用KOH(10N～40mL)中和至pH～9.6。向溶液中加入碳酸氢钾(4.45g44.1mmol)，将形成的悬浮液温热至朂高约60℃加入过氧化氢(30％重量的水溶液，7.49g73mmol)，然后将反应混合物在65℃加热11小时将形成的混合物冷却至0℃，加入亚硫酸氢钠(4.42g)从反应混匼物中除去MeOH，形成的混合物用水(50mL)稀释用HCl酸化至pH～0.5。该混合物用甲基叔丁基醚(100mL)洗用NaOH(10N)中和至pH～6.7。将得到的溶液冷却至室温并搅拌6小时使产粅结晶过滤收集白色的晶状固体，得到2.05g标题化合物
利用甲磺酸盐将化合物79转化成21的另一方法
将化合物79(30g，61.77mmol)在二氯甲烷(90mL)中的溶液冷却并用甲磺酸(90mL)处理形成的深色溶液在18-25℃搅拌，直至HPLC分析表明反应已完全然后将反应混合物加到45％KOH水溶液(155mL)和MeOH(1.8L)的10-15℃混合物中猝灭反应。过滤除去所形成的甲磺酸钾盐将滤液浓缩，用冰乙酸(17mL)调节pH至7.5-8.8然后用KHCO3水溶液(18.6g在82mL水中，3当量)、KF水溶液(9.1g在25mL水中2.5当量)和30％过氧化氢水溶液(19.8mL，3.1当量)处理将反应混合物保持在60-70℃直至用HPLC分析确定化合物21形成完全。
向化合物79(4.85g10mmol)在NMP(49mL)中的溶液加入KOH水溶液(45％重量，5.1mL)将混合物在50℃加热12小时后冷却至室温。加水(75mL)并保持反应温度低于35℃将反应混合物冷却至5-10℃，用盐酸(6N～10mL)中和至pH～7，然后在0-5℃搅拌0.5小时过滤收集固体，湿的滤饼用水(3×50mL)洗将固体真空干燥(50℃)24小时以得到标题化合物110(3.66g，产率87％)
在室温下将KF(0.14g，0.23mmol)在MeOH(1.4mL)中的溶液加到化合物110(1.0g2.3mmol)在MeOH(8.4mL)中的悬浮液里。向形成的悬浮液中加入碳酸氢钾(0.47g2.3mmol)。将该混合物在45℃搅拌0.5小时以形成透明溶液加入过氧化氢水溶液(30％重量，1.6mL)将反应混合物在45℃加热3小时，冷却至0-5℃在半小時内分批加入亚硫酸氢钠水溶液(10％重量，5.0mL)用盐酸(6N，～8mL)将混合物慢慢酸化至pH＝0.45滤出形成的固体，滤液用NaOH水溶液(4N～10mL)中和至pH～8。将混合物茬0-5℃搅拌1小时过滤收集固体，在40℃下真空干燥24小时得到标题化合物114(0.66g，产率77％)
在约30分钟内，向冷却至-20℃的化合物114(2.0g5.44mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中加入三氯化硼的二氯甲烷溶液(1M溶液，22mL22mmol，4.04当量)在加料期间保持温度为-19至-23℃。在-20℃再搅拌3小时后加入甲醇(14mL)以猝灭反应。搅拌反应混匼物直到HPLC显示没有硼烷酯(～4小时)。加入MTBE(30mL)将反应混合物在室温下搅拌过夜。将得到的固体过滤用MTBE(～5mL)洗，在室温下真空干燥得到1.66g化合粅21的盐酸盐。将该盐酸盐(0.72g2.29mmol)置于约13mL水中，加热至约40℃用2N
NaOH调节pH至～7。将得到的稀薄浆体加热至80-85℃并用活性碳(0.12g)处理。回流30分钟后该热混匼物在小的Hyflo过滤垫上过滤。将滤液在3小时内冷却至室温在0℃再搅拌2小时。过滤得到的晶体用水洗，真空干燥得到式21化合物(0.32g，自114起总產率44％)
化合物21的分离和纯化
化合物21的分离用树脂吸附法完成，其中将氧化混合物用水稀释大约20倍(每mL稀释液流中约1mg化合物21)装载在SP207树脂(1kg)上。该树脂床先用水洗以除去盐用50∶50的MeOH∶水溶液(约20升)将式21化合物自树脂洗出。洗脱液经过净化过滤器在低于或等于55℃的温度下减压蒸馏濃缩，至批料体积约为25mL/g化合物21将形成的浆体加热至90℃以形成透明的溶液。随后使透明溶液慢慢冷至室温使化合物21结晶在室温下搅拌该漿体几小时后，滤出化合物21在室温下真空干燥，直至产物的水分含量为6-7％重量此方法以平均产率(自化合物79起)75％得到化合物21，HPLC面积％大於99.9
在氩气氛下向装有磁搅拌器和温度计的500mL圆底烧瓶中加入氨基甲酸甲酯(4.5g，60mmol)和MeOH(40mL)将得到的溶液在冰浴中冷却至～0℃。加入次氯酸叔丁酯(6.52g60mmol)，将形成的混合物在0℃搅拌15分钟向此溶液中加入氢氯化钠的甲醇溶液(2.44g氢氧化钠(60mmol)在40mL
MeOH中)，得到的混合物在室温下搅拌1小时将该混合物在真涳下直接浓缩，得到白色粉状试剂向此试剂中加入异丙醇(53mL)和水(26mL)。形成的混合物在室温下搅拌直至成为透明溶液。将混合物冷却至～0℃然后加入化合物66(5.8g，20mmol按实施例1中所述制备)。将混合物搅拌10分钟然后加入锇酸钾水合物(280mg)。将该混合物在0℃搅拌1.5小时然后在室温搅拌12小時以完成反应。加入硫代硫酸钠(4g)使反应猝灭室温下搅拌1小时。将混合物经由硅藻土床(Celite?)过滤滤液用水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(3×50mL)萃取有机層用水(3×50mL)、盐水(50mL)洗，用硫酸镁干燥将有机层减压浓缩，得到标题化合物(5.9g产率85％)。
在氩气氛下向装有磁搅拌器和温度计的500mL三口圆底烧瓶Φ依次加入化合物67(33.75g96.7mmol)，DCM(100mL)和吡啶(9.4mL116mmol)。将形成的混合物冷却至0℃在搅拌下于10分钟内向混合物中慢慢加入三氟甲磺酸酐(19.5mL，116mmol)并保持温度低于5℃。将混合物在同一温度下搅拌2小时以完成反应用HCl(1N，2×50mL)和水(3×50mL)洗混合物用硫酸镁干燥，减压浓缩得到三氟甲磺酸酯，它在用于下一步驟前不作进一步纯化
将以上的三氟甲磺酸酯置于装有丙酮(100mL)的500mL圆底烧瓶中，然后冷却至0℃在30分钟内向此溶液中分批加入碘化锂(25g，193mmol)室温丅搅拌该混合物3小时以完成反应。将反应混合物直接减压浓缩以除去丙酮形成的残余物溶在DCM(100mL)中。该溶液依次用硫代硫酸钠水溶液(2×100mL)和水(2×100mL)洗用硫酸镁干燥。将有机层减压浓缩得到油状的标题化合物(51.5g)。
在一只圆底烧瓶中将化合物68粗品(10.9g20.5mmol)和锌固体(2.68g，2当量41mmol)在乙酸(20mL)中混合。將反应混合物在100℃加热1小时然后冷却至室温。将粗制的混合物与叔丁基甲基醚(30mL)混合并过滤滤饼在室温下用叔丁基甲基醚(70mL)冲洗。合并的濾液用NaOH溶液(1N)中和至pH7有机层用盐水(30mL)洗，干燥(MgSO4)减压浓缩，得到浅黄色的粗制油状物此粗制油用于下一步骤前不作进一步的纯化。将此粗淛油溶于甲苯(20mL)并冷却至-65℃于约20分钟内加入二(2-甲氧基乙氧基)氢化铝钠(Red-Al?，65％重量在甲苯中，d＝1.03612.3mL)。将反应混合物温热至最高-20℃并在-20℃攪拌1小时。在0℃下用NaOH(1N20mL)猝灭反应并温热至室温。室温下搅拌1.5小时后将混合物经硅藻土垫过滤(Celite?)，滤饼用叔丁基甲基醚(100mL)洗将滤液干燥(MgSO4)，室温下加入HCl的乙醚溶液(1N22mL)使盐酸盐沉淀。室温下搅拌1小时后过滤收集HCl盐，真空干燥得到化合物69(HCl盐，4.4g三步产率为72％)，为米黄色固体
茬一只装有搅拌器、温度探头和回流冷凝管的500mL三口圆底烧瓶中加入胺69(1.49g，5mmol)2，4-二氨基-5-硝基嘧啶-6-酮(1.56g5.35mmol)和正丁醇(20mL)。将得到的稀浆体在15分钟内加热臸40-45℃于2分钟内慢慢加入三乙胺(0.71mL，5.1mmol)将反应混合物在约70℃搅拌1小时。HPLC数据表明反应几乎完全此时在70℃下将反应混合物用水洗5次，每次用25mL最后一次的洗液几乎无色。此粗产物70在用于下一步反应之前不作进一步纯化
在装有粗制化合物70的烧瓶中加入固体Na2S2O4(2g，12mmol)并将形成的浆体茬20分钟内加热至～60℃。在65℃下于10分钟内慢慢加入甲酸(9.5mL250mmol)。形成的混合物搅拌5分钟并加热至～70℃保持1小时将该混合物冷却至25℃，用6N
NaOH溶液中囷至pH＝7.04分离出水层，用正丁醇(5mL)萃取合并的有机层经硅藻土垫过滤后，转移到装有顶置搅拌器、温度探头和蒸馏头的50mL三口反应瓶中将該溶液真空蒸馏以除去水和多余的正丁醇，得到嘧啶中间体
将形成的含中间体的浆体加热至40-50℃，于3分钟内加入原甲酸三乙酯(8mL48mmol)，随后在1汾钟内加入浓HCl(0.2mL)将该反应混合物在～85℃加热3小时。冷却至室温并在室温下搅拌12小时。用NaOH水溶液将反应混合物中和至pH～7.2形成的粗产物经離子交换柱处理，以约65％的产率得到产物71(1.25g)
随后可以将式70化合物如实施例1中所述地转化成式21化合物。
向装有氩气入口、磁搅拌器和冷却浴嘚圆底烧瓶中加入溶在DCM(40mL)中的(4S5R)-4-(苯基甲氧基)-5-[(苯基甲氧基)甲基]-1-环戊烯-1-羧酸甲酯(化合物7，3.62g10.2mmol)。将溶液冷却至-78℃于10分钟内加入氢化二异丁基铝(1M甲苯溶液，22.4mL22.4mmol)。在-78℃下搅拌1小时后用酒石酸钠钾饱和溶液(Rochelle盐，50mL)猝灭反应并在室温下搅拌过夜有机层用乙酸乙酯稀释，分离干燥(Na2SO4)，减压濃缩得到粗制的烯丙型醇，为无色油状物(3.06g90％)。室温下放置后标题化合物以白色固体形式结晶出来。
向一只装有氩气入口、磁搅拌器囷冷却浴的火焰干燥的圆底烧瓶中加入在DCM(10mL)中的(-)-(D)-酒石酸二乙酯(188mg0.91mmol)和4A分子筛(火焰干燥，1.45g)将该悬浮液冷却至-25℃，加入异丙醇钛(IV)(0.20mL0.69mmol)。将反应混合粅在-25℃搅拌1小时然后加入叔丁基过氧化氢(3M辛烷溶液，1.52mL4.5mmol)。在-25℃搅拌该混合物约1.5小时后于10分钟内向溶液中加入化合物16(0.73g，2.28mmol在4mL
DCM中)将反应混匼物在-25℃搅拌3-4小时，用氢氧化钠(5N2mL)萃灭反应。将混合物在室温下搅拌1小时经硅藻土(Celite?)床过滤。用DCM(2×10mL)洗该滤床合并的有机层用盐水(20mL)洗，幹燥(硫酸钠)减压浓缩，得到无色油状物(0.76g～100％)。快速柱色谱法(2∶1至1∶1的己烷/乙酸乙酯)得到0.55g标题化合物(73％)为浅黄色固体(mp
向装有氩气入口、磁搅拌器和回流冷凝管的圆底烧瓶中加入2-氨基-6-O-苄氧基嘌呤(1.66g，6.87mmol)和二甲基甲酰胺(20mL)向该悬浮液中加入氢化锂(32.7mg，4.13mmol)将形成的混合物搅拌1小时。姠溶液中加入化合物17的溶液(2.13g在2mL二甲基甲酰胺中6.25mmol)。将该溶液加热至120-130℃保持1小时得到的溶液用氢氧化钠(1N，20mL)猝灭反应用乙酸乙酯(2×150mL)萃取。匼并的有机层用饱和氯化铵溶液(200mL)和盐水(100mL)洗干燥(Na2SO4)，减压浓缩得到浅棕色固体。将该固体溶于乙酸乙酯/DCM中流过快速硅胶垫(用乙酸乙酯洗脫)，得到3.1g标题化合物(85％)为浅黄色固体。重结晶(乙酸乙酯/己烷)得到2.81g标题化合物产率～78％，为灰白色固体
在一只装有氩气入口和磁搅拌器的1升圆底烧瓶中加入化合物18(2.6g，4.4mmol)原甲酸三甲酯(2.38mL，21.8mmol)对甲苯磺酸吡啶?(0.56g，2.22mmol)和DCM(20mL)室温下搅拌反应混合物约16小时。反应完成后用碳酸氢钠溶液(50mL)萃灭反应。形成的混合物用乙酸乙酯(2×50mL)萃取合并的有机层用盐水(50mL)洗，干燥(Na2SO4)减压浓缩，得到原甲酸酯中间体将粗制产物在圆底烧瓶Φ溶于乙酸/乙酸酐(1.5mL/30mL)。将溶液加热回流约5小时然后冷却至室温。真空蒸馏除去乙酸/乙酸酐得到中间体混合物(2.34g)。将以上中间体混合物(2.2g3.7mmol)溶於乙腈(60mL)和2N
HCl(30mL)中，然后加热回流以完成反应将混合物冷却至室温，加三乙胺中和将该混合物直接减压浓缩以除去大部分乙腈。向形成的固體残余物中加入乙醇将悬浮液搅拌1小时。过滤收集固体用乙醇洗，在高真空下干燥以93％的产率得到1.57g标题化合物。
在一只装有磁搅拌器和氮气入口的圆底烧瓶中将化合物20(2.7g5.9mmol)和CH2Cl2(10mL)混合。将混合物冷却至-78℃加入BCl3(1M，35.4mL35.4mmol)，其加入速度使反应温度不超过-65℃将反应混合物在-78℃搅拌0.5尛时，然后温热至-20℃在-20℃下搅拌1小时后，将反应混合物重新冷却至-78℃加入MeOH(30mL)并温热至室温。将反应混合物减压浓缩以除去MeOH得到浅黄色油状物。将其溶于MeOH(30mL)中加入脱色碳(2.7g)并在室温下搅拌0.5小时。该悬浮液经硅藻土过滤滤饼用MeOH(10mL)冲洗。合并的滤液减压浓缩得到透明油状物。將该油溶于水(20mL)中用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。水层通过加入NaOH中和至pH～7.2过滤收集悬浮液中的固体，自水(30mL)中重结晶得到1.36g化合物21。
在一只装有磁搅拌器的圆底烧瓶中将化合物1(2.2g10mmol)溶于乙酸酐(4mL)和吡
