请问brd4抗体能不能做免疫组化哪能做

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2020-04-14 08:33 标签： 免疫组化哪能做
各位战友小弟想请教以下问题，如果某一抗的说明书上的应用范围只写明western blot那我可以用该抗体来做免疫组化哪能做吗？我问过改公司的人也问过实验室的老师，他们嘟说应该可以的可以拿来试下。western blot和免疫组化哪能做的抗原抗体结合原理不都是一样的吗我想两者的抗体应该可以通用才对啊，但我最菦用购买的适用于western的抗体做免疫组化哪能做一直作不出阳性结果石蜡和冰冻切片均做过，均无阳性结果请各位赐教啊。我的冰冻切片免疫组化哪能做步骤如下请各位看看有没问题:

10%水合氯醛麻醉动物后生理盐水，4％多聚甲醛先后灌注取脑，4％多聚甲醛4摄氏度过夜然後再用2～3天进行梯度蔗糖脱水（15％，30％）脱水完成后进行冰冻切片（30微米），切片后立即进行免疫组化哪能做步骤如下（我用的是漂浮法，每孔2张脑片试剂盒是福建迈新公司生产的即用型免疫组织化学超敏SP试剂盒）：

1 PBS洗三次，每次5分钟


2 吸去PBS, 每孔滴加2～3滴过氧化物酶阻斷剂（试剂A）室温下孵育10分钟，阻断内源性过氧化物酶
3 PBS洗三次，每次5分钟
4 吸去PBS,每孔滴加2～3滴正常非免疫动物血清（试剂B）室温下孵育10分钟。
5 吸去血清每孔滴加200微升一抗（1：200或1：100，稀释液为：1%BSA＋0.5%Triton）4摄氏度过夜
6 吸去一抗，PBS洗三次每次5分钟
7 吸去PBS，每孔滴加2～3滴生物素標记的二抗（试剂C山羊抗兔），室温下孵育10分钟
8 PBS洗三次每次5分钟
9 吸去PBS，每孔滴加2～3滴链霉素－过氧化物酶溶液（试剂D）室温下孵育10汾钟
10 PBS洗三次，每次5分钟
11 吸去PBS每孔滴加2～3滴新鲜配置的DAB显色液，反应2～3分钟后用蒸馏水洗涤表片后进行脱水透明，步骤为：75％酒精（2分鍾）80％酒精（2分钟），95％酒精（2分钟）100％酒精（2分钟），100％酒精（2分钟）二甲苯（5分钟），二甲苯（10分钟）最后中性树胶封片。

結果做出来可以看到黄色的背景但是看不到有阳性的细胞，也看不到视野中有细胞的结构或轮廓（我们实验室的显微镜的摄像头坏了暫时还没修好，所以暂时还没有照片）顺便提一下，我用的一抗是检测磷酸化蛋白的抗体请各位支招啊！！谢谢

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