临床上哪种血宫颈涂片染色液方法应用的最广泛？

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2012-03-04 08:25 标签： 血涂片染色
胡奎军 (黑龙江省宝清县八五三农场医院& 155630)
【中图分类号】R446.1&& 【文献标识码】A&& 【文章编号】 (1-02
【摘要】& 血涂片是通过特定的方法将血液按一定方向均匀涂开的过程，微观上使细胞由球形变为平面形或近平面形平铺在载玻片上。目的 讨论血涂片的染色方法。方法 通过经验总结归纳血涂片的染色方法。结论 制备厚薄适宜、分布均匀、染色良好的血涂片是血液学检查的重要基本技术之一。
【关键词】& 血涂片 染色方法
&&&&&&& 血涂片是通过特定的方法将血液按一定方向均匀涂开的过程，微观上使细胞由球形变为平面形或近平面形平铺在载玻片上。血涂片的显微检查是血液细胞学检查的基本方法，临床上应用极为广泛，特别是对于各种血液病的诊断具有重要的价值，近年来血细胞分析仪的广泛应用，血涂片的观察也可作为判断仪器结果的简易方法。比如观察10个高倍视野血涂片中白细胞和血小板数，估计血内这些细胞的数量，借以作为仪器结果分析后质控的参考。
&&&&&&& 血涂片制备是否合格、染色的好坏直接关系到检验结果的质量。涂片制备和染色不良，常使细胞鉴别发生困难，甚至导致错误结论。
&&&&&&& 染色的目的是使细胞的主要结构，如细胞膜、细胞质、细胞核等染上不同的颜色，以便于镜下观察识别。
&&&&&&& 血涂片染色包括两个过程：固定和染色。固定是将细胞蛋白质和多糖等成分迅速交联凝固，以保持细胞原有形态结构不发生变化。常用的染色方法有瑞特染色法(Wright)、姬姆萨染色法(Giemsa)等。
&&&&&&& 一& 瑞特(Wright)染色法
&&&&&&& 本法的特点是将固定和染色合并在一起进行，手续简便，染色时间短，对白细胞特异性颗粒着色较好，但对核的着色略差。
&&&&&&& 1．瑞特染料& 由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成的复合染料。伊红为钠盐，有色部分为阴离子。亚甲蓝为氯盐，有色部分为阳离子。亚甲蓝和伊红的水溶液混合后，产生一种不溶于水的伊红化亚甲蓝(ME)中性沉淀，即瑞特染料，溶解于甲醇中，即成为瑞氏染液。甲醇的作用一方面使ME溶解，并解离为亚甲蓝(M+)和伊红(E-)，两种有色离子可以选择性地与细胞内不同成分结合。另一方面因其具有强大的脱水作用，可将细胞瞬间固定，蛋白质被沉淀为颗粒状或者网状结构，表面积增加，提高对染料的吸附作用，增强染色效果。
&&&&&&& 2．缓冲液& pH6.4～6.8的磷酸盐缓冲液，其作用是使染色环境维持在弱酸性，达到最佳的染色效果。&
&&&&&&& 3．细胞的着色原理& 细胞的着色既有化学的亲和作用，又有物理的吸附作用。不同的细胞由于其所含化学成分不一样，化学性质各不相同，所以对染料的亲和力也不一样。
&&&&&&& (1)细胞中的碱性物质与酸性染料伊红结合染成红色，因此，该物质又称为嗜酸性物质。如红细胞中的血红蛋白及嗜酸粒细胞中的嗜酸性颗粒等与伊红结合。&
&&&&&&& (2)细胞中的酸性物质可与碱性染料亚甲蓝结合而染成蓝紫色，该物质又称嗜碱性物质。如淋巴细胞胞质及嗜碱粒细胞的颗粒为酸性物质，与碱性染料亚甲蓝结合。
&&&&&&& (3)中性颗粒呈等电状态与伊红亚甲蓝均可结合，染淡紫红色为中性物质。
另外细胞核蛋白主要由脱氧核糖核酸和强碱性的组蛋白等组成，与酸性伊红结合染成红色，但因核蛋白中还含有少量的弱酸性物质，与碱性亚甲蓝作用染成蓝色，因含量太少，蓝色反应极弱，故也被染成紫红色。&
&&&&&&& (4)原始红细胞和早幼红细胞的胞质含有较多的酸性物质，与亚甲蓝亲和力强，故染成较浓厚的蓝色；随着细胞的发育，晚幼红细胞阶段既含有酸性物质，又含有碱性物质(Hb)，既能与碱性染料亚甲蓝结合，又能与酸性染料伊红结合，故染成红蓝色或灰红色；当红细胞完全成熟，酸性物质彻底消失后，只与伊红结合，则染成粉红色。&
&&&&&&& 4．pH对细胞染色的影响& 细胞着色对氢离子浓度十分敏感。细胞各种成分均由蛋白质构成，由于蛋白质是两性电解质，所带电荷的正负数量随溶液pH值而定。对某一蛋白质而言，如果环境的pH小于其等电点(PI)，则该蛋白质带正电荷即在酸性环境中正电荷增多，易与酸性伊红结合，染色偏红；相反，当环境的pH大于PI即在碱性环境中负电荷增多，则易与亚甲蓝结合染色偏蓝。因此，要使用清洁中性的载玻片、优质的甲醇做溶剂和用缓冲液(pH6.4～6.8)来调节染色时的pH值，达到满意的染色效果。
&&&&&&& 5．操作&
&&&&&&& (1)用蜡笔在血膜两头划线，以防染液溢出，然后将血膜平放在染色架上。&
&&&&&&& (2)用瑞氏染液3～5滴覆盖整个血膜，固定细胞0.5～1分钟。
&&&&&&& (3)滴加等量或稍多的缓冲液，用吸球将其与染液吸匀，或者摇动玻片染色5～10分钟。
&&&&&&& (4)慢慢摇动玻片，然后用流动水从玻片的一侧冲去染液，待血片自然干燥后(或用滤纸吸干)，即可镜检。
&&&&&&& 6．染色效果分析
&&&&&&& (1)正常情况：血膜外观呈淡粉红色或琥珀色。显微镜下，成熟红细胞呈粉红色。白细胞胞质中颗粒清楚，并显示出各种细胞特有的色彩，细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。
&&&&&&& (2)染色偏酸：红细胞和嗜酸粒细胞颗粒偏红，白细胞核呈淡蓝色或不着色。
&&&&&&& (3)染色偏碱：所有细胞呈灰蓝色，颗粒深暗；嗜酸粒细胞可染成暗褐色，甚至紫黑色或蓝色；中性颗粒偏粗，染成紫黑色。
&&&&&&& 二& 姬姆萨(Giemsa)染色法
&&&&&&& 姬姆萨染料由天青和酸性染料伊红组成的复合染料。染色原理、缓冲液与瑞特染色法大致相同。本法对细胞核结构和寄生虫着色较好，结构显示更为清晰，但细胞质和颗粒着色较差。&
&&&&&&& 三& 瑞-姬染色法&
&&&&&&& 瑞特染色液和姬姆萨染色液对细胞进行染色时有各自的显倒特征，前者对细胞浆和颗粒着色较好，后者对细胞核结构显示清晰。因此将瑞特染料和姬姆萨染料混合，甲醇溶解后组成瑞-姬染色液能取长补短、优势互补，其中所使用的缓冲液与瑞特染色法相同。用该混合染液对血细胞进行染色，细胞核、细胞浆和细胞内颗粒着色均有上佳表现，着色鲜艳，对比鲜明，是临床上广泛使用的方法。
参 考 文 献
[1]景戍.血细胞形态检查的质量控制及临床意义[J].检验医学与临床,):169-170.&
[2]周茂莲.外周血细胞检验的注意点[J].实用医技杂志,):.&
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