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南京便携式浮游菌采样器苏州浮游菌采样仪PBS-E细菌采样器厂家
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加工定制是品牌奥斯恩型号PBS-E测量范围1测量对象1测量精度1尺寸1（mm） mm重量1（kg） kg
南京便携式浮游菌采样器苏州浮游菌采样仪PBS-E细菌采样器厂家
产品特点&PBS-E型浮游细菌采样器是一款高效的多孔吸入式尘菌采样器。它根据安德森撞击法原理设计，本产品是目前国内同类产品中生产工艺要求***高、细节处理上***全面的一款仪器。本仪器是继PBS-100后推出的一款经济型浮游菌采样器，操作简便，在目前国内同类产品处于领先水平。PBS系列产品都是严格按照ISO14698-1：&2003&规范设计，符合GB/T及新版GMP的***新要求。本仪器采样流量是100L/min。全系产品都可使用标准90&毫米培养皿。&技术参数&&采样流量100L/min&&误差&&4%&充电时间4小时&锂电池运转时间连续工作5-7小时&机身材质阳极氧化铝&采样头材质材质SUS316或铝合金&尺寸￠120MM*160MM&重量1.8KG(不锈钢采样头)，1.5KG(铝合金采样头)&标准预置体积100L，500L，1000L&采样体积设定范围可任意设定50-12000L&出厂标配主机、充电器、仪器箱、说明书、出厂检测报告，合格证&可选配件&不锈钢采样头、铝合金采样头、等动力采样头、压缩空气采集器、托架&标准配置&:主机一台、充电器一套、仪器箱一只、说明书一份、出厂检验报告一份、合格证一份&
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深圳市宝安区凤翔科技经营部是深圳市奥斯恩净化技术有限公司旗下全资子公司，专业从事空气质量监测系统、安装施工、维护,及洁净室配套设备，研发生产、销售及提供完整的环境监测治理技术方案的高科技企业。在工地扬尘监测治理领域取得一定的成果和发展。
凤翔人始终秉承'诚信、专业，敢于创新、持续发展'的经营理念致力于空气质量监测系统，工地扬尘在线监测仪，景区负氧离子检测仪，户外气象监测站等行业，立足深圳，服务全国。
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图片验证码& 【求助】蛋白表达及菌体破碎问题
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【求助】蛋白表达及菌体破碎问题
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【求助】蛋白表达及菌体破碎问题
我最近做蛋白表达时，蛋白表达量尚可，但就是在超声波碎菌时老是破不碎，后来做了相同条件下未诱导菌体进行破碎，发现很容易破碎，请教各位大侠这是怎么一回事啊？
我的具体操作如下：培养两瓶 200ml BL21（DE）plysS 4小时，OD值0.9，对其中一瓶加入IPTG置37度诱导表达，IPTG终浓度为0.1mmol/l，另一瓶保持不变。诱导过夜，离心收获菌体，PBS洗涤两次后30ml PBS悬浮菌体，超声破碎30分钟（5秒、9秒），保证冰浴。然后对菌体裂解液分别以6000转、12000转离心，SDS-PAGE检测，发现目的蛋白及菌体蛋白绝大部分存在于6000转沉淀中，上清中只有很少菌体蛋白（诱导后的）；而未诱导的则沉淀很少，且菌体蛋白大部分存在于上清中。请各位大侠帮小弟看看是怎么回事？是不是因为我的蛋白表达影响到了菌体细胞壁的结构了？可我的蛋白应该是包涵体表达啊，晕了！
另外，在此前我做了大量的工作对菌体进行破碎，包括反复冻融，溶菌酶，盐酸胍（1-3mol/L，我不想用太高浓度的，尽管可以），DOC，SKL还有一些文献上介绍的一些裂解液配方，均无法破碎，我简直要无语了！！！！
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我最近在做蛋白表达.用的是PET 和DE3.我也有一些问题不懂，希望可以和你共同探讨学习。我表达的是分泌型蛋白，以下是我对你实验的拙见：
1.诱导的温度是否可以在重新调
2.超声的能量你用的多大的数值？是否 在保证蛋白不变性的前提下，加大超声条件，超声时间适当可以延长。直到菌液清亮透明（黄油状）
3.取溶菌酶作用的最佳浓度，同时在反复冻融的过程中要不时的调节pH到它可以发挥最大效力的数值
4.破包涵体以及其它方法的过程怎么样？
5.你用SDS-PAGE检测沉淀中的目的蛋白的分子量怎么样？
6.蛋白表达影响菌体细胞壁的结构这一问题我也想知道
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1，诱导温度我以前用的20度，后来发现37度诱导表达量较高就采用了37度，但对破碎效果的影响我正准备再试试。
2，我用的超声仪属于前辈级机器（但保证能用），我也不知道具体功率的大小，只知道以往所用均为35%~45%，我用的是38%。超声时间我延长过，但诱导后的始终均是浑浊菌体悬液。甚至有时发生分层，估计是变性了。
3，溶菌酶我用的效应浓度为1mg/ml，PH8.0，37度水浴1h，不管用。不知道你一般用多少浓度？溶菌酶能否与其它一些低浓度的离液剂或者去污剂联用？
4，冻融法也用过，-20--37度，3次，不管用。再者就是一些裂解液，效果实在让人郁闷。
5，SDS-PAGE 检测沉淀中确实是目的蛋白，与全菌直接检测分子量相同。不知你对这一点有什么想法？
6，不知哪位大侠对蛋白表达是否会影响菌体胞壁结构这一问题不吝赐教？
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1.诱导温度的选择是以什么为标准（产量与表达蛋白的分离率）建议查文献核实
2.菌液离心后上清做SDS-PAGE检测。看是否有目的蛋白，并收集。多次洗细菌沉淀并重悬细菌，超声只破碎离心收集的细菌细胞（防止菌液内已经有的蛋白在超声时与细菌一起超声变性发生分层）
3.超声破碎细菌细胞,并纯化包含体后裂解释放包涵体，离心收集上清跑电泳看是否有目的蛋白，有收集，并收集包含体，对其处理如下（包含体的处理是我在园子里找到的，你在园子里搜索一下）
10 000 r·min - 1离心15 min ,弃上清。
将沉淀用3 mol·L - 1尿素含0. 2 g·L - 1 TritonX2100 反复洗涤处理得到纯化的包涵体, 称重。
包涵体用8 mol·L - 1 尿素含10 mmol·L - 1二硫苏糖醇(DTT) 溶解变性。
包涵体溶解变性后10 000 r·min - 1离心15 min ,清除不溶性杂质。
上清直接用复性液: 50 mmol·L - 1 Tris·Cl , 1 mmol·L - 1 EDTA , 1 mmol· L - 1苯甲基磺酰氟(PMSF) ,不同浓度的氧化型谷胱甘肽( GSSG) ,还原型谷胱甘肽( GSH) 稀释,使蛋白质终浓度不超过100 mg·L - 1 ,尿素终浓度为0. 5～ 1. 0 mol·L - 1 ;在其他条件不变的情况下,分别改变GSSG和GSH 浓度、温度及复性时间,PEG20000 浓缩后,离心。
测上清总蛋白质量,计算复性率,找出最佳复性条件。
4.溶菌酶10mg/ml。在作用过程中菌液的pH会下将，所以最好多次重新调节pH&8(你查一下它的作用原理以及大肠杆菌的特性就知道）
5.冻融法我们是10次，最少六次
6.我感觉蛋白表达影响菌体细胞壁的结构的可能性较小，主要还是包含体的处理上（我也是新手）见笑了，供大家一起学习
7.关于前辈级机器，如果前辈用可以，那么你应该在自己漠漠条件了
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1.菌体破碎的检测指标:镜检,才可直观知破全没有?
2.反复冻融，溶菌酶，盐酸胍（1-3mol/L，我不想用太高浓度的，尽管可以），DOC，SKL还有一些文献上介绍的一些裂解液配方，均无法破碎?
这些方法我都试过,菌是BL21（DE3）均无问题.你不成功的原因可能在于细节.
3.未诱导的则沉淀很少，且菌体蛋白大部分存在于上清中
结论是对的
4.IPTG置37度诱导表达，IPTG终浓度为1mmol/l，3.5-4.5小时是最佳时间,再长则减.你可做单因子优化.
5.超声破碎30分钟（5秒、9秒），保证冰浴。然后对菌体裂解液分别以6000转、12000转离心，SDS-PAGE检测，发现目的蛋白及菌体蛋白绝大部分存在于6000转沉淀中，上清中只有很少菌体蛋白（诱导后的）
结论正确,但还可优化
但要注意超声的声音,如声音有异,则是没有工作.原因参数设置不对,产热,温度高,间隔时间太短.
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今明天我会再做一下IPTG诱导表达，温度20度，IPTG 0.1mmol/L。
1，镜检或许是检测菌体破碎的金指标，但如果菌体有破碎，包含体是不应该在6000转沉淀下来啊，分级离心后电泳检测应该也可以说明一点问题。不过下面我会用镜检做一下看。
2，反复冻融、盐酸胍（1-3mol/L）我重复过，确实不行。溶菌酶有可能是PH控制不好，我会重做再试试。DOC我用2％，悬浮后能释放核酸（悬液变粘稠），但超声破碎效果确实不行，我分别取了20分钟、60分钟和90分钟的超声裂解液电泳检测。SKL效及其它只做过一次，效果更差。
3，IPTG诱导我做过优化，终浓度0.1和1mmol/L没有太大区别，所以我一直用0.1。
4，我一直搞不明白，同等超声条件下为什么未诱导菌体可以很容易破碎，而诱导表达后就不容易破碎了呢？这应该不是超声的原因吧，否则未诱导的也不应该破碎啊
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1.用不用溶菌酶都无多大关系.,
2.DOC用2％,悬浮后并不能释放核酸,悬液变粘稠是由于DOC.
3.IPTG诱导我做过优化，终浓度0.1和1mmol/L没有太大区别，所以一直用0.1?
优化方法不对
同时做时间双因子\培养基多因子
温度20度可分泌表达,诱导过夜
4.破碎只用缓冲液即可
5.包含体是不应该在6000转(4000g)可沉淀80%
可找我以前发的超声破碎帖子作参考
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我也在作pET载体在BL21(DE3)中的表达，目的蛋白的表达量尚可，可是纯化后在洗脱液中看不到目的蛋白，不知道蛋白哪里去了，我现在最烦恼的事情就是细胞的破碎问题，
溶菌酶破碎差，我决定用超声波，我发现超声波容易导致溶液起泡沫，起了泡沫的蛋白就变性了是吗，即使真的使蛋白变性，用His-bind resin就不能亲和
纯化了么，好郁闷！
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我也是做pET载体在BL21(DE3)中的表达，我觉得如果洗脱液里没有蛋白，那很可能是目的蛋白在流出液中，也就是它没和介质亲和上．你的裂解液的PH值是8.0吗？我看过一本书上面说在8.0时介质比较容易和目的蛋白亲和．
另外，我是用超声破碎的，在冰浴中，有时操作不好也会起沫，可是过柱后也可以回收到目的蛋白的，而且我是在变性条件下回收的，所以我想尽量少起泡沫就可以纯化出来了吧．
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超声波容易导致溶液起泡沫?
是你操作的问题,加大超声液的用量,超声头深入液内.在冰消融过程中调整超声头位置,不要出液面,否则很易现泡.
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&&细菌生物膜体外培养 96孔板法求助
细菌生物膜体外培养 96孔板法求助
在我用96孔板培养生物膜时，弃掉培养基后孔底的就是生物膜吗？还是细菌沉淀？我在移除培养基时用的是排枪，很容易把底部的物质给吸出。后来我直接把96孔板中的培养基甩出去，这样可以保留底部的沉淀，但是在用PBS冲洗的时候发现无论多小心的加PBS缓冲液都会在孔底部悬起一些类似膜的絮状物（这就是生物膜吗），然后在移除PBS时这些东西一起就被移除了。如果用pbs冲洗三遍后，在孔内肉眼几乎看不到任何的东西，非常洁净的感觉，这正常吗？对96孔平底板有要求吗！
在结晶紫染色后，每孔是加100μL的1%的结晶紫吗？如何除去多余的结晶紫？
这是我的实验步骤
2用无菌的PBS 200μL冲洗3次；每孔加入100μL99%的甲醇固定15min，室温下风干。
3每孔加入100μL的1%结晶紫溶液，室温作用5min，随后用流水把多余的染料冲洗干净。
4完全干燥后，贴壁每孔加入100μL的33%冰乙酸（溶解结晶紫？），在37℃培养箱中作用30min。乙酸要弃掉吗
5 630nm条件下，酶标仪测定OD值。试验数值取平均值，同时设培养基和空白对照。
请问一下，你测出来的OD值大概有多少？是用96孔板做的吗？我做出来的OD值只有0.2左右，跟文献上的差很多，不知道什么原因，可以讨论一下吗？QQ：
我的也是0.2左右
好多，文献都这么做的
你测的OD值理想吗
我用试管法筛选的形成能很强的菌株，od值也不高
你用什么溶解结晶紫的
测OD的波长是多少
发几篇来看看~~:D
OD值不高，首先得看你提供的是什么样的数值，可否类比，比如是常规分光光度计还是酶标仪，比如是多大的比色皿。
其实0.2还可以了，你要是还是觉得不行，换一下培养基，培养基对biofilm影响也很大。
我用DMSO，溶解2hr，OD570.
发到哪里给我个邮箱
你是不是在广州？
你看一下这是不是生物膜呢
Hps biofilm .jpg
你怎么知道？:o
因为我也在
长这样的？:o
把你实验过程和参考文献发给我看看~~
这是，而且左边两个管子的膜算还不错的，右边四个算轻的，如果是同一个菌，那右边四个的现象就可以描述为“生物膜形成能力明显减弱”了。
说真的，你不妨随便搜一个和这个有关的硕士博士论文看看，人家都有详细的步骤和图片，岂不是一下就能看明白了？
求教:D关于染生物膜的问题。qq：
您好 我想问一下 您再取下附着的生物膜时是怎么做的呢？怎么确定粘附的生物膜都取下来了呢？
我不知道我做的是不是的呀，有人说是，但还没有做共聚焦
因为前一段时间一直在忙毕业，很久没有登录小木虫了，不好意思哈！对板没有什么特殊要求，但是结果不是非常理想。
你好，可以加你qq吗？有关生物膜的问题想问你一下
您好，想加您qq了解一些关于生物膜，qq：
您好 可以加您qq么？？我的是 想了解下生物膜 你应该是华农的吧？？
您好 我也是做细菌这方面的方便加下您qq吗 想想您多多请教 我的
您好，有关生物被膜的问题想要咨询，方便吗
首先关于96孔板的选择，有什么要求没；其次，洗脱浮游细菌的时候使用无菌PBS吗，洗三遍确定浮游细菌清洗干净了吗，怎么保证既能洗干净浮游菌又最小限度破坏被膜，然后是染色液的配置及浓度哪种效果最好，谢谢哈
楼主已顺利毕业:D
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