大肠杆菌基因组提取对于基因的吸收

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2014-11-24 02:44 标签： 大肠杆菌耐药基因
大肠杆菌基因中密码对使用的规律大肠杆菌
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大肠杆菌基因中密码对使用的规律
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请教关于red系统对大肠杆菌基因敲除的问题！
大家好，有个问题请教大家一下，我最近一直用red系统做大肠杆菌的基因敲除，用的菌株是Bl21 DE3，结果总是在最后一步失败，就是转化pcp20之后，无法将插入基因组的Kana抗性基因消除，不知这是什么原因啊，我转化后用的是20ug/ml的amp板子，（100ug/ml不长斑，就放低浓度了）斑倒是不少（包括很多卫星斑），但就是挑了之后消除不了kana，也尝试挑单克隆，在无抗生素的板子上高温（37,42）培养，但之后amp抗性消失了，kana抗性还在，愁死人了啊，跪请各位前辈给支支招啊！
楼主把BL21敲掉了？怎么弄的啊，同源臂有多长啊？ : Originally posted by bolysu at
楼主把BL21敲掉了？怎么弄的啊，同源臂有多长啊？ 敲是敲掉了啊，pcr检测和抗性检测都没有问题了，同源臂就是按照pnas那个文章的protocol上的说明，50个bp，问题是现在后面的抗性消除做不成功，崩溃了！ : Originally posted by dxd2002sk at
敲是敲掉了啊，pcr检测和抗性检测都没有问题了，同源臂就是按照pnas那个文章的protocol上的说明，50个bp，问题是现在后面的抗性消除做不成功，崩溃了！... 你第一步转化的质粒是什么抗性的哦？ : Originally posted by bolysu at
你第一步转化的质粒是什么抗性的哦？... 第一步amp啊，第二部kana，第三部继续amp。 楼主，你好！请问你所说的“pnas那个文章的protocol”是哪篇呀？谢谢啦O(∩_∩)O~ : Originally posted by zy_696969 at
楼主，你好！请问你所说的“pnas那个文章的protocol”是哪篇呀？谢谢啦O(∩_∩)O~ 嗯，那个文章的名字：One-step inactivation of chromosomal genes in
Escherichia coli K-12 using PCR products.
对应的protocol可以再维基里找到。:work: : Originally posted by dxd2002sk at
嗯，那个文章的名字：One-step inactivation of chromosomal genes in
Escherichia coli K-12 using PCR products.
对应的protocol可以再维基里找到。:work:... 好的，O(∩_∩)O谢谢 将pCP20转入重组菌种，涂板至氯霉素的平板上，30度培养；待菌长起后挑至氯霉素+的培养基中，30度培养；待菌长起后将菌转接至无抗培养基；待菌长起后将温度调至42度，培养至少12h，即可得到去掉kn抗性的菌株。 楼主，求指导！敲大肠杆菌基因的具体实验步骤，我按照那篇文章上的实验步骤做了，可是没有转化子长出来，就想知道具体哪里错了！！！4个月一个基因也没敲下来，紧急求救！片段也酶切了，纯化后用去离子水洗了的！感受态制备也不知道哪里出了问题，求楼主帮助！回答下列关于基因工程的问题。草甘膦是一种广谱除草剂，其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，最终导致植物死亡。但是，它的使用有时也会影响到植物的正常生长。目前，已发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突..域名：学优高考网，每年帮助百万名学子考取名校！问题人评价，难度：0%回答下列关于基因工程的问题。草甘膦是一种广谱除草剂，其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，最终导致植物死亡。但是，它的使用有时也会影响到植物的正常生长。目前，已发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因，若将该基因转入植物细胞内，从而获得的转基因植物就能耐受高浓度的草甘膦。下图A-F表示6株植物，其中，植物A和D对草甘膦敏感，B和E对草甘膦天然具有抗性，C和F则经过了转基因处理，但是是否成功还未知。图1和2分别表示两段DNA序列。表格中1-4分别表示4种限制性核酸内切酶的酶切位点。据图回答下列问题：  62．若A-C浇清水，D-F浇的水中含有草甘膦，上述植物中，肯定能健康成长的是_________。63．若要从大肠杆菌中筛选出含EPSPS基因的突变菌株甲，在大肠杆菌培养基中还必须加入___________。 64．假设位于EPSPS基因两侧的DNA序列均如图I所示，则应选择表中酶__________进行酶切；若位于EPSPS基因两侧的DNA序列分别如图I和II所示，则应选择表中酶__________ 进行酶切。65．假设大肠杆菌突变菌株甲中EPSPS基因的右侧序列如图II所示，请在方框内画出经酶 切后产生的两个末端的碱基序列。（2分） 66．假设EPSPS基因已被成功转移到植物F中，但植物F仍没有表现出抗性，分析可能的原因________________________________________________________________________。 下图甲是某目的基因（4.0kb，1kb=1000对碱基）与大肠杆菌pUC18质粒（2.7kb）重组的示意图。图中Ap′是抗氨苄青霉素基因，lacZ是显色基因，其上的EcoRI识别位点位于目的基因插入位点的右侧，其控制合成的物质能使菌落呈现蓝色。（图乙中深色圆点即为蓝色菌落）67．图乙的培养基中含有氨苄青霉素，请判断图乙中所出现的白色和蓝色两种菌落中，何种会含有重组质粒。___________。68．现用EcoRI酶切质粒，酶切后进行电泳观察，若出现长度为_________kb和 kb的片段，则可以判断该质粒已与目的基因重组成功。（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRI的识别位点之间的碱基对忽略不计）马上分享给朋友：答案62.ABCE 63.草甘膦 64.2 2和365. （画出完整给2分，要求画出化学键、碱基序列完整且正确）66.目的基因在受体细胞中没有表达，或表达的酶没有活性。 67.白色68.3.0和3.7或1.0和5.7 点击查看答案解释本题暂无同学作出解析，期待您来作答点击查看解释相关试题中学教师招聘笔试历年真题题库
本试题来自：（2011年中学教师招聘笔试历年真题，）下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题： 限制酶 BamHⅠ HindⅢ EcoRⅠ SmaⅠ 识别序列及切割位点 G↓ GATC C C CTAG↑ G
A↓ AGCT T
T TCGA↑ A
G↓ AATT C C TTAA↑ G
第Ⅱ卷 非选择题为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在______的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。正确答案：蔗糖为唯一含碳营养物质答案解析：有，
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