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关于蛋白质的跑胶
1.什么是变性胶，什么是非变性胶，我跑的是SDS-PAGE，跑完后蛋白是否具有活性
2.什么是连续胶，什么是不连续胶
3.做目的蛋白的抗体前需要先知道蛋白的那些性质？
看不懂的说…… 1、SDS-page是变性胶，蛋白跑之前就变性了。不加SDS是非变性胶，可保留蛋白活性。
2、非连续电泳包括浓缩胶和分离胶，离子浓度和pH不一样，连续胶只有分离胶
3、抗体这一部分不是很熟悉 你跑SDS-PAGE之前会有一个步骤
就是在100℃下煮沸10分钟
主要就是让蛋白失活
所以SDS后蛋白没有活性了 SDS是强离子去垢剂，破坏蛋白质的高级结构，并与担保结合使其带负电荷。SDS-PAGE的样品已经完全失去生物活性，不管蛋白质的天然等电点如何，都是从负极向正极跑的。做目的抗体的抗原来源可以做全蛋白表达、部分蛋白表达或者是合成肽段。如果做全蛋白表达的话，直接把目的蛋白的序列克隆到大肠杆菌里过表达后纯化。如果做部分蛋白表达或者合成肽段，需要分析蛋白的表面抗原性。 :hand::hand::hand:姐姐是生物类的哦，:like: 做抗体前，要知道你的抗原的分布 3.做目的蛋白的抗体前需要先知道蛋白的那些性质？
那要看你的具体目的，如果直接就是需要做个该蛋白质的单克隆抗体，就直接知道分子量和序列就行，关键是免疫实验动物后的免疫原性。如果你要想确定该蛋白质的具体抗原免疫簇，那就要利用NMR，X-ray diffraction测定抗原-抗体的结合位点的结构，或者用基因敲处目的蛋白质的相关氨基酸来影响其免疫原性，或者对目的蛋白质的有关的氨基酸进行化学修饰来影响其免疫原性，还可以直接用电子显微镜或者原子力显微镜直接观测抗原-抗体的相互作用来确定抗原的抗原免疫簇。要在研究该蛋白质的其他与免疫有关的特征，好需要其他具体信息。。。 : Originally posted by 祯嗳溢誓 at
:hand::hand::hand:姐姐是生物类的哦，:like: 马上把家族给我换过来 : Originally posted by 永远不知道 at
马上把家族给我换过来... 生物学与心理学关联还是挺紧密的，尤其是神经生物学与生理心理学及认知心理学关系非常紧密。 : Originally posted by 凌波丽 at
生物学与心理学关联还是挺紧密的，尤其是神经生物学与生理心理学及认知心理学关系非常紧密。... :hand:加入我的家族吧，邀请 : Originally posted by 永远不知道 at
:hand:加入我的家族吧，邀请... 如何加入你的“家族”？你的网上家族的特点是什么？ : Originally posted by 凌波丽 at
如何加入你的“家族”？你的网上家族的特点是什么？... :hand:面板上面有家族的板块&&找到我的家族&&金花一族& &特点就是专门为MM建立的亲，赶快加入吧，好玩的很 申请递交了。。。不过。。。我可能来这里会很少。。。现在世界里我很忙。。。:D 这里是指“小木虫论坛”。 : Originally posted by 小科研女dow at
你跑SDS-PAGE之前会有一个步骤
就是在100℃下煮沸10分钟
主要就是让蛋白失活
所以SDS后蛋白没有活性了 煮十分钟会不会把蛋白质煮成氨基酸啊？ : Originally posted by 海盗路飞123 at
煮十分钟会不会把蛋白质煮成氨基酸啊？... :o:o:o煮沸只是让它变性失活，怎奈可能变成氨基酸啊，得有水解酶才能好吧 友情帮顶:D:hand:双向电泳第二步SDS-PAGE跑胶的问题主要有2个问题：第一：跑出来的胶有很多的横着竖着的条带,不知道是蛋白没有分开还是怎么的.看Bio-Rad上面写的问题分析说可能是蛋白被污染了,所以加了DNA_百度作业帮
双向电泳第二步SDS-PAGE跑胶的问题主要有2个问题：第一：跑出来的胶有很多的横着竖着的条带,不知道是蛋白没有分开还是怎么的.看Bio-Rad上面写的问题分析说可能是蛋白被污染了,所以加了DNA
双向电泳第二步SDS-PAGE跑胶的问题主要有2个问题：第一：跑出来的胶有很多的横着竖着的条带,不知道是蛋白没有分开还是怎么的.看Bio-Rad上面写的问题分析说可能是蛋白被污染了,所以加了DNAse I和RNase A在最开始的蛋白里面,不过效果还是不好,依然有很多条带.第二：把第一条strip放在成品胶（SDS-PAGE的那个胶）顶部,用琼脂（agarose）凝固了2个小时,然后再跑SDS-PAGE.跑前这块成品胶都好好的,但是跑完胶（2个小时）以后,成品胶就连同上面的strip一起被挤出了原来的槽子.有朋友说可能是跑胶的时候温度太高,让胶胀大了.我就把胶放在4度的冷冻室里面跑,但是成品胶还是被挤出来了,这样会影响从strip里面转到成品胶的蛋白量.
1,提取蛋白的时候要充分超声粉碎,然后高速离心.吸取上清的时候不要触到沉淀.污染不一定是RNA和DNA,还有可能是胶里面有杂质.2.遇热膨胀过度,你可以在电泳槽里面安放冰槽,电泳液预先降温,同时降低电泳时的电流.还有配琼脂也要用缓冲液,而不是水,不然不导电.接触不好也会引起条带变形
我要的蛋白分子量大概是40K-130K的，那应该用多少g离心比较好呢？
我是在120V下面跑了2个小时，4度的环境，没有单独设置电流，那应该用多大的电流比较好？琼脂是买的Bio-Rad的商品琼脂，好像也没办法单独加缓冲液。刚刚你这么一说，我突然想到我的琼脂是热到73度左右就直接加在胶上面了，是不是这个温度不合适？那应该用什么温度啊？
一般离心12000 x g，10分钟
120v 2小时，肯定要升温的。可以多试几个，降低电压，延长时间。
琼脂买回来是粉吧，配置的时候要加缓冲液，而不是水来加热融化。如果买的是冻结的琼脂，要保证充分加热溶解，知道没有肉眼可见的颗粒才行。加热的温度不用担心，反正要等冷了才跑的蛋白电泳中，等到溴酚蓝完全跑出胶的时候再停止是不是会影响到条带？蛋白会不会也跑出胶最下面而跑掉了？_百度知道
蛋白电泳中，等到溴酚蓝完全跑出胶的时候再停止是不是会影响到条带？蛋白会不会也跑出胶最下面而跑掉了？
提问者采纳
小分子蛋白是会跑掉的。 这要看你的目的大小是多大了。 一般来说在10%的胶里，溴酚蓝的位置大约相当于10kd的蛋白。你根据这个就可以大致估计你的蛋白在哪里了
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一般不会 因为一般蛋白的分子量要比溴酚蓝大很多 如果不是在溴酚蓝跑出胶很久以后才停止的话，一般蛋白不会跑出胶的。
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配蛋白胶遇到的问题，求解
各位虫友，大家好，最近跑page胶发现刚跑一会儿，样品就从某些泳道漏出到上层胶和下层胶的界面，换了所有的buffer还是不行，我的配胶方法是：
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室温凝半小时后加浓缩胶，再凝半小时，120V跑胶，有时放四度一周内使用，均出现类似情况，
大家给看看问题出在哪里，谢谢。
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可能不是缓冲液的问题。考虑玻璃板不干净。新玻璃板是需要处理的。还有就是你压下层胶是用异丙醇吗？需要去干净 : Originally posted by DAX1 at
可能不是缓冲液的问题。考虑玻璃板不干净。新玻璃板是需要处理的。还有就是你压下层胶是用异丙醇吗？需要去干净 谢谢您的回复，玻璃板是刚买的，我用水和70%酒精都压过，没啥差别，去掉酒精之后用水洗过之后再用滤纸吸干。请问新玻璃板怎么处理啊？ : Originally posted by DAX1 at
可能不是缓冲液的问题。考虑玻璃板不干净。新玻璃板是需要处理的。还有就是你压下层胶是用异丙醇吗？需要去干净 玻璃板洗了两次，应该没问题。 : Originally posted by ICYFOX_FC at
玻璃板洗了两次，应该没问题。... 我没处理过，实验室有人专门做。好像要用氢氧化钠处理。具体不记得，你到biorad上找找 : Originally posted by DAX1 at
我没处理过，实验室有人专门做。好像要用氢氧化钠处理。具体不记得，你到biorad上找找... 好的，谢谢:hand: 我平时都不洗，都没问题，我猜测是不是分离胶和压缩胶中间有气泡，所以跑胶的时候会跑出去，再有就是你的夹板没夹紧啊。我猜测是你上层的胶和玻璃的紧度不够，因为什么，我也不是很清楚。你下层胶和玻璃粘合没有问题，那就是上层胶。是不是试剂TRIC-HCL的问题，我之前遇见过一次，TRIC永久了，就不好用了。 : Originally posted by makubex83 at
我平时都不洗，都没问题，我猜测是不是分离胶和压缩胶中间有气泡，所以跑胶的时候会跑出去，再有就是你的夹板没夹紧啊。我猜测是你上层的胶和玻璃的紧度不够，因为什么，我也不是很清楚。你下层胶和玻璃粘合没有问题 ... 感谢您的回复，Tris-Hcl都是新配的，PH也是校过的的，胶板应该夹紧了，不然会漏胶的，玻璃板确实是新买的，你知道新买的胶板怎么处理吗？ 可能是梳子和玻璃板不配套所致，导致胶和玻璃板之间有间隙。换梳子或者玻璃板试试 : Originally posted by
可能是梳子和玻璃板不配套所致，导致胶和玻璃板之间有间隙。换梳子或者玻璃板试试 实验室用的都是伯乐的胶板和梳子，您还有其他建议吗？ : Originally posted by ICYFOX_FC at
感谢您的回复，Tris-Hcl都是新配的，PH也是校过的的，胶板应该夹紧了，不然会漏胶的，玻璃板确实是新买的，你知道新买的胶板怎么处理吗？
... 你哟是都是新配的试剂，那我只能猜测你的上层胶可能是因为什么原因和玻璃板不贴合了，至于什么原因，我也不知很清楚，上层胶和下层胶不同的试剂只是tric-hcl我觉得是不是它的问题。或者是你用乙醇压上层胶的时候因为某种原因导致的粘合不够，要不你用水试试？但是我确实是用70%的乙醇压胶 : Originally posted by makubex83 at
你哟是都是新配的试剂，那我只能猜测你的上层胶可能是因为什么原因和玻璃板不贴合了，至于什么原因，我也不知很清楚，上层胶和下层胶不同的试剂只是tric-hcl我觉得是不是它的问题。或者是你用乙醇压上层胶的时候因 ... 也用水压过，还是漏，今天把APS和SDS都重新配的，跑完之后看看。 开始电泳时候&&应该是80V&&胶跑到分离胶部分才能换电压 120V&&等等 这些步骤 你确信对吗？ : Originally posted by ljj0720 at
开始电泳时候&&应该是80V&&胶跑到分离胶部分才能换电压 120V&&等等 这些步骤 你确信对吗？ 不一定，这个条件跑胶效果会好一点，但是时间很长，我们一般150V跑到底，着急的时候200V跑完，但是与漏样没有关系吧 今天把APS和SDS也换了，胶板洗了两遍，效果好了一点，问题貌似还没有完全解决。
可能是你的胶放置时间过长，胶太干了，胶与玻璃板没有紧紧的粘在一起，分离开了。建议，配置好的胶用塑料袋子装好，不要让它干了…… 玻璃板和梳子哪那些都有规格会不会是你用的不配套？比如1.0mm的胶插了1.5mm的梳子&&或者类似的原因？？？？ : Originally posted by 云中风华 at
玻璃板和梳子哪那些都有规格会不会是你用的不配套？比如1.0mm的胶插了1.5mm的梳子&&或者类似的原因？？？？ 这个不会搞错，因为不是个例，整个实验室都漏，我们一般也不用1.0的胶 : Originally posted by
可能是你的胶放置时间过长，胶太干了，胶与玻璃板没有紧紧的粘在一起，分离开了。建议，配置好的胶用塑料袋子装好，不要让它干了…… 谢谢您的建议，胶配完都是用纸巾浸水包起来套在封口袋里放四度的，不会出现胶干了的情况。 第一张图，直观的看貌似就是分离胶和浓缩胶的界面接合的不好，如果能排除玻璃板加紧，缓冲等等等等问题的话，建议楼主注意一个问题，就是实验的顺序。你试试看先不要洗去压分离胶的乙醇也好水也罢异丙醇也好，就是先别洗去擦干，先配浓缩胶，加到只剩AP、TEMED的时候，再洗去压胶的液体（不管是什么都要擦干，我是用滤纸剪成的小条擦的，效果还行）往配了一半的浓缩胶里加AP、TEMED，倒胶插梳子。意思就是注意一个小细节，先把压胶的液体洗掉再开始配浓缩胶，分离胶的上表面暴露在空气里的时间比较长，配胶稍微慢一点的话它就有点干，造成分离胶的上表面干燥浓缩胶和它结合的部分就有缝，也会有这种上样漏到缝子里的现象。细节处的小建议，不知道能不能帮上忙。后面的图是想说明有拖带的问题么？没看明白。愿同行实验顺利~蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳实验时跑胶为什么要在低温下进行_百度作业帮
蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳实验时跑胶为什么要在低温下进行
蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳实验时跑胶为什么要在低温下进行
① 聚丙烯酰胺凝胶电泳可分为变性及非变性蛋白电泳,一般用的较多的是变性电泳.蛋白在SDS及沸煮情况下已经是变性了.② 电泳过程中由于电流关系,会产热.做非变性电泳时,一般要求冰浴反正蛋白热变性.变性电泳时也需要维持正常温度防止蛋白的扩散导致条带弥散.百度教育团队【海纳百川团】为您解答.
以防蛋白质变化
加热、紫外线照射、剧烈振荡等物理方法使蛋白质变性，主要是破坏蛋白质分子中的氢键，在变化过程中也没有化学键的断裂和生成，没有新物质生成，因此是物理变化。否则，鸡蛋煮熟后就不是蛋白质了
高温会变性
凝胶电泳时会产生热量，因而加速蛋白条带的扩散，而降低不同条带之间的分辨率。因此在低温下跑胶有利于克服这一种不利因素。