急请各位老师帮我分析一下我的RNA提取相关问题(匀浆,上清液,玻璃,冰浴)
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[急请各位老师帮我分析一下我的RNA提取相关问题(匀浆,上清液,玻璃,冰浴)] 相关疾病：前列腺增生我从前列腺癌(Prostate Cancer)及良性前列腺增生的手术标本中提取RNA，具体步骤如下：一、标本的采集及存放：手术室取术后标本，立即置液氮中保存。（所用的冻存管经DEPC浸泡，及高压蒸气灭菌30min）二、实验所用器械：均用DEPC浸泡，高压灭菌30min ，玻璃用具200°C 2h三、提取步骤：1、取冻存标本约100mg，置于玻璃匀浆器中（手动匀浆），加入Triz 关键词:[匀浆 玻璃 上清液 冰浴 高压蒸气灭菌 液氮 电动匀浆机]…
我从前列腺癌(Prostate Cancer)及良性前列腺增生的手术标本中提取RNA，具体步骤如下：一、标本的采集及存放：手术室取术后标本，立即置液氮中保存。（所用的冻存管经DEPC浸泡，及高压蒸气灭菌30min）二、实验所用器械：均用DEPC浸泡，高压灭菌30min ，玻璃用具200°C 2h三、提取步骤：1、取冻存标本约100mg，置于玻璃匀浆器中（手动匀浆），加入Trizol 1ml，匀浆（由于电动坏了，只能用小玻璃匀浆管手动操作，组织不容易匀碎，所用时间约15min，），把裂解液转入EP管中。2、然后再加入1mlTrizol至匀浆管中，冲洗挂壁组织（较碎的组织都挂到管壁上了），把冲洗液转入EP管中。3、上下颠倒混匀，冰浴静置5min。4、加入0.4ml氯仿（4℃预冷），盖紧盖子，用力震荡混匀，待充分乳化，溶液呈乳白状，冰浴静置10min。5、离心（12000g，4℃，15min）。6、小心将上清液（约400ml）移至新EP管中，加入等体积异丙醇（4℃预冷），上下颠倒混匀，室温静置10min。7、离心（12000g，4℃，10min）。8、小心弃上清液，缓慢地沿壁加入1ml 75%乙醇（4℃预冷），轻轻上下颠倒混匀。离心（12000g，4℃，5min）9、弃上清液，用枪头尽量吸尽残存的乙醇，打开EP管盖子，室温干燥5-10min10、加入适量60ulDEPC水溶解沉淀, 待完全溶解后，-70℃保存。四、电泳步骤：用1％琼酯糖凝胶电泳检测总RNA质量：取总RNA5ul＋RNA loading buffer1ul,加样，120v电压，跑10－15分钟。（所用的缓冲液是自己配置的TAE）问题：多次跑出来得电泳结果，均是条带不清楚，下面是我昨天跑的电泳图，恳请各位给予分析＆帮助！
回复你可以考虑组织在中液氮下研磨，之后转入加有trizol的ep管，如果样本太少的话，直接用trizol裂解，然后加入氯仿抽提，也可以。我做过组织直接用trizol裂解的实验，没问题。回复请问楼上，组织100mg左右，用小剪刀剪碎，放置在有1ml Trizol的 ep管中，可以自然裂解充分吗？请各位朋友帮我分析一下，我的实验步骤以及电泳的问题所在？急，谢谢！
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RNA的提取方法
母RNA的提取方法除了稀碱法还有其它什么方法？！最好提供实验方法等！
RNA！！！！！还有希望提供实验较具体的步骤！！，不然偶怎么做实验啊！拜托大家看下题目啦！
提问者采纳
二.5g，以加深对核酸性质的认识。6．含量测定
将干燥后RNA产品配制成浓度为 10—50pg／ml的溶液.0％，有利于RNA的提取，按下式计算RNA含量：
式中，使RNA释放出来。
三；pHO。将沉淀物放在 10ml小烧杯内，装入大离心管内，这种方法提取时间短.5，得到 RNA沉淀，所以选用酵母为实验材料.024为lml溶液含lμgRNA的吸光度、仪器、原理
酵母含 RNA 2，此法易掌握，放在6cm表面皿上，存放于干燥器内.67％～10实验三
酵母RNA的提制（浓盐法）
一.5～5，颗粒变大。
提取RNA的方法很多，使沉淀充分，再用 95％乙醇5～10ml淋洗 3次，然后将菌体除去。 4．洗涤和抽滤
上述悬浮液以 4000r／min离心 10min，在工业生产上常用的是稀碱法和浓盐法.0～2，避免在20～27℃之间停留时间过长.03％～0，将pH调至2。
四，而且菌体容易收集，搅拌均匀.0～2，并置入放有冰块的250ml烧杯中冷却．待冷至10℃以下时。2．分离将上述提取液用自来水冷却后，在751型分光光度计上测定其260nm处的吸光度，产品颜色较好，使RNA释放出来.516％），并使它和蛋白质分离，但RNA在此条件下不稳定.0的精密试纸；0，容易分解，以4000r／min离心10min，破坏两类磷酸酯酶，水25ml；后者在加热的条件下，使RNA沉淀。将干燥后的RNA制品称重、试剂和材料1．仪器
（1）量筒（50ml）（2）三角瓶（100ml）
（3）烧杯（250ml；L为比色杯光径（cm），置于沸水浴中提取lh，使提取液与菌体残渣等分离.5g，50ml，RNA也易于分离、结果处理
根据含量测定的结果按下式计算提取率
六。**我们实验室一个师兄才做过，进行离心收集。调好后继续于冰水中静置10min，然后在布氏漏斗上用射水泵抽气过滤。前者利用稀碱溶解细胞壁，铺成薄层，加 NaCl 2，会使RNA降解而降低提取率。3．沉淀RNA 将离心得到的上清液倾于50ml烧杯内，用6mol／L
HCI 小心地调节pH值至2，用95％的乙醇 5～10ml充分搅拌洗涤，因为这是磷酸二酯酶和磷酸单酯酶作用活跃的温度范围.5（注意严格控制pH）。5．干燥从布氏漏斗上取下沉淀物，利用高浓度的盐改变细胞膜的透性。
RNA提制过程是先使RNA从细胞中释放，10ml）
（4）布氏漏斗（40mm）
（5）吸滤瓶（125ml）
（6）表面皿（6cm）
（7）751型分光光度计
（8）离心机（4000r／min）
（9）恒温水浴
（10）药物天平
（11）烘箱2．试剂
（l）NaCl（化学纯）
（2）6mol／L HCI
（3）95％乙醇（化学纯）3．材料
鲜酵母或干酵母、注意事项1．用浓盐法提取RNA时应注意掌握温度。2．加热至90～100℃使蛋白质变性，A260为260nm处的吸光度，DNA很少（0、操作步骤1．提取称取鲜酵母 159或干酵母粉 2，置于80℃烘箱内干燥，倒入 100ml三角瓶中。
学习和掌握从酵母中提制RNA的原理和方法。再根据核酸在等电点时溶解度最小的性质
提问者评价
虽然已经找到了，不过还要谢谢你~~话说偶找到的也是这个方法。。。。。。
摘　　要:以肝脏组织和NDV感染的鸡胚尿囊液为例，简单介绍了几种提取细胞或组织液中总RNA及mRNA的方法－SOD－蛋白酶K法、异硫氰酸胍法、loigo(dT）纤维素亲和层析法。SDS－蛋白酶K法提取RNA经济可靠，但纯度稍低；异硫氰酸胍法适于提取细胞中的总RNA，纯度较高；利用ligo(dT)能与mRNA poly（A^+)尾结合的特性提取组织细胞中的mRNA.
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苯酚法提取酵母RNA
（一）原理
细胞内大部分RNA 均与蛋白质结合在一起，以核蛋白的形式存在。因此，提取RNA时要把RNA与蛋白质分离并除去。将细胞置于含有十二烷基磺酸钠（Sodium dodecyl sulfate,SDS）的缓冲液中，加等体积水饱和酚，通过剧裂振荡，然后离心形成上层水相和下层酚相。核酸溶于水相，被苯酚变性的蛋白质或者溶于酚相，或者在两相界面处形成凝胶层。
本实验采用的0.15mol/L 缓冲液系统可使大部分RNA-蛋白复合物解离，而DNA-蛋白复合物只有极少部分解离；用酚处理时DNA-蛋白复合物变性，在低温条件下从水相中除去，这样得到的RNA 制品中混杂的DNA 极少。用氯仿-异戊醇继续处理RNA 制品，可进一步除去其中少量的蛋白质。最后用乙醇使RNA 从水溶液中沉淀出来。本法得到的RNA 不仅纯度高，而且多呈...
我本科毕业论文做过酵母RNA的提取，用液氮研磨破壁，用TRI REAGENT对酵母中的总RNA进行提取，这些东西随便找本分子克隆技术的书里面就有，或者上丁香园也可以找到。以下是我的实验步骤，供参考。
TRI REAGENT法提取RNA
1.取菌液20mL，分装于10mL离心管中，平衡后，3500rpm离心5min；
2.倒去上清，PBS洗涤1次，3500rpm离心5min；
3.倒去上清，PBS洗涤1次，4℃，12000rpm离心1min；
4.重复步骤3洗涤1次；
5.倒去上清，将沉淀移如研磨缸中，加入液氮研磨4次；
6.将粉末移入两只新离心管中，分别加入1mL TRI REAGENT试剂，静置5min；
7.加入200mL 氯仿，摇动15s，静置10min；
8.4℃ 12000rpm离心15min，取上清至新离心管中；
9.加入500μL异丙醇，静置8min；
10.4℃ 12000rpm离心15min，吸出上清，加入7...
分子克隆技术（华农）
实验一 质粒的制备
质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或表达的主要载体，它在基因操作中具有重要作用。质粒的分离与提取是最常用、最基本的实验技术。
质粒的提取方法很多，大多包括3个主要步骤：细菌的培养、细菌的收集和裂解、质粒DNA的分离和纯化。本实验以碱裂解法为例，介绍质粒的抽提过程。
实验目的：掌握碱裂解法抽提质粒的原理、步骤及各试剂的作用。
实验材料：含有质粒pUC18载体的大肠杆菌菌液，克隆有水稻外源片段的BAC的大肠杆菌菌液。
实验原理：在pH 12.0 ~ 12.6碱性环境中，细菌的线性大分子量染色体DNA变性分开，而共价闭环的质粒DNA虽然变性但仍处于拓扑缠绕状态。将pH调至中性并有高盐存在及低温的条件下，大部分染色体DNA、大分子量的RN...
ls的乱贴什么杂七杂八的东西。也不整理整理
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出门在外也不愁想不通找不到原因，到底怎么回事，心烦，rna提取问题(上清,上清液,抽提,异戊醇)
08:53:37&&&来源：&&&评论：&&
[想不通找不到原因，到底怎么回事，心烦，rna提取问题(上清,上清液,抽提,异戊醇)] 做实验做的好心烦啊，一直在做荧光定量，一直遇到问题，前段时间认为提RNA还算不难，提的效果也不错，不过近来怎么都提不好各种问题，脑子都快气炸了！一套方法一批试剂，前几天提了质量差，觉得是试剂的问题，全部重新配的，今天再做结果是有的好260/280能达到1.9，但是有的很差乱七八糟的，260/280只有1.2左右，260/230比值都有5甚至6的，质量好的是一批材料，不好的是其他批次，怀疑是材料的问 关键词:[上清 上清液 抽提 异戊醇 果实 提取液 试剂]…
做实验做的好心烦啊，一直在做荧光定量，一直遇到问题，前段时间认为提RNA还算不难，提的效果也不错，不过近来怎么都提不好各种问题，脑子都快气炸了！一套方法一批，前几天提了质量差，觉得是的问题，全部重新配的，今天再做结果是有的好260/280能达到1.9，但是有的很差乱七八糟的，260/280只有1.2左右，260/230比值都有5甚至6的，质量好的是一批材料，不好的是其他批次，怀疑是材料的问题，不过也不应该啊之前这些质量不好的材料还是一样提的出来的质量也不错。 把方法附上吧希望朋友们一起帮我找找原因：CTAB-LiCl沉淀法稍做改良1）吸取4mLRNA提取液（2% CTAB(W/v)，2% PP(W/v)，25 mM EDTA，100 mM Tris-Cl pH 8.0，2.0 M NaCl）置于65℃水浴中预热。2）称取2g样品迅速放入盛有液氮的研钵中研磨成粉末，并转移至含有提取液的中，涡旋混匀器上振荡混匀，使粉末与液体充分接触。3）加入320?L的β-巯基乙醇及少量亚精胺，混匀，65℃保温5min。冷却至室温加入等体积的氯仿/异戊醇（24：1 V/V），混匀，于4℃下12000rpm离心20min。吸取上清并重复抽提一次。4）取上清加入1/4体积10mol/L LiCl于4℃下放置8-16h。5） 4℃下12000rmp离心30min后加入500?L 无水乙醇洗涤沉淀，4℃12000rmp离心10min，除去上清液。6）加入500?LSSTE溶解（SSTE buffer：1.0 M NaCl，0.5%SDS，10 mMTris-Cl pH 8.0，1 mM ）沉淀，并加入同体积的氯仿/异戊醇（24：1 V/V）抽提，4℃12000rmp离心20min，吸取上清液。7）上清液中加入两倍体积的无水乙醇沉淀RNA（-70℃≥30 min）。8）4℃下12000rmp离心20min，弃上清并用70％乙醇洗2～3次后干燥。9）用50?L DEPC处理水溶液沉淀，密封保存于-70℃备用。以上是提取方法，我的材料是果树果实不同发育时期的，以上所有操作均是我一人操作应该排除操作问题，提取质量好坏的样品分歧就出在第5步，质量好的批次此处去完上清后是白色的沉淀，而不好的都带有绿色，紧接着结果导致的是在第8步rna提取出来时，质量好的都是透明的，而有问题的都是略微带些红色或者黄色的，也不透明，我不明白这个红色是什么物质，我用的果实也是绿色的，还有第5及最后出现问题了，我要怎么去处理呢？？？！方法也是用别人的，所以现在出来问题怎么解决自己也理不出头绪，想不到对策，求帮助啊！！！
回复了4建议楼主用Qiagen试剂盒提取
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