瞬转没有opti mem培养液-mem可以用空培代替吗

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[求助]转染时一加转染试剂(Opti-MEM I)或无血清培养基...
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对照组(无脂质体和sirna)反而死的更多,而且很快,刚在台子里操作完细胞就大量飘起或裂解
我在网上查了很多,总结一下,请各位大侠提提意见
1.我细胞传板子后24小时因为没有达到50%-70%的密度,又隔了一天,等于是48小时后再转染,是否有影响?
2.细胞数没有达到有些网友说的90%以上,但是lipo2000的说明书只要30-40%的细胞密度就够了啊,是否有关
3.12孔板操作时间长一些(但也不是很慢),对照组孔在前,是否超镜台的吹风导致吹干,细胞死了?但是为什么后面的孔也有少量死亡啊
4.我加样枪对着孔加培养基的位置细胞死亡多,并由此处细胞死亡迅速蔓延开,但是我意识到这个问题后每次轻轻的加培养基,不是对着用力冲,但还是开始加的地方死的多
5.无血清的培养基应该细胞可以耐受(我的是A549肺腺癌细胞),因为有时做96孔板转染时也是一样操作的,细胞很好没死(但那次是传板24小时内完成转染的)
请问大虾们这到底是什么原因????你们怎么解决的啊
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33号 ( 15:27:30)
你这个情况也太夸张了,lipo2000确实有一定细胞毒性,但是也不至于一加细胞就死啊...
你是转的A549细胞么?
guagua ( 15:27:51)
是A549,而且是对照孔死得多,好像和lipo和sirna没有很大关系啊,是不是无血清培养基的原因啊
泡泡 ( 15:28:13)
个人认为是楼主的细胞有污染。生长速度变慢,转染后大批死亡都可能是因为细胞有污染使的细胞状态不好
qqq111 ( 15:28:34)
今天做了试验纵欲找到原因了:就是***作时把孔的液体吸的很干净,我12孔一个一个吸,时间长了,而且超镜台是垂直风,一下把我前面的孔吹干了,加无血清后马上细胞飘起或死亡
而我试验的没有吸的很干的孔,细胞一点也没事
哎……终于解决了
阿司匹林 ( 15:28:55)
1.我也做过48小时后转染的情况,没见什么影响。
2.我的细胞转染后也死去很多,我考虑为转染的目的基因本来就是一种抑制细胞生长的基因,这个可能影响转染后细胞的成活率。
qqq111 ( 15:29:15)
问一下楼上是做sirna吗
那阴性对照组死的怎么样啊?
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