EdU细胞增殖检测使用说明_荧光成像,流式,动物切片_百度文库
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EdU细胞增殖检测使用说明_荧光成像,流式,动物切片
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&&锐​博​生​物​,​r​i​b​o​b​i​o​,​E​d​U​细​胞​增​殖​检​测​使​用​说​明​_​荧​光​成​像​,​流​式​,​动​物​切​片
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&&Life Technologies提供了用于细胞功能和健康检测的各种试剂。其中许多分析以荧光或比色法为基础，具有灵敏性、便利性和安全性。这些产品已经过多种仪器平台验证，包括显微镜、流式细胞仪、酶标仪和高内涵筛选，能够实现各种细胞功能的分析：
细胞活性和细胞毒性
细胞增殖和细胞周期
内吞作用和吞噬作用
细胞内离子
本文为大家介绍细胞增殖和周期的产品。
&&细胞增殖以及促进或抑制增殖药物的研究是细胞生物学和药物开发研究中一个极其重要的领域。Life Technologies可提供传统的细胞增殖和细胞周期检测试剂——尤其是 Hoechst核酸染料和在细胞分裂过程中掺入的 5-溴-2′-脱氧尿苷 (BrdU) 探针——以及开发的更先进的工具，包括 Click-iT? EdU 细胞增殖分析试剂盒。
&1.Click-iT EdU 细胞增殖分析试剂盒
&&Click-iT EdU细胞增殖分析试剂盒采用了”click”化学技术，是一种性能出色、可替代传统方法的检测和定量新合成DNA的技术。Click-iT?分析方法采用修饰性核苷酸——EdU (5-乙炔基-2′-脱氧尿苷)，该核苷酸可通过快速click化学反应在 DNA 合成时掺入进去。Click-iT? EdU分析实验方案适用于贴壁细胞和细胞悬液。EdU检测分析只需 90 分钟即可完成，而采用以抗体为基础的BrdU分析方法则需要6-24小时。此外，还可采用Alexa Fluor 染料标记的二抗，实现Click-iT EdU细胞增殖分析在细胞表面和细胞内标记物的多重分析。尽管 Click-iT EdU 试剂和方法的主要应用领域是培养的哺乳动物细胞，但其已成功应用于多种模式生物。
产品特点：
☆ 准确：优于BrdU测定，差异极小(低CV值)，实验操作更简单
☆ 快速：无需将DNA变性，只需90分钟即可获得结果
☆ 简单：简化的实验方案，组分比早期试剂盒更少
☆ 功能多样：适用于流式细胞术、成像、HTS、HCS和动物整体分析
☆ 兼容：可与细胞周期染料、抗体联合使用
产品列表：
Click-iT EdU Alexa Fluor 488 Imaging Kit
50 to 250 coverslips
Click-iT EdU Alexa Fluor 555 Imaging Kit
50 to 250 coverslips
Click-iT EdU Alexa Fluor 594 Imaging Kit
50 to 250 coverslips
Click-iT EdU Alexa Fluor 647 Imaging Kit
50 to 250 coverslips
Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 488 Imaging Kit
50 to 250 coverslips
Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 555 Imaging Kit
50 to 250 coverslips
Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 594 Imaging Kit
50 to 250 coverslips
Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 647 Imaging Kit
50 to 250 coverslips
Click-iT EdU Alexa Fluor 488 HCS Assay
Click-iT EdU Alexa Fluor 488 HCS Assay
Click-iT EdU Alexa Fluor 555 HCS Assay
Click-iT EdU Alexa Fluor 555 HCS Assay
Click-iT EdU Alexa Fluor 594 HCS Assay
Click-iT EdU Alexa Fluor 594 HCS Assay
Click-iT EdU Alexa Fluor 647 HCS Assay
Click-iT EdU Alexa Fluor 647 HCS Assay
Click-iT EdU Microplate Assay
Click-iT EdU Pacific Blue Flow Cytometry Assay Kit
Click-iT EdU Alexa Fluor 488 Flow Cytometry Assay Kit
Click-iT EdU Alexa Fluor 488 Flow Cytometry Assay Kit
Click-iT EdU Alexa Fluor 647 Flow Cytometry Assay Kit
Click-iT EdU Alexa Fluor 647 Flow Cytometry Assay Kit
Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 488 Flow Cytometry Assay Kit
Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 488 Flow Cytometry Assay Kit
Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 647 Flow Cytometry Assay Kit
Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 647 Flow Cytometry Assay Kit
EdU (5-ethynyl-2’-deoxyuridine)
EdU (5-ethynyl-2’-deoxyuridine)
FCM: FCM: flow cytometry HCS: High Content Screening IF: Immunofluorescence M: microplate assay
图1. Jurkat细胞以Click-iT Alexa Fluor 488 azide和FxCycleTM Far Red染料进行双重参数标记。Jurkat细胞依照规定的染色流程以10μM EdU处理1小时再进行检测。(A)细胞以Alexa Fluor 488 azide染色后可明显区分出嵌入EdU正在增殖的细胞以及未增殖细胞。(B)细胞以FxCycleTM Far Red染料染色，显示出G0/G1期、G2/M期及处于中间的S期细胞的DNA含量分布。(C)DNA含量以及处于增殖细胞的双参数分析，双阳性的细胞为正处于S期的细胞百分比。
&2.用于流式细胞术细胞增殖研究的 CellTrace? 试剂
&&荧光染料的Succinimidyl ester (SE)酯化合物为现今最广泛应用于细胞世代分析的探针。具有荧光性质的SE会通过lysine支链及其他胺基而与胞内及细胞表面的蛋白共价结合。细胞分裂时，SE标记会平均分配至子代细胞，子代细胞因此具有母细胞一半的荧光强度。增殖的细胞群体中，子代细胞都具有母细胞一半的荧光强度，因此可轻易利用流式细胞技术追踪。
&&CFSE能进行均质化细胞标记且具有绝佳的世代间隔分辨能力，因此已广泛用于活体内的细胞增殖分析。相比于其他细胞追踪染料,CFSE可提供更均质化的细胞染色结果，也因此具有更优异的世代分辨能力。
&& CFSE是以fluorescein分子为基础打造，因此诸如GFP表达的细胞或者以FITC标记的抗体无法搭配使用CFSE。Life Technologies提供的CellTrace? Violet Cell Proliferation Kit为紫光激发，可通过染料稀释方法分析细胞增殖，可与GFP表达的细胞或者以FITC标记的抗体兼容。此外CellTrace? Violet与CFSE相比，细胞保留度较佳，世代分辨能力多达10代，同时毒性也最低(图2)。
图2. 人CD8+ T细胞以10 μM CellTrace? Violet染色，进行细胞增殖分析。
　　 您可以利用 CellTrace? 试剂永久性地标记细胞，在体内或体外实现传代或分裂细胞示踪，且不影响细胞的形态或生理。Life Technologies提供的 CellTrace? 试剂可适用于您流式细胞仪上的紫色激光、488 nm 激光和 633/635 nm 激光。
产品特点：
☆性能卓越——明亮的单峰染色可方便地观察多代细胞
☆信号稳定——染色后可在细胞内保留数天
☆无细胞毒性——不影响细胞增殖能力或形态
☆功能多样——有多种颜色可供选择，可与细胞功能抗体或标记物 (如GFP) 轻松结合
CellTrace? Violet Cell Proliferation Kit, for flow cytometry
180 assays
CellTrace? CFSE Cell Proliferation Kit - For Flow Cytometry
10 x 50 μg
CellTrace? Far Red DDAO-SE - Special Packaging
20 x 50 μg
&3.Premo? FUCCI细胞周期传感器
&&Premo? FUCCI细胞周期传感器是一种基于荧光蛋白的系统，它使用了与不同细胞周期调控因子融合的红色(RFP)和绿色(GFP)荧光蛋白：cdt1和geminin。
&&在细胞周期过程中，上述两种蛋白被特定的E3泛素连接酶泛素化，经由蛋白酶体降解。 E3连接酶可对上述两种蛋白的活性进行时序调控，从而在细胞周期过程中实现geminin和cdt1水平的双相周期变化。 在细胞周期的G1期,geminin被降解；因此只有RFP标记的cdt1在细胞核内呈现红色荧光。 在S、G2和M期，cdt1被降解，只有GFP标记的geminin保留，从而使细胞核呈绿色荧光。在G1/S转换过程中，当cdt1水平下降且geminin水平增高时，这两种蛋白均存在于细胞内，当绿色和红色图像覆盖时，细胞核发出黄色荧光。 这种从红色-黄色-到绿色的动态颜色变化代表了细胞周期和分裂的进程(图3)。
&& Premo? FUCCI细胞周期传感器可用于评估药物、siRNA或其他因素对细胞周期的影响。研究表明，geminin-GFP和Cdt1-RFP的荧光信号能够耐受4%甲醛固定和0.1% Triton? X-100透化，因此可以用针对其他细胞靶点的抗体标记细胞。
☆&活细胞细胞周期状态指示剂
☆&灵活：作用于活细胞，亦适用于固定细胞
☆&方便：加入细胞，过夜孵育即可观察
图3. 利用 Premo? FUCCI细胞周期传感器在活细胞中进行细胞周期进程成像。(A)细胞周期进程及细胞核荧光变化示意图。(B)使用Premo? FUCCI细胞周期传感器(P36237)转导U2OS细胞，然后采用Alexa Fluor? 647小麦胚芽凝集素(W32466)染色。
Premo? FUCCI Cell Cycle Sensor (BacMam 2.0)
2 x 1000 μl
Premo? FUCCI Cell Cycle Sensor (BacMam 2.0)
2 x 200 μl
&4.细胞周期流式产品
&&Vybrant? DyeCycle?染料设计用于在活细胞中针对DNA含量进行流式细胞技术分析；所有Vybrant? DyeCycle?染料皆为DNA选择性、可穿透细胞膜，并且在结合至双链DNA之前保持非荧光状态。一旦与DNA结合，这些染料会散发出与DNA含量成正比的荧光信号。只需简单的步骤就能以Vybrant? DyeCycle?将细胞染色：将细胞培养在添加Vybrant? DyeCycle?染料的环境后，便可直接测量荧光——不需任何额外的处理或离心步骤。荧光数据可用于制作频率分布图，以呈现出细胞周期的不同阶段(图4)。Vybrant? DyeCycle?染料家族能让您将活细胞染色以便进行DNA图谱鉴定，同时可自由选用405、488、532或633nm激发光。Vybrant? DyeCycle?染料对细胞不具毒性，因此可用于根据细胞周期阶段将细胞群体分类。
图4. 分析活细胞中的细胞周期。分布图显示经Vybrant? DyeCycle?染料染色的Jurkat活细胞中的DNA含量分布情况。G0/G1和M期分布图高峰中间间隔了分布于S期的细胞。
单变量的DNA含量分析为一广泛应用于肿瘤学、细胞学及分子生物学研究的公认实验方法。选用另外的激光波长，而将常用的488nm激光保留给其他标记，则可用于进行多色荧光的细胞周期研究。FxCycle? Violet和FxCycle? Far Red可分别用于紫色激光和红色激光，以此两种激光测量DNA含量，其他参数如细胞周期蛋白、周期蛋白依赖性蛋白激酶(CDK)、细胞周期检测点、核蛋白以及增殖标记便可通过常用的488nm激光加以测量(图5)。
图5. 多参数细胞周期及免疫表型分析。TF-1红血球母细胞以酒精固定过夜，经冲洗后以0.1% Triton X-100/PBS/1% BSA重悬，再以anti-histone H3[pS10]纯化抗体搭配Zenon? Alexa Fluor? 488 Rabbit IgG标记试剂及FxCycle? Violet Stain染色。pH3信号(红色)表示细胞正处于有丝分裂期。
Vybrant? DyeCycle? Violet Stain
369/437 200 assays
Vybrant? DyeCycle? Green Stain
506/534 200 assays
Vybrant? DyeCycle? Orange Stain
519/563 200 assays
Vybrant? DyeCycle? Ruby Stain
638/686 400 assays
Vybrant? DyeCycle? Ruby Stain
638/686 100 assays
FxCycle? Violet Stain
358/461 500 assays
FxCycle? Far Red Stain
640/658 500 assays
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