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1.75亿学生的选择
植物组织培养过程中造成污染的原因有哪些?
污染的来源.植物组培污染主要是霉菌、细菌和酵母菌引起的污染.霉菌和酵母菌在培养条件下生长快,很容易观察到,而细菌潜伏期长,植物组织一般不表现症状,所以很难在前期和肉眼观察到[1].国外有关学者认为细菌污染的来源主要有三个：一是材料内部灭菌处理不好,这样造成的污染占污染总数的1/3～1/2.二是在正常的灭菌的条件下,内生菌能够存活,这样的污染占污染源的1/4.三是来自寄生植物的污染占1/4～1/2.同时认为有些植物的昆虫和螨虫的体表带有霉菌的孢子和细菌,在九、十月份是重要的污染源,因多种植物昆虫处在大量繁殖阶段,此时大量昆虫造成的污染源最易造成组培污染的严重发生.近六年来,我们通过对猕猴桃、樱桃、托柄菝葜及大花非洲菊初级培养污染的研究中发现,高温、多雨的环境更有利于污染的发生,而且随着植物材料年龄的增长,植物材料的健康状况不断恶化,组培污染也会更加严重.另外,外植体的状况,环境条件和操作过程也是引起污染的主要原因.由于培养的植物材料大都采集于田间栽培植株,材料上常附有各种微生物,一旦被带入培养基,即会迅速繁殖滋长,造成污染,培养失败.所以培养前必须对外植体进行严格的消毒处理,消毒的尺度为既能全都杀灭外植体上附带的微生物,但又不伤害材料的生活力.因此,必须正确选择消毒剂和使用的浓度、处理时间及程序.目前,常用的消毒剂有次氯酸钙、氯化汞、次氯酸钠、双氧水、酒精（70％）等.具体消毒方法如下：（1）茎尖、茎、叶片的消毒消毒前先用清水漂洗干净或用软毛刷将尘埃刷除,茸毛较多的用皂液洗涤,然后再用清水洗去皂液,洗后用吸水纸吸干表面水分,用70％酒精浸数秒钟,取出后及时用10％次氯酸钙饱和上清液浸泡10～20分钟.或用2％～10％次氯酸钠溶液浸泡6～15分钟.消毒后用无菌水冲洗3次,用无菌纱布或无菌纸吸干接种.（2）根、块茎、鳞茎的消毒这类材料大都生长在土中,常带有泥土,挖取时易遭损伤.消毒前必须先用净水清洗干净,在凹凸不平处以及鳞片缝隙处,均用毛笔或软刷将污物清除干净,用吸水纸吸干后,在70％酒精中浸一下,然后用6％～10％次氯酸钠溶液浸5～15分钟,或用0．1％～0．2％氯化汞消毒5～10分钟,最后用无菌水清洗3～4次,用无菌纱布或无菌纸吸干后接种.（3）果实、种子的消毒这类材料有的表皮上具有茸毛或蜡质,消毒前先用70％酒精浸泡几秒钟或2～10分钟,然后用饱和漂白粉上清液消毒10～30分钟或2％次氯酸钠溶液浸10～20分钟,消毒后去除果皮,取出内部组织或种子接种.直接用种子或果实消毒,经消毒后的材料均须用无菌水多次冲洗后接种.（4）花药、花粉的消毒植物的花药外面常被花瓣、花萼包裹着,一般处于无菌状态,只需采用表面消毒即可接种.通常先用70％酒精棉球擦拭花蕾或叶鞘,然后将花蕾剥出,在饱和漂白粉上清液中浸泡10～15分钟,用无菌水冲洗2～3次,吸干后即可接种.
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植物组织培养中的褐变现象及其防止措施
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你可能喜欢植物组织培养技术 【范文十篇】
植物组织培养技术
范文一：《植物组织培养技术》
一、实验课名称：植物组织培养技术
Techniques on Plant Tissue Culture 二、实验课性质：非独立设课，专业任选课 三、适用专业：生物技术 四、采用教材及参考书
1．曹孜义．《实用植物组织培养技术教程》．甘肃科学技术出版社，1996 2．李俊明．《植物组织培养教程》．中国农业大学出版社，1991 3．颜昌敬．《植物组织培养手册》．科技出版社，1990 4．谭文澄．《观赏植物组织培养技术》．中国林业出版社，2000 五、学时学分：课程总学时：18； 课程总学分：1
六、实验项目名称和学时分配
七、实验教学的目的和要求
植物组织培养实验是生物技术专业的一门选修课程，也是一门实践性和应用性很强的学科。本课程通过一些有代表性的实验，使学生了解植物组织培养实验的基本原理，掌握植物组织培养的基本实验方法，巩固和加深对植物组织培养知识的理解，掌握植物组培实验的方案设计、相关仪器设备的使用及正确的实验操作规程，培养学生初步掌握植物组织培养研究所必需的基本实验技术，并在科学态度、实验技能技巧、独立操作能力等方面获得训练与提高。 八、实验项目的内容和要求
实验一：参观植物组织培养实验室及实习基地
内容：组织培养的化学室、无菌室、培养室、温室的设置及设计要求，仪器设备、器皿用具的名称及其作用和有关注意事项。
要求：了解如何组建植物组织培养实验室和育苗温室，熟悉组织培养中所涉及的各种仪器、设备、用具及使用方法，熟知组织培养实验室常用药品，并掌握其性质及用途。
应配备的主要设备名称和台件数
实验二、组培苗工厂化生产的厂房工艺流程设计
内容：根据生产要求确定生产规模；进行商业性组培室和小工厂厂房设计；进行生产工艺流程设计。
要求： 使学生对现代化组培苗生产模式有一个更为深刻的认识，能熟练的根据生产规模设计合理的厂房及工艺流程。
实验三、 MS培养基母液配制与保存
内容：配制10倍浓度大量元素母液；配制100倍浓度微量元素母液；配制100倍浓度的铁盐母液；配制100倍浓度的有机物母液；母液的装瓶与保存。
要求：使学生掌握配制与保存培养基母液的基本技能。
应配备的主要设备名称和台件数
实验四、 MS培养基的制备与灭菌 内容： MS培养基的制备、分装与灭菌
要求：使学生掌握MS培养基配制、分装、封瓶以及灭菌的基本程序和方法。 应配备的主要设备名称和台件数
实验五、 野外材料的处理、消毒和接种
内容：野外材料的预处理、消毒灭菌、切割及接种。
要求：学习并掌握组织培养中外植体的选择、取材、预处理、消毒灭菌和接种操作技术。
应配备的主要设备名称和台件数
实验六、 马铃薯、草莓的继代培养
内容：马铃薯、草莓试管苗的继代转接、培养与观察
要求：使学生掌握不同生长和分化方式材料继代的原则，以便在继代操作过程中灵活运用；对继代材料进行正确的观察（包括材料的污染、分化情况）
应配备的主要设备名称和台件数
九、实验课考核方式
1、本实验课为非独立开课，考核方式为考查，成绩由平时成绩（占30%）、实验报告成绩（占30%）和终期考核成绩（占40%）三部分构成。
2．平时成绩确定：由任课教师根据实验操作、问题回答和出勤情况确定，按优秀、良好、中等、及格和不及格五个等级评分。
3．实验报告成绩：本课程要求学生实验报告应包括以下内容：①目的要求；②实验原理（简明）；③方法与步骤（主要操作步骤）；④实验结果：如实、准确的描述；⑤分析讨论。实验报告成绩由任课教师根据学生实验报告写作是否符合规范要求、试验结
果及分析的具体情况给出。每次报告均按五个等级评分，实验报告成绩为各次报告成绩的平均值。
4．终期考核成绩：实验课结束后进行笔试、口试和（或）现场操作考核，按百分制评分。
植物组织培养操作技术
摘要 植物组织培养的重点在于操作，操作规范与否决定了组培工作的成败，该文就溶液配制、培养基制作、灭菌技术、接种及造成污染的原因进行分析总结，并提出了相应的解决方法，对组培日常工作起到一定的指导作用。
关键词 植物组织培养；技能；操作
植物组培快繁技术是生物技术领域中的一项新技术，也是高科技技术。以前大多停留在实验室阶段，如今部分企业已经实行产业化市场运作，直接服务于经济发展。植物组织培养生产是一个系统工程，从一个外植体（芽、侧芽、叶片、茎段、花梗、花托、根段、根芽等）→启动培养产生中间繁殖体→中间繁殖培养→生根幼苗培养→试管苗驯化移栽→田间定植，这些环节都需要熟练的操作技术，才能保证生产计划的按时完成。操作技术主要包括熟练地配制培养基，具备娴熟的接种技术，掌握各种灭菌技术，以最大限度地减少污染的发生。操作人员应具备一定的化学知识，以对实验室基本设备进行日常管理及维护。
1 溶液配制技术
组培工作中需要配制一定浓度的培养基母液、灭菌剂，这也是组培工作的首要环节，一定要会使用相关的设备仪器，还要懂得各种化学药品性质，才能掌握各种药品溶液的配制技术。
1.1 准备工作
在配制药品前，要准备相应范围的电子天平，仔细核对各种药品，检查与润洗各种玻璃仪器和器皿。
1.2 操作要点
1.2.1 电子天平的正确使用及称量。称量前清洁、检查天平水平、调整零点；称量的最大量不得超过天平的最大负荷；具有腐蚀性的化学药品不得直接放入称盘内；称量值超过所需值时用纸筒慢慢摄取，然后关住天平侧门使其读数稳定，直至观察值达到所需值为准；打开或关闭天平门时动作要轻、慢、稳，以防影响最终读数；读数时必须关好天平门，防止气流影响；称量完毕后归零断开电源。
1.2.2 溶液混合与溶解。溶液混合时按其化学性质进行溶解，以防止沉淀的产生；溶解时要缓缓加入蒸馏水，不断用玻璃棒搅拌，注意玻璃棒不要碰到烧杯壁，分多次少量洗涤玻璃棒和烧杯并移入容量瓶中，如果是一定浓度的溶液注意刻度线的标线；对需助溶的物质（激素）加入不同助溶剂，微热使其充分溶解。
1.2.3 容量瓶配制精确物质的定容技巧。定容主要是用来配制标准溶液或稀释溶液的过程，是特指配制一定物质量浓度时的其中一步，具体可分为计算、称
范文三：植物组织培养技术 绪论
课后讨论题：
1、对植物组织培养技术的展望。
2、植物组织培养发展史的各个时期，有哪些主要的培养技术获得成功？ 课外作业题：
1、什么叫植物组织培养技术？它有哪些类型？其理论依据是什么？
2、从外植体到小植株有哪些培养途径？
3、试述目前植物组织培养的应用。
植物组织培养实验室的基本设备和一般技术 课堂讨论题：
1、为了降低生产成本，组培室的设计应注意哪些问题？
2、在高温高压灭菌过程中应该注意的哪些问题？
课外作业题
1、简述培养基和器具的灭菌方法和技术。
2、简述植物材料消毒的一般过程。
3、常用灭菌剂有哪些？其消毒原理是什么？各有哪些优缺点？
4、简述植物组织培养无菌操作技术的一般过程。
第二章 培养基
课堂讨论选题：
植物生长发育的必需元素有几种？必需元素的条件是什么？其在植物体内的生理作用主要有哪几方面？
课外作业题：
1、常用培养基分为哪几类？各类的主要特点是什么？
2、培养基的成分有哪些？各有什么作用？
3、试述培养基选择的方法。
4、简述培养基配制的基本过程。
细胞的全能性与器官发生
复习思考题：
1、简述植物细胞全能性、细胞分化、脱分化与再分化的概念。
2、再分化有哪几种方式？它们的特点是什么？
3、愈伤组织形成的条件是什么？其形成过程分为哪几个阶段？
4、试述优良愈伤组织应用具备的特点及获得优良愈伤组织的方法。
5、影响茎芽分化的因素有哪些？
第四章 体细胞胚胎发生
课外作业题：
1、植物体细胞胚胎发生的概念是什么？有哪些途径？
2、影响体细胞胚胎发生的主要因子有哪些？
3、长期培养物形态发生潜力丧失的可能原因有哪些？
4、愈伤组织培养中存在哪两种类型的细胞？它们的特点是什么？
5、简述制造单胚人工种子的方法和工业化生产人工种子的步骤。
6、试述体细胞胚胎发生的实际应用。
复习思考题：
1、简要说明分离单细胞的方法。
2、单细胞培养的基本方法有几种？
3、什么是细胞悬浮培养？简述分批培养和连续培养的特点。
4、试述诱导细胞同步化的方法及原理。
5、试述细胞培养的应用。
单倍体的产生
1、简述单倍体在遗传研究和植物育种中的意义和单倍体获得的途径。
2、试比较活体小孢子和离体小孢子发育途径。
3、简述花药培养的一般程序。
4、简述花粉分离与纯化的方法及花粉培养的方式。
5、影响雄核发育的因素有哪些？
6、试述单倍体植株的鉴定方法及其染色体加倍的方法。
第七章 离体授粉
复习思考题：
1、什么是离体授粉？它有哪些类型？
2、简述离体授粉的程序。
3、什么是胚珠培养和子房培养？简述胚珠培养和子房培养的方法。
4、离体授粉中影响结实的因子有哪些？
5、离体胎座授粉方法有哪些方面的应用？
合子胚培养
复习思考题：
1、什么是胚胎培养？什么是合子胚培养？简述胚培养的方法和应用。
2、试述合子胚培养的过程。
3、试述影响胚培养的因素。
4、简述“胚拯救"获得远缘杂种的方式。
第十章 植物脱毒技术
复习思考题：
1、植物茎尖培养脱病毒的机理是什么？
2、常用的植物脱毒方法有哪几种？
3、试述影响茎尖组织培养脱毒效果的因素。
4、常见的脱毒植株的检测方法有哪些？
5、简述马铃薯脱毒种薯的生产程序。
植物离体无性繁殖
复习思考题：
1、简述植物离体无性繁殖的概念和特点。
2、植物快繁的器官形成方式有哪些？
3、试述植物离体快繁的程序及影响植物离体快繁的因素。
4、简述植物离体快繁中存在的问题。
植物种质资源离体保存
复习思考题：
1、植物种质资源离体保存的概念是什么？它有哪些优缺点？
2、限制生长保存的方法有哪些？
3、植物超低温保存的概念是什么？它的基本操作程序如何？
范文四：摘要 植物组织培养的重点在于操作，操作规范与否决定了组培工作的成败，该文就溶液配制、培养基制作、灭菌技术、接种及造成污染的原因进行分析总结，并提出了相应的解决方法，对组培日常工作起到一定的指导作用。 　　关键词 植物组织培养；技能；操作 　　中图分类号 Q943.1 文献标识码 B 文章编号 （2-02 　　植物组培快繁技术是生物技术领域中的一项新技术，也是高科技技术。以前大多停留在实验室阶段，如今部分企业已经实行产业化市场运作，直接服务于经济发展。植物组织培养生产是一个系统工程，从一个外植体（芽、侧芽、叶片、茎段、花梗、花托、根段、根芽等）→启动培养产生中间繁殖体→中间繁殖培养→生根幼苗培养→试管苗驯化移栽→田间定植，这些环节都需要熟练的操作技术，才能保证生产计划的按时完成。操作技术主要包括熟练地配制培养基，具备娴熟的接种技术，掌握各种灭菌技术，以最大限度地减少污染的发生。操作人员应具备一定的化学知识，以对实验室基本设备进行日常管理及维护。 　　1 溶液配制技术 　　组培工作中需要配制一定浓度的培养基母液、灭菌剂，这也是组培工作的首要环节，一定要会使用相关的设备仪器，还要懂得各种化学药品性质，才能掌握各种药品溶液的配制技术。 　　1.1 准备工作 　　在配制药品前，要准备相应范围的电子天平，仔细核对各种药品，检查与润洗各种玻璃仪器和器皿。 　　1.2 操作要点 　　1.2.1 电子天平的正确使用及称量。称量前清洁、检查天平水平、调整零点；称量的最大量不得超过天平的最大负荷；具有腐蚀性的化学药品不得直接放入称盘内；称量值超过所需值时用纸筒慢慢摄取，然后关住天平侧门使其读数稳定，直至观察值达到所需值为准；打开或关闭天平门时动作要轻、慢、稳，以防影响最终读数；读数时必须关好天平门，防止气流影响；称量完毕后归零断开电源。 　　1.2.2 溶液混合与溶解。溶液混合时按其化学性质进行溶解，以防止沉淀的产生；溶解时要缓缓加入蒸馏水，不断用玻璃棒搅拌，注意玻璃棒不要碰到烧杯壁，分多次少量洗涤玻璃棒和烧杯并移入容量瓶中，如果是一定浓度的溶液注意刻度线的标线；对需助溶的物质（激素）加入不同助溶剂，微热使其充分溶解。 　　1.2.3 容量瓶配制精确物质的定容技巧。定容主要是用来配制标准溶液或稀释溶液的过程，是特指配制一定物质量浓度时的其中一步，具体可分为计算、称量、溶解、冷却、转移、定容、摇匀、贴签等几步。①检漏：检漏时，检查橡皮筋是否完好，加水至瓶口标准线附近盖好瓶塞，将瓶倒立30　s，观察瓶塞周围是否漏水，然后将瓶直立，把瓶塞转动180°后再盖紧，倒立，触摸瓶颈，仍不渗水，即可使用。②润洗：用蒸馏水润洗3～4次后再用待装溶液润洗，以保证定容后溶液的浓度不发生变化。③定容：引流时玻璃棒伸到刻度线以下；热溶液应凉至室温后对其进行稀释，因为温度升高会使瓶体膨胀，致使所量体积不准确；用少量蒸馏水冲洗玻璃棒、烧杯3～4次，洗出液全部转入容量瓶中，然后用蒸馏水稀释，接近容量瓶标线1～2　cm时用胶头滴管进行滴定以防定容失败；视线与溶液弯月面最低点恰好相切；容量瓶用完应及时洗涤干净，塞上瓶塞，并在塞子与瓶口之间夹一条纸条，防止瓶塞与瓶口粘连[1]。 　　1.2.4 移液管移取母液的移液技巧。制作培养基时需用不同规格的移液管移取不同体积的母液。分度移液管应从最上面刻度起始往下放出所需体积，不能用多少体积就取出多少体积；管尖插入母液不要太深或太浅；当液面升高到刻度线以上时，快速移去洗耳球，立即用右手食指按住管口，将移液管提离液面，管尖垂直接触容器内壁，略微放松食指并轻轻转动移液管，直到溶液的弯月面最低点与颈标线恰好相切为宜，待溶液流尽停留15　s；如果移液管上标有“吹”字，则最后残留在管内的液滴必须吹出；使用完移液管，清洗其内外壁，再放回原处；清洗、移液过程中溶液不能滴到桌面、地面。 　　2 培养基制作技术 　　培养基是植物组织培养的“血液”，其成分及供应状况直接关系到外植体的生长与分化。采用更适于植物生长的培养基提供植物材料生长发育需要的养分和生长调节物质。常用的培养基有MS、1/2MS、White，现以MS为例介绍其制作、分装与灭菌的操作技术。 　　2.1 准备工作 　　进行培养基制作前，将所需要的量筒、烧杯、吸管、玻璃棒等仪器放在指定位置。使用前仔细观察母液是否变色或沉淀以及各种母液的名称、浓度、配制日期。称量琼脂、蔗糖，准备好蒸馏水以及培养瓶等。 　　2.2 操作要点 　　取适量的蒸馏水放入容器，微热使琼脂充分溶化呈现半透明状，加入蔗糖待其完全溶解，将移取的各种母液加入容器内，并用玻璃棒搅拌使其混合均匀，定容，调整并测其pH值3～4次，最后进行分装、灭菌。 　　2.2.1 pH值。MS培养基的pH值由灭菌前的5.8降到5.5，造成pH值下降的最主要原因是高温灭菌过程中EDTA铁盐与其他微量元素发生相互作用所致。MS培养基的凝固与pH值呈正相关。当pH值低于5.5时，培养基一般不能很好地凝固，随pH值的提高，培养基的凝固效果明显改善。植物组织在一定pH值下才能正常生长。因此，在配制时考虑培养基凝固情况的同时，也要注意pH值的大小。 　　2.2.2 分装。分装时要掌握好分量，以注入培养容器的1/4～1/3为宜。分装时不要将培养基沾到瓶壁上，分装后立即上盖，做好标记。 　　2.2.3 高压湿热灭菌。培养基采用湿热灭菌法，把分装好的培养基置入高压锅中，排列均匀，瓶间留有一定空隙，关闭锅盖，接通电源。当压力升至0.11　MPa（温度121　℃）时，维持15～30　min，断开电源。当压力降到“0”时，打开排气阀，排掉剩余蒸汽，打开锅盖取出培养基[2]。 　　3 灭菌与清洗技术 　　在组织培养过程中消毒、灭菌是不可忽视的环节。消毒、灭菌将外植体、接种器材、接种室等带有的细菌杀死以减少污染，提高试管苗成活率。 　　3.1 灭菌 　　3.1.1 外植体灭菌。采集的外植体沾有很多污染物，在接种前必须将其放在自来水下冲洗1　h，并将比较大的外植体剪小，进行初步处理以利于在容器中放置和接种过程的操作；将外植体带入无菌操作室，用75%酒精溶液浸泡10～30　s，然后用0.1%升汞溶液浸泡30　min，用无菌水冲洗3～5次，将外植体上的水珠用无菌纸吸干，然后进行接种。 　　3.1.2 用于无菌操作的器械采用灼烧灭菌。接种过程中可将镊子、剪刀、解剖刀等浸入95%酒精中，使用前取出在酒精灯火焰上灼烧灭菌，冷却后立即使用。 　　3.1.3 玻璃器皿干热灭菌。干热灭菌是利用烘箱加热到160～180　℃以杀死微生物。干热灭菌的物品要预先洗净并干燥、包装，以免灭菌后取用时重新污染。烘箱内放置的物品不宜过多，以免妨碍热对流和穿透。 　　3.1.4 室内空间紫外线和熏蒸消毒灭菌。①紫外线灭菌：在无菌操作间、超净工作台用紫外线灭菌。紫外灯距照射物1.2　m以内紫外线杀菌能力最强。②熏蒸消毒灭菌：熏蒸消毒灭菌可采用以下2种熏蒸方法：一是烟雾熏蒸剂。利用杀菌剂的烟雾进行空间消毒。将药物与易燃发烟物搅拌均匀，点燃后发烟但不能有燃烧火焰，通过杀菌烟雾扩散到房间各个角落，封闭门窗，杀菌效果好。二是气体熏蒸剂。利用甲醛溶液挥发进行空气消毒。将2%甲醛溶液（10　mL/m3）加入0.5%高锰酸钾即可挥发浓雾气体，散发至整个房间，封闭门窗1　d后通风，可达到很好的消毒效果[3]。 　　3.2 清洗 　　3.2.1 新玻璃器皿。用1%盐酸溶液浸泡后用洗衣粉水洗涤，再用清水反复冲洗，蒸馏水淋冲，干燥备用。 　　3.2.2 用过的培养瓶。去除瓶内残渣将培养瓶用洗涤液浸泡，然后用清水洗涤3～4次，倒置于架子上至没有流水时转入烘箱中烘烤。 　　3.2.3 污染的培养瓶。首先必须高温灭菌后，再按常规方法清洗。 　　4 接种技术 　　表面灭菌后的植物材料经过切碎或分离出器官或组织，转接到无菌培养基上进行诱导培养及快繁。整个接种过程必须在无菌条件下进行。 　　4.1 准备工作 　　植物材料的选择和预处理、无染菌的培养苗、75%酒精、无菌水、漂白粉、培养皿，无菌纸、超净工作台、灭菌器、剪刀、镊子。 　　4.2 操作要点 　　在无菌环境下将植物材料在消毒的接种盘中剪成每芽一段，注意芽上切口离芽不要太近，一般在0.5　cm左右，芽下切口离芽也在0.5　cm左右。打开已准备好的培养基，在酒精灯无菌圈内接入植物材料，接种时植物材料上切口向上，下切口插入培养基中直立，使芽基部紧贴培养基，接种的容器中植入的数目不宜太多，以3～5个为宜，并保持一定距离，然后将盖子盖上。接种操作要时间短，速度快，技术到位，防止交叉污染[4]。 　　5 组培操作过程引起污染的原因及对策 　　5.1 瓶苗污染与环境污染 　　5.1.1 造成污染的因素。培养基及各种使用器具消毒不彻底；外植体灭菌不彻底，有菌残存在细胞组织中；操作时人为因素带入和交叉污染；环境不清洁；超净工作区域污染等。 　　5.1.2 控制污染的措施。①器具灭菌：接种用的器具除经过高温消毒外，还需在接种过程中避免交叉污染，即用剪刀、镊子对植物茎段进行处理的过程中，每使用1次后，需在酒精灯火焰上灼烧或者插入灭菌器中，轮换使用。②接种过程：在接种过程中，很容易人为带入各种微生物，引起比较严重的污染。应注意以下几点：接种人员要注意个人卫生，特别是手要认真清洗，并用70%酒精进行消毒，还时常用酒精棉球擦手；用70%酒精擦拭需继代转接的培养瓶；在操作区内，不要放入过多的待用培养基，避免气流被挡住；接种者应当熟练操作技术，做到操作娴熟、干练。 　　5.2 接种前后对环境的灭菌 　　接种前打开无菌操作室的紫外灯照射30　min，同时打开超净工作台的紫外灯和风机，在操作时关闭紫外灯并调小风速；接种结束后将植物垃圾带出操作室，并用75%酒精溶液进行拖地，操作结束后打开臭氧发生器定时30　min对整个环境进行灭菌。 　　环境污染也会使各个环节的污染明显增加，严重时会使组培工作无法进行。环境要进行定期的熏蒸消毒，一般用高锰酸钾和福尔马林；在接种室和培养室内，平时还需要紫外灯照射消毒；减少环境污染除加强灭菌外，平时应天天清扫，使环境清洁有序。 　　6 参考文献 　　[1]　张维民.“植物组织培养”实践操作技能培养与提高[J].生物学杂志，）：59-60. 　　[2]　梁伯江.植物克隆技术[J].农家科技，2006（5）：33-38. 　　[3]　吴晓霞.“植物组织培养”实验教学模式初探[J].实验教学与仪器，）：43-44. 　　[4]　郭新春，肖文惠，陆相田，等.工厂化组织培养中的污染防止措施[J].农村科技，2007（11）：31.
范文五：一、选择题
1、 植物组织培养成功与否，一方面取决于
培养材料本身
的性质；另一方面取决
于培养基的
2、 植物组织培养技术的三大难题分别为
3、 病毒在植物体内的运转方式有
短距离运转
长距离运转
细胞间的胞间连丝
向邻近细胞中扩散，速度很慢。后者通过寄主植物
韧皮部的疏导组织
随着营养输送进行转移，速度很快。
4、 悬浮培养的材料必须达到
悬浮培养物质分散性多 、细胞团较小均一性好，细
胞形状和细胞团大小大致相同
和 生长迅速
等三个要求。
5、 原生质体的融合可实现__体细胞__的杂交，其融合的方式分为___自发融合___和
__诱导融合__两类。
6、 从再生植株倍性来看，小孢子培养通常产生
植株，胚培养通常
通常产生三倍体植株。
7、具有防止褐变作用的维生素是___Vit.c___。
二、单项选择题（本大题共10小题，每小题1分，共10分）在每小题列出的四个选
项中只有一个选项是符合题目要求的，请将正确选项前的字母填在题前的括号内。
1、( C )可作为植物外植体的表面消毒剂是
A. 漂白粉和水 B. 次氯酸钠溶液和聚乙二醇 C. 氯化汞和新洁尔灭D.酒精和氯化钠
2、( B ）大多数植物组织培养最适温度一般为
3、( A )在适宜的培养条件下，还可使愈伤组织长期传代生存下去，这种培养称为。
A. 继代培养
B. 再分化培养
C.胚状体培养
4、( C )下列有关细胞全能性的含义，正确的是
A、每个生物体内的所有细胞都具有相同的功能
B、生物体内的任何一个细胞可以完成该个体的全部功能
C、生物体的每一个活细胞都具有发育成完整个体的潜能
D、生物体的每个细胞都经过产生、分裂、分化、生长、衰老、死亡的全过程
)下列不属于活性炭在组织培养中的作用是_________。
A、吸附有毒物质
B、减少褐变，防止玻璃化
C、创造黑暗环境，增加培养基的通透性，利于根的生长
D、增加培养基中的养分
6、( A )下列那种不是无性繁殖的器官_________。
7、 ( B )下列技术培育出的新个体中，遗传物质只来源于一个亲本的是
①细胞组织培养 ②细胞融合 ③扦插 ④诱导产生多倍体 ⑤杂交育种 ⑥转基因工程
8、( D )在下列选项中，不需要采用植物组织培养技术的是
A、利用基因工程培育抗棉铃虫的棉花植株
B、利用细胞工程技术培养“番茄一马铃薯”杂种植株
C、利用花药离体培养得到单倍体植株
D、利用秋水仙素处理萌发的种子或幼苗，得到染色体数目加倍的植株
9、( B ) 植物离体保存的主要步骤是
①离体培养物的保存 ②离体培养与祛除病原物 ③种质离体收集 ④遗传稳定性鉴定
A、①②③④
B、③②①④
C、②④①③
D、①②④③
10、 ( C ) 原生质体纯化步骤大致有如下几步
①将收集到的滤液离心，转速以将原生质体沉淀而碎片等仍悬浮在上清液中为准，一
般以500r／min离心15min。用吸管谨慎地吸去上清液。
②将离心下来的原生质体重新悬浮在洗液中(除不含酶外，其他成分和酶液相同)，再
次离心，去上清液，如此重复三次。
③将原生质体混合液经筛孔大小为40～100um的滤网过滤，以除去未消化的细胞团块
和筛管、导管等杂质，收集滤液。
④用培养基清洗一次，最后用培养基将原生质调到一定密度进行培养。一般原生质体
的培养密度为104～106／ml。
A、①②③④
B、③②①④
C、③①②④
D、②③①④
三、判断题（对的打“√”，错的打“×”，并改正；每小题2分，共10分。）
1、（√ ）胚状体的维管组织与母体结构和外植体的维管组织一般没有联系。
2、（× ）培养基当中生长素与细胞分裂素的比例高时，仅形成愈伤组织。
3、（√ ）花药和花粉培养可获得单倍体植株。
4、（×）蔗糖可作为渗透性冰冻保护剂。
5、（×）一方亲本的细胞核和细胞质分另一方亲本的少量核物质和全部细胞质融合 叫细胞质杂交 。
四、名词解释（每小题3分，共15分）
1、脱分化:是指已分化的组织（细胞分裂已停止）在适当的培养条件下恢复细胞分裂活性，从已分化的成熟状态转变为分生状态，也就是由有结构和功能的组织转化为无 结构和特定功能的细胞团。
2、愈伤组织:植物各器官的外植体在离体的条件下，经细胞脱分化等一系列过程改变了它们原有的特性而形成的一种能迅速增殖的不特定结构和功能的细胞团，称为愈伤组织。
在人工培养基上从外植体诱导形成的一团无序生长的薄壁细胞。
3、人工种子:通过植物组织培养的方法获得的具有正常发育能力的材料，外面还包被特定的物质，在适宜条件下可以发芽成苗的植物幼体。
4、植物快速繁殖:利用离体培养技术，将来自优良植株的器官、组织和细胞进行离体培养，在短期内获得大量遗传性一致的个体的方法（技术）称快速繁殖（无性繁殖或微繁），由于这种繁殖方式繁殖数量大、速度快，因此也称离体快速无性繁殖。
5、连续培养:是利用特别的培养容器进行大规模细胞培养的一种方式。连续培养过程中，不断注入新鲜培养基，排掉等体积的用过的培养基，培养液中的营养物质得到不断补充。Continuous Culture 对于植物细胞代谢调节的研究，决定各个生长限制因子对细胞生长的影响，以及次生物质的大量生产都有一定意义。
五、简答题（共30 分）
（一）、某培养基的配方是MS＋BA 1.5 mg/L＋NAA2.5 mg/L＋IBA 1.0 mg/L+ 2.5%蔗糖＋0.7％琼脂粉。MS母液的浓度分别是：大量元素50倍，微量元素100倍，铁盐20倍，有机物100倍；BA母液浓度1.0 mg/ml ，NAA母液浓度0.5mg/ml，IBA母液浓度0.2mg/ml。要配制800ml该培养基，需要吸取各种母液各多少ml？分别称取蔗糖、琼脂粉各多少克？（要求写出计算步骤）（12分）
（二）、如何减轻试管苗玻璃化现象？（10分）
（1）利用固体培养方法，增加琼脂浓度，降低培养基中的渗透势，造成细胞吸水阻遏。或提高培养基中蔗糖含量或加入渗透剂，减少培养基中植物材料可获得的水分，这也可以抑制玻璃化的发生。
（2）适当降低培养基中的细胞分裂素和赤霉素的浓度。或者，适当增加培养基中Ca、Mg、Mn、K、P、Fe、Cu、Zn元素含量，降低N和CL元素比例，特别是降低胺态氮的浓度，提高硝态氮量。
（3）增加自然光照。 因为自然光中的紫外线能促进试管苗成熟。
（4）改善培养器皿的气体交换状态封口膜
（5）在培养基中添加其他物质。如添加马铃薯汁可降低油菜的玻璃苗的产生频率。
（三）、简答出一般茎段是怎样选材消毒和接种的？（8分）
生长开始的季节采样：较幼嫩的材料
消毒：自来水较长时间冲洗+70%酒精浸泡植物种+无菌水冲洗2~3次+2%~10%NaClO（0.1%HgCl2）12min+无菌水冲洗3次。
接种环节：接种室的消毒、外植体的接种
外植体的接种程序。注意（防止交叉污染）：
①无菌滤纸上切除材料
②刀和镊子等接种工具使用一次应放入70%（或95%）酒精中浸泡，然后灼烧放晾备用
具体操作：①左手拿三角瓶或果酱瓶，用右手轻轻取下封口膜或盖子
②将三角瓶或果酱瓶的口靠近酒精灯火焰，瓶口稍微倾斜，这样瓶口外部在火焰上旋转灼烧数秒钟，后用镊子将外植体送入瓶中。
六、论述题（共15分）
为什么茎尖培养可获得无特定病毒植株？怎样获得无特定病毒的试管苗？获得的无病毒苗用一种方法鉴定其真的无特定病毒的植株？
植物脱毒（virus elimination）：利用植物组织培养技术，脱除植物细胞中浸染的病毒，生产健康的繁殖材料。
茎尖培养可以获得无特定病毒植株的原因：
病毒运转速度慢，加上茎尖分生组织没有维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，赶不上细胞分裂和生长的速度，所以生长点的病毒数量极少，几乎检测不出。
鉴定方法：指示植物法
概念：有些植物对病毒极为敏感，一旦感染病毒就会在其叶片乃至全株上表现特有的病斑，把这种植物称为病毒敏感植物或指示植物。
每种病毒都有自已的敏感植物
如：马铃薯病毒的敏感植物有千日红、黄花烟、毛叶曼陀罗；大蒜病毒的敏感植物有黎、千日红；大丽花病毒的敏感植物为：矮牵牛、黄瓜；菊花病毒：矮牵牛、豇豆 。
范文六：三．组培苗生长环境有何特点？如何针对这些特点提高移栽成活率？
1.组培炼苗是组培过程较为重要的一个环节，是一个较为复杂的技术体系，提高炼苗成活率
是决定组培成败和降低组培成本的关键。试管苗一般在高湿（100%）、弱光
（Lux）、恒温（25℃）下培养，
2.1组培苗的特点
叶片无保护组织（角质层、蜡质、表皮毛等），加之细胞间隙大，气孔开张大，因此
水分散失较快，易于萎蔫。根无根毛或极少，并且有些从愈伤组织上发育的根与芽的疏导组
织不相同，因此吸水能力较弱。
2.2提高移栽成活率的方法
而当炼苗移栽时，环境有了极大的改变：湿度降低、光照增强、温度升高、温差变
大。具以上特点的组培苗，在此环境下，叶片失水较严重，根系吸水能力不足，即吸水量小
于蒸腾水量，从而造成植物萎蔫，炼苗失败。另一种情况是，空气温度上升要比基质温度上
升快，而根系的吸水能力在一定范围内与温度是成正比的，当气温升高时，加之湿度较低，
叶片蒸腾急速增加，此时基质温度上不去，根系吸水能力不够，造成蒸腾大于吸水的失衡状
态，从而萎蔫死亡。要想获得高的炼苗成活率就得针对以上问题，一方面提高出瓶苗的质量，
提高其抗逆性，生根前的壮苗、理想的生根配方和生根培养环境的调控是关键；另一方面就
得有针对组培苗特点创造一个适宜的炼苗环境，比如保证空气湿度，平衡空气和基质的温度
平衡关系等。
四、生长素类分裂素类调节剂在主培中有哪些生理作用？在快速繁殖的起始，芽增殖及生
根培养阶段应该如何使用？
培养中生长素一方面用于诱导愈伤组织的形成和生根，另一方面是与一定量的细胞分裂
素配合使用共同诱导不定芽的分化，侧芽的萌发与生长以及某些植物胚状体的诱导。
在植物组织培养中的细胞分裂素的主要功能是促进细胞的分裂和分化，打破顶端优势，
诱导芽的分化和增殖，促进组织和器官的不定芽发育。当培养基中的细胞分裂素与生长素的
比例高时，诱导芽的分化，反之，诱导根的分化。
快速繁殖的起始阶段
培养基中加入适量的生长素和细胞分裂素类
芽增殖阶段
向培养基中加入较多的细胞分裂素类的物质促进芽的分化
生根培养阶段
向培养基中加入较多的生长素类物质促进根的分化
五．利用组织培养技术生产苗木及次生代谢物的手段有哪些？培养对象分别是什么？培养
新品种的手段有哪些？培养对象分别是什么？
六．影响植物组织培养成功的因素有哪些？
1) 实验室要合适，要很好的控制好光照，湿度和温度。
2) 培养材料及所需要的实验用具要洗净，严格的消毒灭菌。
3) 培养基配置技术要合理，要注意调溶液的PH等（如：如果要培养长根的话，可以适当
的加大生长素的浓度）
4) 注意无菌操作技术
5) 实验操作是要注意无菌操作（操作幅度不要过大，手要消毒彻底等）
6) 外植体的选择（同一植物不同部位的细胞活性不同，一般植物鲜嫩的部位比较好，比如
说茎尖。像木质部就不合适。）
7) 各种激素类物质的配合比例要合适。
七．阐述植物组织培养的主要障碍，发生原因及防治措施？
八．某地区的一种马铃薯经多年种植后，植株变得矮小，产量和品质下降，请用所学组织
知识分析原因，并设计一个解决方案。
原因： 几乎所有的栽培植物都发现感染甚至几种病毒，大部分的病毒属于RNA病毒，病
毒对植物的生长发育产生不良的影响，常常会导致植物矮小，产量和品质的下降。
解决方案：（分生组织培养脱毒法）
1. 分生组织的分离
从大田中取健壮的植株的顶芽或萌发芽，带回实验室除去可见叶，材料清洗干净。用
75%酒精漂洗，在用20倍的次氯酸钠消毒8-10分钟，无菌水冲洗3次，然后在无菌
操作室进行无菌操作。切下生长点转入合适的培养基进行培养。
茎尖分生组织分离后转入到琼脂培养基上于25℃-27℃条件下进行光培养。
3. 建立无性繁殖体系
利用生长点培养无毒苗的成活率和脱毒率都非常低，培养出来的新苗要进行鉴定，鉴定
无毒后再用新苗的茎尖再进行培养新苗。
4. 脱毒苗试管株的移栽和品种特性鉴定
将试管苗移栽到土壤中，这个转变要有一个逐渐锻炼适应。
九． 现有MS培养基母液6瓶，母液1为50倍，母液2为50倍，母液3为50倍，
母液4为100倍，母液5为20倍，母液6为200倍，激素母液有1mg/ml
IAA,0.5mg/ml NAA,2mg/ml 6-BA,4mg/ml KT,以及蔗糖和琼脂若干，请利用这
些材料配置2L MS+2mg/L IAA+1mg/L NAA+3mg/L6-BA+3%蔗糖+0.7%
琼脂培养基，写出配制方法步骤及灭菌过程。
配制方法：
配制2L的各种物质的用量如下：
吸取母液的用量为：
母液1：2000ml/50=40ml
母液2：2000ml/50=40ml
母液3：2000ml/50=40ml
母液4：2000ml/100=20ml
母液5：2000ml/20=100ml
母液6：2000ml/200=10ml
激素用量：
IAA：吸取1mg/ml IAA母液4ml
NAA:吸取0.5mg/ml NAA母液4ml
6-BA:吸取2mg/ml 6-BA母液3ml
灭菌过程：
将混合的培养液加琼脂加热，到适宜的温度后调PH值为5.8后倒入培养瓶中，冷却看是否
凝固，如果凝固的话放入高压蒸汽灭菌锅中灭菌。（0.1Mpa 121℃ 20分钟）灭菌之前要
看灭菌锅中是否有水，如果水不够是话要加水，灭菌好了之后，关掉电源放气，当指针指到
0 Mpa时就可以打开灭菌锅的盖子，最后拿出培养瓶放好，千万不要打开瓶盖。
十．简述植物无糖组培的意义及技术要点？
无糖组培的意义： 传统的主旨植物组织培养都使用含糖的培养基，杂菌很容易侵入培养容
器并在培养基中繁殖造成污染，是造成组织培养的一大障碍。为了防止杂菌的侵入，在组织
培养中通常将培养容器完全密闭，这种方式使植物生长相对缓慢，且易出现形态及生理的异
常，同时也大大提高人工费用和生产成本。而无糖组培解决了这些问题。无糖组培在培养基
中不加入糖，只是通过提高培养空间的光照度，二氧化碳的浓度，温度和湿度，以及气流交
换速度等来增强组织培养植物的光合速率，从而促进植物的增殖，生长和发育。但是要求的
环境控制设备高。
无糖组培的技术要点：
外植体的选择：带有芽或侧芽、叶或根的外植体。要进行光合作用制造能量供自己生长。
环境的控制：
提高培养空间的光照度 、二氧化碳的浓度、温度和湿度以及气流交换速度。
《植物组织培养技术》课程
实验实训教学大纲
(2004级食用菌与蔬菜专业适用)
生物工程与农业经济系
濮阳职业技术学院
本大纲是根据2004级三年制食用菌与蔬菜专业教学计划而制订的。 一、课程性质和任务
植物组织培养技术实验实训课程是食用菌与蔬菜专业专业的主要专业基础课程之一。
植物组织培养是在无菌条件下，利用人工培养基对植物的器官、组织、细胞和原生质体进行培养的技术，是现代生物技术的核心技术之一。在植物的优良品种快速繁殖，脱毒苗木生产、缩短育种进程、种质资源保存等方面具有其它技术无法比拟的优势。
植物组培实验实训课程的教学任务在于使学生掌握组织培养的基本操作技能和技巧，为进一步开展组培实训及从事组织培养工作奠定基础。 为适应高职高专教育改革的要求、突出高职高专教育的特点，适应本地农村产业结构调整的需要，本大纲以2003年的教学大纲为蓝本，在教学内容上进行了调整。
2、本课程教学的基本内容：
本课程是一门理论性、技术性和实践性强的的课程，通过本课程的学习，要求学生掌握植物组织培养基础知识、基本理论和基本技术。重点是植物的快速繁殖技术和组培苗工厂化生产技术。并紧紧围绕培养高等应用型技术人才，以强化技术应用能力培养为主线，着眼于培养学生应职岗位综合能力和创新精神，提高学生实践动手能力、科学实验能力、技术推广与市场开拓能力和组培苗工厂化生产经营与组织管理能力。 3、内容安排与学时分配
本大纲将教学内容分为实验教学、实训教学两个模块。实验教学结合理论讲授，在第三学期开设，共22学时。实训教学在第三、四学期开设，每学期为期一周。具体教学内容和学时分配见下表：
（一）、实验教学时数分配表
（二）、实训教学安排
4、考核办法
根据学生的实验实训操作、实验报告记载情况及结果来衡量学生的成绩，占总成绩的30%。
5、执行本大纲时应注意的事项
1)、 注意对实验原理的讲解，真正使学生掌握实验的原理。
2)、 实验过程要认真设计，精讲多练，注意关鍵技术环节的把握。 3)、 做好演示实验，防止学生实验的盲目性。
4)、 将实验作为实训的一种形式，加强学生动手能力的培养，分组协作
完成实验内容。
5)、 加强过程考核，注重思维能力、分析解决问题能力的培养。
《植物组织培养技术》实验实训内容
一、实验内容
实训一、参观植物组织培养实验室及实习基地
目的要求：
使学生掌握如何组建植物组织培养实验室和育苗温室，掌握组织培养实验室的规划与布局、常用仪器设备的使用方法；基本掌握组织培养常用的实验仪器设备的构造。 教学内容：
组织培养实验室的规划与布局；分析天平的使用；蒸馏水器的使用；高压灭菌锅的使用方法；操净工作台的正确使用；磁力搅拌器、PH计的使用。
实训二、植物组织培养实验室、器皿的洗涤与灭菌
通过实验，培养学生良好的卫生习惯、树立组织培养的无菌意识；掌握组织培养实验室器皿的洗涤与灭菌方法。 教学内容
1）地涤面、墙壁和工作台的灭菌 2）无菌室和培养室的灭菌 3）培养器皿的洗与灭菌
实训三、MS培养基母液的配制与保存
通过MS培养基母液的配制与保存，掌握配制与保存培养基母液的基本技能。 教学内容
1、母液的配制
（1）大量元素母液的配制(母液ABCD) （2）微量元素母液的配制(母液B)液。 （3）铁盐母液的配制(母液C) （4）有机物母液的配制(母液D) （5）植物生长调节物质母液的配制 2、母液的保存
（1）装瓶；（2）储藏
实验四、MS培养技的配制
1.掌握分析天平、搅拌器、高压灭菌锅等各种常规仪器正确使用使用方法。
2.熟练掌握母液移取的操作技术，培养学生实际动手操作的能力 3.熟练掌握扎瓶口的操作技术。
1. 各种母液的移取、混合。 2. 定容
3. 培养基的熬制 4. 培养基的分装 5. 培养瓶口的捆扎 6. 培养基的灭菌
实验五、 接种训练
目的要求：
掌握接种操作方法；基本掌握外植体的采集，处理方法。 教学内容：
外植体的采集；外植体的处理与灭菌；接种操作方法。
实验六、移栽驯化
目的要求：
掌握组培苗移栽驯化的方法与技术；基本掌握基质的配制方法。 教学内容：
基质的配制；消毒；出瓶、冲洗培养基；移栽；驯化。
实验七、茎段的培养
目的要求：
掌握茎段培养的方法；基本掌握茎段取材和处理方法。 教学内容：
培养基制作；茎段外植体的采集与处理；消毒；接种。
实验八、微茎尖剥离训练
目的要求：
掌握微茎尖剥离的方法与技巧；基本掌握外植体采集与预处理方法。 教学内容：
外植体的采集；预处理；解剖镜下剥离微茎尖。
实验九、花药的培养
目的要求：
掌握花药的分离与接种操作技术；基本掌握植物花药培养外置体的选择与处理方法。
教学内容：
培养基的制作；外植体的采集与预处理；花药分离与接种。
实验十、非洲菊的组织培养
目的要求：
掌握非洲菊的组织培养方法；基本掌握外植体的采集与预处理方法。 教学内容：
培养基的制作；外植体的采集与预处理；外植体的消毒与接种。
实验十一、蝴蝶兰的组织培养
目的要求：
掌握蝴蝶兰的组织培养方法；基本掌握外植体的采集与预处理方法。 教学内容：
外植体的采集；培养基的制作；外植体的消毒与接种。
实验十二、草莓微茎尖培养
目的要求：
掌握草莓无毒培养的操作方法；基本掌握外植体的采集与预处理方法。 教学内容：
外植体的采集与预处理；培养基的制作；微茎尖的剥制与接种方法。
实验十三、马铃薯微茎尖培养
目的要求：
掌握马铃薯无毒培养的方法；基本掌握外植体的采集与预处理方法。 教学内容：
培养基的制作；外植体的采集与预处理；微茎尖的剥制与接种方法。
二、实训教学内容
实训项目一、马铃薯的脱毒苗培养
1、 学习掌握马铃薯脱毒的原理及快速繁育的生产规程 2、 掌握分离茎段的无菌操作转接技术 3、 掌握无根苗的生根培养技术。 4、 掌握组培苗的驯化移栽技术 5、 了解种薯的播种于生产管理方法。 教学内容：
1、无菌条件的建立
2、培养基的配制、分装、灭菌
3、无毒苗的扩繁接种、培养及其观察 4、试管苗的驯化与移栽
5、种薯的播种、生产管理、采收与贮藏
实训项目二、转基因杨树的组织培养
1、 了解杨树快速繁育的生产规程 2、 掌握分离茎段的无菌操作转接技术 3、 掌握无根苗的生根培养技术。 4、 掌握组培苗的驯化移栽技术 5、 了解杨树生产管理规程。
教学内容：
1、无菌条件的建立
2、培养基的配制、分装、灭菌
3、转基因苗的扩繁接种、培养及其观察 4、试管苗的驯化与移栽 5、转基因种苗的生产管理。
实训项目三、非洲菊的组织培养
1、 掌握非洲菊茎段的无菌操作转接技术 2、 重点掌握非洲菊无根苗的生根培养技术。 3、 重点掌握非洲菊组培苗的驯化移栽技术 4、 掌握非洲菊大棚栽培的生产管理技术。 教学内容
1、无菌条件的建立
2、培养基的配制、分装、灭菌
3、组培苗的扩繁接种、培养及其观察 4、试管苗的驯化与移栽
5、组培苗的工厂化管理与大棚栽培
实训项目四、蝴蝶兰的组织培养
1、 掌握蝴蝶兰茎段的无菌操作转接技术 2、 重点掌握蝴蝶兰无根苗的生根培养技术。 3、 重点掌握蝴蝶兰组培苗的驯化移栽技术 4、掌握蝴蝶兰温室栽培的生产管理技术 教学内容
1、无菌条件的建立
2、蝴蝶兰培养基的配制、分装、灭菌
3、蝴蝶兰试管苗的扩繁接种、培养及其观察 4、蝴蝶兰试管苗的驯化与移栽
5、蝴蝶兰组培苗的温室栽培与管理。
三、实践实训教学考核方案
（一） 培养基的配制技术
1、母液的配制：
分析天平操作熟练；称量准确；溶剂选择得当；定容顺序合理、准确；无沉淀。以上满分100分，每项有误减20分。
2、移液、定容：
定性：一次性吸取，液体不能进到吸气球里；数量准确；移出时不滴不漏，桌面不湿；移进时吹净为度；仪器完好；以上满分20分，每项有误减4分。
定量：以完成八种母液需3min定为80分，每超过10秒减5分，每少用10秒加5分。将以上定性和定量分数相加，为本项总分数。 要求：8种母液依次移取，并要记住各母液名称及移取量。
3、培养基的熬制与分装：
蔗糖和琼脂称量准确，熬煮火适中，搅拌及时，琼脂充分熔化；定容准确；PH值调节正确；分装迅速，均匀且不沾瓶口，台面洁净；具协调组织能力；以上满分100分，每项有误减20分
4、扎瓶口：
定性：薄膜盖口居中，不偏不斜；扎线松紧合适；每项10分。
定量：以完成10瓶需60秒定为80 分，每多（少）用5秒减（加）5分或每少完成一个减5分。
熟练灭菌锅使用规程(60分)，装锅松紧适当(20分)，灭菌彻底(20分)。
总评：母液的配制×20%+移液、定容×20%+培养基的熬制与分装×20%+扎瓶口×20%+灭菌×20%
（二）植物器官培养的操作
1、外植体的选择：
选择健壮、无病外植体；包括适宜的选材时期、部位。(5分) 2、 外植体的预处理：
包括材料整理、冲洗要到位。(5分)
3、 外植体消毒：
包括消毒剂选择，消毒顺序、时间。达到消毒彻底((2.5分)，操作熟练(2.5分)，顺序合理(2.5分)，时间准确(2.5分)。 4、接种：
包括接种速度(10分)、操作方法、接种质量。达到无菌操作规范(以污染率为准) (5分)，动作熟练(2.5分)，切割准确(2.5分)，分布合理(2.5分)，台面洁净(2.5分)。器官培养接种速度具体评分标准见附表1。 附表1
接种速度考核标准（以接5瓶所用时间计算）
环境调控（包括温度、光照、湿度等）适宜，现象观察细(5分)，分析准确(5分)，处理及时(5分)；组培记录完整、及时、准确(5分)。
6、驯化移栽：
包括驯化基质选配，炼苗，出瓶清洗，移栽，环境调控。要求炼苗适度，培养基清洗干净，无损伤(5分)，基质选配合理(5分)，移栽要求整齐，深浅、松紧适宜，根系伸展(5分)，环境调控及时、有效(5分)，操作熟练(5分)。
7、具有较强的组织协调能力(10分)
总评：上述各项分值总和相加为总考核成绩。
范文八：1年时间内用最低成本生产出1500万株可供
造林种植的按树苗
摘要：某地一年四季均可种植按树，假如按树通过芽体增殖途径扩繁，每30
天的繁殖系（倍）数为5，组培生根需要10天，移栽炼苗需20天，组培继代增殖、生根每次的污染率为5%，炼苗成活率为95%，假设现在是1月1日，实验室现有50000株无根苗（丛生芽）。要在1年时间内用最低成本生产出1500万株可供造林种植的按树苗，如何设计安排每个月的生产方案？包括增殖、生根及两者比例等，必须使人员、设备、场地的利用率达到最大化。 关键词：1500万株 生根
在植物组织培养过程中，根据所培养的植物种类、生产规模，选择合适的器材、设施是十分必要的，只有这样才能确保整个操作过程的顺利进行。在器材、设施的选择上，不要贪大求洋，应该在其是否实用上多下功夫。在研究型的组织培养操作中，往往对器材、设施的要求较高；而在生产型的组织培养中，则对器材、设施的要求却较为粗放，因此管理者必须根据实际情况来进行培养器材、设施的遴选。
在植物组织培养的过程中，从外植体的采收到试管苗的定植都必须要在特定的环境中进行，例如，培养基的配制要在专用的器材、设施中进行；外植体的接种要在专用的器材、设施中进行。应该根据植物组织培养不同阶段的需要，选择不同的器材、设施。只有从降低投入、提高工效、节约劳力等诸方面加以考虑，才能降低培养成本、提高培养效率。
在植物组织培养过程中，所使用的器材种类较多，但它们通常可以分为通用器具、盛具、计量器械、灭菌器械、接种器械、培养器械等几种类型。在使用这些容器、设备时，必须要了解它们的基本用途，并学会它们的基本用法。例如，不能给容量瓶加热；必须用磨砂玻璃灯罩来熄灭正在燃烧的酒精灯；应该定期更换超净工作如的无菌滤膜等等。详细操作可参考具体设备、容器的使用说明。
在1500万株组培苗工厂化生产设计中，厂房设置的基本原则要立足于科学、高效、经济和实用。通常其组成必须要有准备间、无菌操作间和培养间。
1.具体方案
1.1续代、生根、炼苗方案
表1：X表示从三月份开始用X万株进行续代，根据要在1年时间内用最低成本生产出1500万株可供造林种植的按树苗，得：(112.8123－X)×95%?＋［X×5×(1－5%)?－X]×95%×9=1500
解得X=47.999207 联系实际取X=48
具体方案如表1、2
表2. 1.2人数的分配和仪器
按一人每三秒接一株，每个月30天，每人每天工作8小时，每瓶10株来算，在接种数最多的月份时需接种399万。
一人一个月接种量=30天×8时×60分/时×60分/秒÷3秒/株=288000株 3990000÷（30天×8时×60分/时×60分/秒×2人÷3秒/株）=6.9270833台≈7台
所以购买7台双人双面超净工作台即可。 人数分配如下表：
月 月 月 月 月 月 月 月 月 月 月 月
接种 续代 生根 炼苗
培养瓶：组培生根需要10天，因此培养瓶的使用为10天一个周期，又因为最大量使用时是10株一瓶的，所以最多时只需要：276万×1/3 ×1/10=9.2万瓶，考虑意外情况，所以要准备培养瓶9.5万个。
培养架：每层培养架长（1.45m）放17 瓶，宽（0.6m）放7瓶，每架培养架为5层（最低一层离地高0.1m，其他每层间隔0.3m，培养架高1.6m），每层重叠放2瓶，那么每架培养架可放置培养瓶数为：17瓶×7瓶×5层/架×2瓶=1190瓶，则每批需培养架=92000万瓶÷ 1190瓶/架=77.3109架≈78架
培养室面积：摆放78架培养架的培养室面积=（培养架长1.45m+间距0.6m）×（培养架宽0.6m+间距0.6m）×78架+缓冲间面积（2间×2.5平方/间）=196.88㎡ ≈ 197㎡
接种室：每个接种室放两台双人双面超净工作台，则需要7÷2=3.5 间≈4间 每间12㎡（长4m,宽3m） 总面积=12㎡×4=48㎡
灭菌室：大型高压灭菌锅 1台
则灭菌室面积应=7m×3m=21㎡
全自动顶淋式单锅A（直热间冷式）技术参数
2 工厂布局设计 2.1固定实验设备：
双人双面超净工作台
全自动洗瓶机
2台 半自动培养基分装器
9.5万瓶 大型高压灭菌锅
1台 其他小型器具，如镊子，解剖刀等若干 培养基配方材料、各种药物若干
安装洗瓶机器， 配备数个塑料箱盛装瓶子，将瓶放入箱内时，应倒立，这样可使瓶子自然干燥。
2.3培养基配制及灭菌室
① 大型灭菌锅1台
② 去离子水发生器1～2台。
③ 干燥箱1台，用于器皿或急需用具的干热灭菌。
④ 大型工作台1～2张，用于培养基分装、包扎等。
⑤ 玻璃柜1个，用于放置药品等。
⑥ 试剂瓶、具刻度移液管、皮下注射器、量筒、搪瓷量杯、容量瓶、各式塑料瓶或塑料桶等易损品数个，更重要的是配备大量充足的培养瓶。 2.4 检测
① PCR仪：可用于真菌和细菌性病原菌的检测和部分病毒病的检测。
② 酶标仪：通过血清免疫技术(ELISA)进行主要病毒病的检测。
③ 双目显微镜、解剖镜：用于植物组织培养材料的形态发育及细胞观察。
④ 凹穴载玻片：用于细胞悬浮培养。
⑤ 载玻片和盖玻片：用于制作细胞和组织的显微制片。
⑥ 光照培养箱；用于不同种类植物培养方法或培养条件的研究。
⑦ 冰箱：用于贮存化学药品，培养基母液和植物材料等。
⑧ 低温冰箱：用于长期贮存培养基储备液，某些酶和椰子汁等。
⑨ 称量仪器：包括感量为1／10000的电子天平，感量为1／10的普通托盘天平，称量为1～5kg的台秤等，用于药品的称量配制和植物组织生长量的测定。
⑩ 水质及培养基检测仪器：包括pH酸度计、电导率仪或Ec值测定仪。
细菌滤膜及其支座：用于对溶液进行过滤灭菌。 2.5 接种室
这是组培工厂的最核心和关键部分，是进行无菌操作的场所，如植物材料的消毒接种，无菌材料的继代，丛生苗的增殖或切割，嫩茎插植生根等。它也关系到污染率这项最重要的成本指标的高低，直接影响组培工厂的工作效率及经济效益。无菌操作室原则上宜小不宜大，要有缓冲间，以便进人无菌室前在此洗手、换衣、换鞋、预处理材料等。无菌室的地板和四周墙壁应尽可能光洁，不易积染灰尘，易于采取各种清洁和消毒措施。无菌室内要吊装紫外灭菌灯，用于经常照射灭菌。要安装空调机，保持室温在23～25℃，原则上无菌室的门窗应紧闭，保持与外界相对隔绝。无菌操作室内需要的用具如下。
1. 超净工作台：用于进行无菌操作。
2. 室内小推车：用于运送培养物、培养基和各种器皿用具。
3. 酒精灯：用于灼烧各种金属用具。
4. 手持喷雾器：用于在超净工作台内或对其他物品喷洒酒精进行消毒。
5. 带盖螺口玻璃瓶：用于盛装无菌水，对植物材料进行表面消毒。
6. 大的钝头镊子：用于进行接种和继代、生根等操作。
7. 细解剖针；用于植物材料的解剖。
8. 解剖刀：用于切割植物材料。
2.6 培养室
培养室要讲究保温隔热。专为组织培养设计的新建筑，为了减少能源消耗，培养室应尽量利用自然光照，最大限度地增加采光面积。除必要的承重结构外，全部安装落地式双层大玻璃窗，并在窗外设置防止直射的半透明瓦楞板，它的宽度、数目应按当地的纬度、日照强度、日照时数等气象因子适当考虑。
培养室的四壁可选白色或浅米黄色防霉漆、涂料等涂层，地面也应选浅色建材，最好是白水泥、白水磨石或同样的磨石砌块、瓷砖等，顶部为白色，总之各处都应增强反光，以提 高室内的光亮度和易于清扫。我国大多数地区属大陆性气候，夏热冬冷，而培养室要求常年保持[25士(1～2)]℃，因此房屋构造上要做到保温、隔热、防寒性能良好，做到冬暖夏凉。温度调节常借助空调机，使高温季节降温，低温季节升温。在华南地区，冬季由辅助照明灯产生的热量即可很容易地维持室温在2 5℃左右。房屋结构及隔热性能良好， 无论降温或升温都可有效地节省能源，并易于保持温度的稳定。
培养室应设计能有效通风的窗户，定期或需要时加强通风散热，如夏初或秋末，一天内温度变化很大，即使夏天，有时夜温也不适宜．必要时都可利用通风来调节温度，这样可节省一些降温用电。方法是只要在室内地板稍高处设置进风
气窗，在气窗的对侧，近天花板处 设置排风窗，亦可安装小功率的排风扇，利用自然空气来调节室内的温度。进风气窗可用两层以上的纱布简单地滤尘。 2.7
炼苗基地 温室大棚10个 工厂布局设计图：
5 参考文献
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马铁山、郝改莲、张建军. 马铃薯脱毒微型种薯工厂化繁育技术 . 河南濮阳.
袁正仿、张苏锋、王广铭、远凌威. 马铃薯脱毒种薯的工厂化生产研究. 河南 信阳 2003. [4]
王季春、唐道彬. 马铃薯脱毒种薯生产技术操作规程要点 . 西南农业大学农学系.
徐洁兰、管彩虹. 花卉组培苗产业化及育苗成本分析. 广州城市职业学院,广东广州.
李永峰. 工厂化育苗在林木种苗生产中的应用. 山西省林业厅实验苗圃, 山西太原.
范文九：MS培养基是目前使用最普遍的培养基。其具有较高的无机盐浓度，能够保证组织生长所需的矿质营养还能加速愈伤组织的生长。由于配方中的离子浓度高，在配制、贮存和消毒等过程中，即使有些成分略有出入，也不会影响离子间的平衡。MS固体培养基可用于诱导愈伤组织，也可用于胚、茎段、茎尖及花药的培养，其液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显的成功。MS培养基的无机养分的数量和比例比较合适，足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。因此，一般情况下，不用再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分。和其它培养基的基本成分相比，MS培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量高，这是它的显著特点。
1．下列有关花药离体培养，说法错误的是( A )
A．对材料的选择最常用的方法是焙花青—铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色
醋酸洋红法
B．材料消毒时需先用酒精浸泡，然后用氯化汞或次氯酸钙溶液浸泡，最后用无菌水冲洗 C．接种花药后一段时间内不需要光照，但幼小植株形成后需要光照
D．若接种的花药长出愈伤组织或形成胚状体后，要适时转换培养基，以便进一步分化成再生植株。
2．MS培养基和培养微生物所配制的培养基的主要区别是( A ) A．MS培养基一般含植物激素，微生物培养基不含植物激素 B．MS培养基需要氨基酸，微生物培养基不含各种氨基酸 C．MS培养基需要碳源，微生物培养基不含碳源
D．MS培养基含维生素B1和维生素B2，而微生物培养基不含
3．(2010年临沂模拟)菊花的花粉经组织培养可发育成一株幼苗，这一过程不涉及下列哪一项( D )
A．有丝分裂、细胞分化、组织器官的形成 B．呼吸作用、光合作用、相关激素的调控 C．DNA的复制、转录、蛋白质的生物合成 D．等位基因的分离、非等位基因的自由组合
4．某种花卉感染了植物病毒，叶子呈现疱状，欲培养出无病毒的后代，应采取的方法是( C )
A．用种子培养后代
B．用无明显症状部分的枝扦插 C．用茎尖进行组织培养诱导出植株
D．用叶表皮细胞进行组织培养，诱导出植株
5．如下图所示，图Ⅰ为植物组织培养流程图，图Ⅱ为植物组织培养过程的部分示意图，请据图回答：
(1)植物组织培养依据的原理是____________植物细胞的全能性_______________。 (2)图Ⅰ中外植体是从植物____器官、组织、细胞、原生质体____分离出来的。
(3)图Ⅰ中的②和图ⅡA中培养基上的培养物都是由无特定形态与功能的细胞组成，称为____愈伤组织____。
(4)图Ⅱ中D培养物已经形成幼体。请根据植物组织培养过程对图Ⅱ重新排序：
B→A→D→C
【答案】 (1)植物细胞的全能性 (2)器官、组织、细胞、原生质体 (3)愈伤组织 (4)B→A→D→C
6．利用植物组织培养的方法可快速、大量地繁殖植物。在培养过程中，取该植物的花芽并将其分别培养在含有不同比例的吲哚乙酸和细胞分裂素的培养基中，花芽的生长状况如下表所示。
生长素=吲哚乙酸！！！
请据表回答下列问题：
(1)在此过程中能实现脱分化的花芽是____BCD____组。从实验结果可以看出，能诱导新芽形成的条件是_____________细胞分裂素浓度大于吲哚乙酸浓度_____________
________________________________________________________________________。 (2)上述实验结果表明，在植物组织培养过程中，诱导芽和根形成的关键是_________________________________培养基中细胞分裂素含量与生长素含量之间的比例(或培养基中细胞分裂素与生长素的浓度比)__________________________。
在生产实践中，欲快速、大量获得此植物的花芽，可选用___D___组的培养基进行大量生产。
7．叶肉细胞原生质体的分离和培养的主要过程可以用下图解简单表示：
(1)图解中“酶解”所用的酶应该包括______纤维素酶、果胶酶_______。
(2)图解中“原生质体”的结构由细胞的______细胞膜、细胞质、细胞核______三部分组成。 (3)“DPD培养基”的成分中，除了糖类、无机盐等各种营养成分外，还必须含有_植物激素_才能获得愈伤组织。
(4)获得原生质体后，需要对其活力进行检查，下列哪种实验最适合？___B____。 A．观察原生质体的结构是否完整 B．观察细胞质流动 C．观察细胞的有丝分裂 D．观察叶绿体数目的多少
(5)一般在培养基上培养24～48小时后，大部分原生质体已再生出细胞壁。可以取样，利用25%的蔗糖溶液以及其他用具，通过____植物细胞的质壁分离与复原_____实验来鉴别细胞壁是否已经再生。
8．(2010年南京模拟)通过植物组织培养技术可以快速繁殖、生产药物及培育无病毒的植物等。据图甲、表乙回答问题：
图甲： 植物组织培养过程
错误!①,愈伤组织②,胚状体培养,植物体
(1)离体的植物器官、组织或细胞能够被培养成新的植物体的原因是_____植物细胞具有全
能性______。
(2)用植物组织培养方法诱导离体的植物组织形成具有生根发
芽能力的胚状体结构，若包上人造种皮，制成人工种子，可能解决有些作物品种繁殖能力差、结子困难或发芽率低等问题。胚状体来源于离体的植物体细胞，其形成过程中要经过的生理变化大体上是图甲中[
]____脱分化____和[
]_____再分化___过程，在此过程中被培养的细胞始终受____植物激素____的调节([
]内填序号)。
(3)应用植物组织培养技术培养茎尖或根尖组织可获得无病毒植株，其原因是_________茎尖和根尖很少被病毒感染，甚至无病毒_____。
(4)从表乙的实验结果可看出：吲哚乙酸和细胞分裂素是实验中的两种重要物质。其中，新芽形成必需的条件是___________细胞分裂素的浓度大于吲哚乙酸的浓度_____________；而在培养形成完整新个体的过程中，对它们的调控关键是_______适当调控好不同培养期培养基中细胞分裂素与吲哚乙酸的浓度和它们的比例_____________。
答案及解析
1、【解析】 确定花粉发育的时期最常用的方法是醋酸洋红法，有些植物细胞核不易着色时，需采用焙花青—铬矾法。
【答案】 A 2、【解析】 MS培养基是用于植物组织培养的培养基，其中一般含有植物激素，而培养微生物的培养基中不含植物激素。另外，由于培养的微生物一般都是异养微生物，所以在它们的培养基中一般含有碳源、氮源和生长因子。
3、【答案】 A 4、【答案】 D 5、【答案】 C 6、【答案】 (1)BCD 细胞分裂素浓度大于生长素浓度 (2)培养基中细胞分裂素含量与生长素含量之间的比例(或培养基中细胞分裂素与生长素的浓度比) D
7、【解析】 (1)从叶片获取叶肉细胞的原生质体，需去除细胞壁。细胞壁的主要成分是纤维素和果胶。(2)植物细胞去除细胞壁构成原生质体，故原生质体包括细胞膜、细胞质和细胞核三部分。(3)从原生质体培养成愈伤组织，除各种营养成分外，还必须加入一定比例的植物激素，如生长素和细胞分裂素。(4)对原生质体的活力进行检查，可用观察细胞质流动的实验，流动性越强，说明原生质体的活力越大。(5)用质壁分离与复原的实验，可以检测是否产生了细胞壁。能发生质壁分离及复原，表明已经产生了细胞壁。
【答案】 (1)纤维素酶、果胶酶 (2)细胞膜、细胞质、细胞核 (3)植物激素 (4)B (5)植物细胞的质壁分离与复原
8、【答案】 (1)植物细胞具有全能性 (2)[①]脱分化 [②]再分化 植物激素
(3)植物的茎尖或根尖很少被病毒感染，甚至无病毒
(4)细胞分裂素的浓度大于吲哚乙酸的浓度 适当调控好不同培养期培养基中细胞分裂素与吲哚乙酸的浓度和它们的比例
范文十：正阳一高2012级高二生物同步测题（22）
1.下图表示一定条件下将胡萝卜的离体组织培育形成试管苗的过程。有关叙述正确的是
A.将离体组织接种到培养基中不需无菌条件 B.图中①②过程分别表示脱分化和去分化 C.利用此过程获得的试管苗均为纯合子 D.若是菊花组织培养则①过程需要光照
2.MS培养基和培养微生物所配制的培养基的主要区别是
A.MS培养基一般含植物激素，微生物培养基不含植物激素 B.MS培养基需要氨基酸，微生物培养基不含各种氨基酸 C.MS培养基需要碳源，微生物培养基不含碳源
D.MS培养基含维生素B1和维生素B2，而微生物培养基不含 3.组织培养出来的植物一般很少有植物病毒危害，其原因在于
A.在组织培养过程中经过了脱分化和再分化，进行的是快速分裂和分化 B.人工配制的培养基上，植物病毒根本无法生存
C.进行组织培养用的材料是刚分裂产生的茎尖、根尖或芽尖 D.接种组织培养之前进行了严格的消毒处理
4.植物组织培养是现在应用最广泛的一项生物技术。其过程为离体的植物组织经脱分化形成愈伤组织，再分化形成具有根、芽的胚状体，栽培形成成熟的植物体，下列相关叙述中错误的是
A.在整个植物组织培养过程中，细胞增殖的方式都是有丝分裂 B.脱分化形成的愈伤组织具有全能性和分裂能力
C.一定的营养物质、激素、空气和光是再分化的必要条件 D.脱分化形成的愈伤组织再包上人造种皮可制成人工种子 5.下列说法错误的是
A.通过植物组织培养得到的试管苗，是植物细胞具有全能性的有力证据
B.在探究果胶酶最适用量实验中，虽然实验的变量发生了变化，但通过设置梯度来确定最适值的思想方法是不变的
C.应用选择培养基的主要原理是显现某微生物的特征，以区别于其他微生物 D.含伊红—美蓝试剂的培养基可以用来鉴别牛奶中的大肠杆菌 6.下列哪项符合菊花组织培养的基本步骤
A.制备MS培养基→外植体消毒→接种→培养→移栽→栽培 B.制备MS培养基→外植体消毒→接种→培养→栽培→移栽 C.制备MS培养基→外植体消毒→接种→栽培→培养→移栽 D.制备MS培养基→外植体消毒→接种→移栽→培养→栽培 7.在制备MS固体培养基过程中有误的是
A.在使用提前配制的母液时，可直接用移液管从母液中取
B.配制母液时，无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍 C.配制培养基时，琼脂要及早加热熔化
D.MS培养基的pH要求不太严格．可控制在5～7之间
8.植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞分化、脱分化和再分化的关键性因素。在植物组织培养过程中，如何使用这两种激素更有利于愈伤组织的形成
A.长素的用量比细胞分裂素用量的比值高时
B.生长素的用量比细胞分裂素用量的比值低时 C.生长素的用量比细胞分裂素用量的比值适中时
D.生长素的用量比细胞分裂素用量的比值相等时
9.植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性因素。在植物组织培养过程中，如何使用这两种激素使分化频率提高
A.先使用生长素，后使用细胞分裂素
B.先使用细胞分裂素，后使用生长素 C.同时使用
D.都不使用 10.下列关于植物组织培养中植物激素使用说法，不正确的是
A.植物组织培养中的关键激素是生长素和细胞分裂素
B.先使用生长素，后使用细胞分裂素，有利于细胞分裂和分化 C.先使用细胞分裂素，后使用生长素，细胞既分裂也分化
D.同时使用生长素和细胞分裂素时，两者用量的比例影响植物细胞的发育方向 11.下列关于植物组织培养的叙述中，错误的是
A.培养基中添加的蔗糖是植物组织重要的能源物质
B.培养基中添加的生长素和细胞分裂素是影响细胞分裂、分化的重要激素 C.离体器官或组织的细胞都必须通过脱分化才能形成愈伤组织
D.取自同一株绿色开花植物不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织基因型相同 12.在月季花药培养中材料消毒主要有以下几步，顺序正确的是
①将花蕾在酒精中浸泡约30s
②放入氯化汞液中2～4min
③无菌水清洗，然后用吸水纸吸干花蕾表面的水分
④用无菌水冲洗3～5次
A．①②③④
B．①③②④
C．③①④②
D．②③①④
13.某组织培养实验室的愈伤组织被真菌严重污染，为查找污染原因设计了4个实验，实验条件除图示外共他均相同。下列各图表示实验结果，据图可得出的初步结论是
A．污染主要是培养基灭菌时间短造成的
B．污染主要来源于组织培养所用的离体组织 C．调节培养基pH能解决污染问题
D．调节培养温度能解决污染问题
14.某生物兴趣小组用芦荟新鲜茎的一部分作为材料进行组织培养，待愈伤组织能正常形成且继续长大，正常根和芽却迟迟不能形成；你认为导致该情况出现的最可能的原因是
A．葡萄糖、氨基酸等有机营养供应不足
B．培养环境光照、温度、pH或氧气浓度不适宜 C．生长素和细胞分裂素比例不协调
D．无菌条件没有控制好
15.植物激素不同对植物组织培养的影响不同。下列与之相关的内容正确的是
A．不同植物及同一植物的不同生理状况诱导成功率都相同 B．不同植物及同一植物的不同生理状况诱导成功率都不相同
C．不同植物的诱导成功率不同，同一植物的不同生理状况诱导成功率相同 D．不同植物的诱导成功率相同，同一植物的不同生理状况诱导成功率不同
16.如图表示四倍体兰花叶片通过植物组织培养成植株的过程。下列相关叙述中，正确的是
四倍体兰花叶片-①→愈伤组织-②→胚状体-③→植株
A．②和③阶段发生减数分裂
B．①阶段需要生长素而③阶段仅需要细胞分裂素 C．①阶段不仅有细胞增殖且细胞分化速率很快
D．此兰花的花药离体培养所得的植株体细胞中有两个染色体组 17.关于影响花药培养的因素的说法，不正确的是
A．材料选取和消毒是花粉植株诱导成功的关键 B．选择盛开的或略微开放的花作实验材料
C．亲本植株的生长条件、材料的低温预处理、接种密度都对实验有影响 D．应选择完全未开放的花蕾作实验材料
18．菊花是一种良好的观赏植物，并具有一定的药用价值，科研人员通过组织培养技术可实现某些珍稀菊花品种的快速繁殖。
(l)进行组织培养所依据的原理是＿＿＿＿＿＿＿＿。配制MS固体培养基的母液时，无机物中的大量元素应浓缩＿＿＿倍。配制好的培养基在分装后需进行＿＿＿＿＿处理。
(2)接种前，外植体的消毒一般要用到70%的酒精和＿＿＿＿＿＿两种药剂。由外植体形成愈伤组织的过程，称为植物细胞的＿＿＿＿。
(3)在研究植物生长调节剂对丛芽增殖的影响时，研究人员设计了相关实验，实验结果如下表(6-BA属于细胞分裂素类似物、NAA
①据实验结果分析，6-BA的浓度在＿＿＿＿＿＿mg/L之间时，丛芽的增殖倍数随之相应增加；当6-BA浓度一定时，NAA浓度越＿＿＿（低／高），丛芽的增殖效果越明显。
②若要进一步诱导丛芽生根，新配制的培养基与诱导丛芽增殖的培养基相此，在成分上的主要区别是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。 19．胡萝卜营养价值高，被国内外营养专家誉为“小人参”，其中含有丰富的天然β–胡萝卜素。由于天然β–胡萝卜素可防癌、抗癌、抗衰老、并可以清除体内的氧自由基、减少突变细胞的发生，因此胡萝卜及其制品越来越受到现代人们的青睐。请回答有关问题：
（1）选取胡萝卜韧皮部细胞进行植物组织培养，其操作步骤是①_______；②_______；③接种；④培养；⑤移栽；⑥栽培。
（2）为了更容易地榨取胡萝卜汁，提高澄清度，需要加入_______酶，该酶通常从真菌细胞中提取，筛选真菌细胞时常用的接种方法有_______，从功能看，所用培养基为_______培养基。 （3）从真菌细胞中提取酶时．常常采用_______法将不同分子量的酶进行分离。 （4）从胡萝卜中提取胡萝卜素常用萃取的方法，原因是_______。
（5）家庭酿制米酒的操作过程：在煮熟冷却的米饭中加少许水和一定量的酵母菌菌种混匀，在米饭中挖一洞后将容器置于28℃环境中保温一段时间即成。在米饭中间挖一个洞的目的是增加的______含量，以有利于开始时酵母菌数量的增加。
20．如图表示菊花的嫩枝和月季的花药的离体培养过程，请回答下列有关问题。
(1)植物组织培养常用的培养基名称为____________，从物理性质来分为________培养基。
(2)菊花组织培养中选取生长旺盛的嫩枝的原因是____________________________________________。 对月季来说，花粉发育的过程中适宜花粉培养的时期是________期，为确定花粉是否处于该时期，最常用的镜检方法是________。
(3)两种植物组织培养都需要接种，接种前为确定培养基是否灭菌彻底，检测的方法是___________________ _____________________________________________， 植物组织培养无菌操作应注 ____________________ _____________________________________(答两点)。 (4)月季的花药培养与菊花的嫩枝组织培养不同，从植物产生的途径来说，花粉植株产生的途径除了图中所示外，还可以通过________阶段发育而来，这两种发
育途径的差别主要取决于____________________________________________________________________。 21．植物的花药培养在育种上有特殊的意义。植物组织培养可用于无病毒植株及细胞产物的工厂化生产等方面。请回答相关问题。
（1）诱导花粉植株能否成功及诱导成功率的高低的主要影响因素是＿＿＿＿＿和培养基的组成。利用月季的花药离体培养产生单倍体时，一般来说，在＿＿＿＿＿期花药培养的成功率最高。为了选择该期的花药，通常选择＿＿＿＿＿的花蕾。确定花粉发育时期最常用的方法有＿＿＿＿＿法，但是对于花粉细胞核不易着色的植物，需采用＿＿＿＿＿法，该法能将花粉细胞核染成＿＿＿＿＿色。
（2）若要进行兰花无病毒植株的培育，从外植体到无病毒植株试管苗，要人为控制细胞的＿＿＿＿＿＿
和＿＿＿＿＿过程。
（3）进行组织培养需配制MS培养基，在该培养基中常需要添加＿＿＿＿＿、＿＿＿＿＿ 等激素。欲利于根的分化，植物激素的用量比例应为＿＿＿＿＿ 。
（4）在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，___________的数目常常会发生变化，因此还需要对培养出来的植株进行_______________。
（5）无菌技术也是成功诱导出花粉植株的重要因素，下列各项中使用化学药剂进行消毒的是＿＿＿＿＿，采用灼烧方法进行灭菌的是＿＿＿＿＿ 。（答序号）
①培养皿 ②培养基 ③实验操作者的双手 ④三角锥形瓶 ⑤接种环 ⑥花蕾