怎么用已知引物 扩增产物 长度查出扩增片段的长度

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2016-07-24 08:45 标签： 单引物扩增
求助，长片段引物设计的问题_百度知道
求助，长片段引物设计的问题
设计多对引物的方法不计，按照一般的原则这对引物应该在&gt.5kb的一段序列.S，但是在设计过程中发现25bp以上的引物Olige给出的Tm参考值非常高我要扩增的是约4，在线等谢谢P，几乎都在80-95度。求助应该怎么办，但是引物短了特异性又很差;25bp，一对引物La-taq酶
提问者采纳
可以用NCBI的序列比较查看一下你的引物和你要扩增的基因是否有其他非特异性结合.com/nebecomm/ManualFiles/manualF-530.neb，可以尝试Phusion taq-enzyme。PCR后电泳跑胶://www.neb，如果有较多非特异性条带，我所见过的最强大的Taq酶;72°C，也要保证Tm&lt.pdf，可以切割提纯你的目标条带后再跑一次PCR，引物至少保持在12bp以上（如果你不放心，高Tm值引物很难得到预期产物）。首先:///nebecomm/ManualFiles/manualF-530。如果引物与模板有非特异性结合可能性。如果Tm始终不能低于72°C，不过我不看好实验结果其实不难，就使用72°C进行退火和延伸两个步骤，就不知道中国有没有卖，可以在PCR中适当减少退火时间（几秒钟），使Tm值一定小于72°C：宁愿特异性变差.pdf" target="_blank">http，Tm值对于PCR十分关键, <a href="http。总的原则就是。另外，PCR扩增序列长度和设计引物长度没有太多必然联系（我经常用15bp引物扩增9K+的序列也没有任何问题），缩小引物长度，没有必要那么着急
提问者评价
谢谢啦，最终还是用的二阶法设计的，特异性太差了不行毕竟片段太大了。谢谢啦
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出门在外也不愁如何从pcr知道目的片段的大小啊(引物,片段大小,序列) - PCR实验 - 生物秀
标题: 如何从pcr知道目的片段的大小啊(引物,片段大小,序列)
摘要: [如何从pcr知道目的片段的大小啊(引物,片段大小,序列)] 我是pcr初学者，我现在有一对引物，知道它的序列，可是不知道扩增片段大小，能不能通过引物知道片段大小啊，请知道的人告诉我，谢谢! 关键词:[片段大小 引物 序列]……
我是pcr初学者，我现在有一对引物，知道它的序列，可是不知道扩增片段大小，能不能通过引物知道片段大小啊，请知道的人告诉我，谢谢!
回复你有引物的序列，可以从PUBMED上去查下你的基因序列，然后查找与引物相配对的序列，就可以知道你目的片段的大小，建议多看点PCR知识。回复刚开始我也有这种疑问，后面自己看多了就知道了。前一阵子我自己设计了引物，P得还可以。回复你总得知道是扩什么吧。然后到NCBI上去查就知道你的模板序列，然后再根据你的引物序列分析到大小，谢谢。
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电话：021-已知道上下游引物,如何确定扩增出的长度具体点就是载脂蛋白C3,测定482位点变异,采用PCR扩增后酶切确定是否变异.现在希望知道扩增出来的片段具体是什么碱基.没有条件测序,因此希望能通过基因库里查找等办法,请给出具体步骤,想知道序列。ncbi blast我知道，但是用法好像不太正确，
点变异可以用酶切来确定么? 你的运气真是好.你是想知道长度还是序列? 序列可以在ncbi blast出来.但是你酶切怎么能知道482位的序列呢? 除非刚刚好把一个酶切位点突变没了.这个可能性太小了.http://www.ncbi.nlm.nih.gov/你把你的基因名字输进去就可以了,然后在corenucleotide里面看序列.
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我在文献里面引用了一个引物，但是文献里面没有标明所能扩增出来的目的片段长度，因此请求知道的各位友人解答一下吧，非常感谢哈。
回复www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/index.cgi在这个页面，输入引物序列，然后选择好你的物种信息。blast就好了。回复好的，非常感谢哈。
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电话：021-做实时定量PCR内参引物一般是扩增出来多大片段?
xzWU87MQ89
这是由你设计的引物决定,一般控制在200bp以下为佳.包括你要检测的目的基因,设计的片段长度也控制在200bp以内.保证扩增效率较为一致.
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