tween20的作用 20能不能生物降解

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2016-08-02 09:38 标签： 生物降解材料
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PBS-T(含0.05%Tween－20)洗涤缓冲液（液体）
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产品名称：PBS-T(含0.05%Tween－20)洗涤缓冲液（液体）
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-Tween80作用下苯并_a_芘的微生物降解研究
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3秒自动关闭窗口（请问）关于Tween-20洗涤问题。(反应物,包被) - 免疫实验 - 生物秀
标题: （请问）关于Tween-20洗涤问题。(反应物,包被)
摘要: [（请问）关于Tween-20洗涤问题。(反应物,包被)] 为什么用tween洗板时能洗去非特异接合的后面的反应物而不能洗去包被物？还有有人说Tween的浓度不能太高，而我却看到有人用0 5％的tween，安常理这个浓度不行吧？ 关键词:[反应物 包被]……
为什么用tween洗板时能洗去非特异接合的后面的反应物而不能洗去包被物？还有有人说Tween的浓度不能太高，而我却看到有人用0.5％的tween，安常理这个浓度不行吧？
回复ELISA洗涤步骤只是洗去一些杂质，而不是洗去非特异性结合物质；Tween－20的浓度一般在0.5－1%，大多用1%。回复蛋白与聚苯乙烯的憎水表面通过共价吸附，且吸附能力很强（抗体或蛋白质抗原吸附其上后仍然可以保留原来的免疫活性）。当然不会被轻松洗去，要不然也不会用于ELISA实验了。你的顾虑大可不必。Tween20 属非离子型去污剂，它对蛋白间的相互作用干扰较弱，通常在固相免疫反应中用来阻断非特异性的蛋白吸附。其一般使用浓度在0.1%-1%，这当然要权衡一下非特异性结合与特异性结合之间的比例了，若有较高的非特异性结合，则可以用高浓度的Tween20，同时会牺牲部分特异性结合作为代价。回复蛋白与聚苯乙烯的憎水表面通过共价吸附，且吸附能力很强（抗体或蛋白质抗原吸附其上后仍然可以保留原来的免疫活性）。当然不会被轻松洗去，要不然也不会用于ELISA实验了。
既然不容易洗去抗体或蛋白质抗原的这种结合，那么非特异性结合（如果是间接法测抗体中有非特异性抗体与塑料的结合）又是怎么洗去的呢？
呵呵，小弟是新手，见笑了。回复我认为Tween20使用浓度0.1%-1%是不是有点高，我在好多书上都只有0.05％，我用的也是0.05％效果也不错。回复我曾经查过有关tween-20的资料，用于洗涤时通常用的浓度是0.05%-0.1%，浓度>0.2%可以将特异性结合的也给洗掉。我使用的tween-20的浓度是0.05%，效果还不错。Toumin说“既然不容易洗去抗体或蛋白质抗原的这种结合，那么非特异性结合（如果是间接法测抗体中有非特异性抗体与塑料的结合）又是怎么洗去的呢？”在包被和后续步骤中的条件是不同的。在包被的时候pH要求在9.0-9.6之间，有利于蛋白质与固相表面的结合；而抗原抗体反应时采用的pH是7.4左右，不利于氨基的解离，不利于蛋白质与固相表面的结合。另外，在实验中有阴性对照、阳性对照来控制实验条件，如果存在你所说的这种较强的非特异性结合导致本底高，那就需要在将抗原或抗体包被到固相表面之后用或BSA或gelatin进行封闭，把固相表面上那些结合位点给封掉。回复dodogougou说得很好，按照常理我们都是这么做的。但是在某些情况下我就见过老外推荐用ph7.5的缓冲液稀释包被物，而且用到是0.5％的tween（我也觉得相当的高的浓度）并且洗涤次数还是10－15次。真是让人晕倒，无可适丛。回复我不知道这个某些情况是不是指的化学交联的情况下。我用CNBr交联的方法将修饰到固相载体表面的时候是用的pH7.4的PBS稀释包被物。在CNBr交联等化学交联当中，的过度交联将造成抗体结合能力的大大降低，因此要避免抗体的过度交联，一个有效的办法就是在pH接近中性的条件下进行交联（pH7.4左右不利于氨基的解离）。另外，我也看见有资料用较高浓度的tween-20来封闭的，我想可能在你说的这种情况中是把tween-20用于封闭的吧！可能是利用tween-20来增强表面的亲水性来减少对蛋白的非特异性吸附吧！回复在包被和后续步骤中的条件是不同的。在包被的时候pH要求在9.0-9.6之间，有利于蛋白质与固相表面的结合；而抗原抗体反应时采用的pH是7.4左右，不利于氨基的解离，不利于蛋白质与固相表面的结合。dodogougou兄补充的很对，顺便在这儿提醒大家：一般抗原包被需要在PH9.6的环境下（原因不再赘述，见上），而抗体包被可以在PH7.4的环境下，原因和dodogougou兄提到的交联一样，这样可以防止抗体的过度交联而影响其活性。掌握了这几点，大家以后看文献的时候就不会被PH变来变去弄晕了。回复我们用的0.05%-0.1%PBST,效果不错!!
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