为什么加入带血清的培养基，血清可以抑制胰酶对干细胞无血清培养基的

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2016-12-02 09:42 标签： 胰酶细胞消化液
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各位前辈：
我在做细胞传代时，偶尔消化稍微有点过时就直接把培养液加上了，后来发现对细胞影响不大。但是又觉得这似乎不大合理。哪位高手给指点一下！
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whitesheep ( 12:51:41)
哦 我传的细胞也没有明显的影响，但是如果没有影响的话，为什么参考书上要求吸出胰酶呢!
总之，还是很谢谢你！！
summerxx ( 12:52:07)
这样的处理方式应该是没有什么问题的，但前提是你所用的消化液中只含有胰酶，而不含有EDTA。EDTA是一种化学螯合剂，主要作用在于能螯合Ca、
Mg离子，使细胞分离。但EDTA不能被血清中和，消化后要彻底清洗，否则细胞易脱壁。因为胰酶和EDTA联合使用可提高消化效率，所以常二者合用。
配制胰酶的溶液常用D-hank's或PBS，这些平衡盐溶液中的成分在培养基里都有，所以只要血清将胰酶的作用中和了就不会有什么影响的。
多多交流！
DDD ( 12:52:23)
根据我的经验，细胞用胰酶消化后，直接加培养基中和就可以了，一般对细胞不会有影响。但是为了消除EDTA的影响，可以在第二天更换一次培养基，这样既可以清除消化液的影响，又可以将杂质和未贴壁的细胞去除。
one ( 12:52:43)
应该是没关系的，我做的也是少量胰酶（不含EDTA）消化后，直接加培养液终止的，培养液中的血清就能终止酶的作用，细胞的长势还是可以的。
toy ( 12:53:03)
楼上说得对，有EDTA的话细胞真的是不容易贴壁，前天我用含EDTA的胰酶消化MCF时，留下一半未吸去，结果后来观察很多悬浮细胞！
newway ( 12:53:38)
那大家消化时一般加多少呢？元代的细胞培养。
whitesheep ( 12:53:57)
那大家消化时一般加多少呢？元代的细胞培养。
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我做的是传代细胞啊 一般稀释一倍后加一毫升
xevin ( 12:54:18)
我做原代大鼠心血管内皮细胞，大鼠心肌细胞，传代时，都是一个培养瓶加1ml胰酶（Hyclone，不同牌子消化能力可能不一样），3min，镜下观察，细胞呈微球状时，立即加入含血清的培养基，吹打！
shenkunjie ( 12:54:36)
传代消化时胰酶不用加很多，我的经验是能漫过培养瓶底部就行，如果胰酶的消化效力不错，这些就足够，要是经过反复冻融胰酶的效力降低了，可依情况适当增加。
hot_hot_hot ( 12:55:03)
根据我的经验，细胞用胰酶消化后，直接加培养基中和就可以了，一般对细胞不会有影响。但是为了消除EDTA的影响，可以在第二天更换一次培养基，这样既可以清除消化液的影响，又可以将杂质和未贴壁的细胞去除。
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同意，省去离心洗涤步骤，不仅减小对细胞的损伤而且减少染菌机会
is2011 ( 12:55:21)
培养基加4倍以上,感觉问题不大
查看完整回复请点击这里：10%的细胞培养液加多少血清,不同浓度的培养液加多少血清.1
TC管管_登娗
一般我们是加体积分数为10%的血清,比如你10mL培养液里边就要含有1mL血清；如果是胎牛血清可以用8%.加入不想让细胞长得太快,可以再降低血清的浓度.
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细胞传代时，用血清中和胰酶的作用，但不知道原理是什么，望赐教
回复血清中的某些成分会灭活Trypsin。再具体的就不清楚了，无非时配体、蛋白间的相互作用吧。回复血清中有胰(protease inhibitor)，另外胰的效价有限，中的大量蛋白质也使胰酶消化能力消耗掉了
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我养的BMSC很难消化下来，贴壁细胞还很多时胰酶里已经有大量悬浮细胞。请教各位大侠，我可以不用倒掉胰酶直接加培养基和吗？因为胰酶倒掉后会损失很多细胞，谢谢。。。。。
回复其实那个状态将近要到的时候就可以终止消化了,时间你自己可以摸一下,虽然加入含有的培养液可以完全终止消化,但是个人觉得还是最好倒掉,毕竟胰酶会对细胞有损伤的.倒掉少许细胞应该还对细胞生长比较有利哒~回复发表下不同意见，呵呵1、对于“我养的BMSC很难消化下来。”查一下你这细胞一般消化多久，一般情况是贴壁很好，长的很快的在消化时间方面比贴壁不咋好的，长的不咋快的长，我的细胞贴的太牢，我的细胞消化时是放在孵箱里5分钟。。。拿出来还要使劲拍。。。2、对于“贴壁细胞还很多时胰酶里已经有大量悬浮细胞”我想这个时候你多拍拍培养瓶的侧壁会有帮助，有时需要多拍拍，再到镜下看看，再拍再看呵呵多记录几次时间心里就有数了3、对于“可以不用倒掉胰酶直接加培养基和血清吗？因为胰酶倒掉后会损失很多细胞”倒掉不是细胞都倒了吗？再说估计你的骨髓间充质干细胞不是很好养的吧（参照我这里那些养干细胞的朋友的情况）。 我做的这实验室都是不倒胰酶的，你直接加和胰酶等量或2倍量的培养基终止消化，然后离心-倒上清-加培养基-吹打-分装就是回复像楼主这样的情况，建议分批消化。“贴壁细胞还很多时胰酶里已经有大量悬浮细胞”，请问你的贴壁细胞在镜下是什么形态，已经变圆了，还是接近贴壁形态？如果这个时候你的贴壁细胞经过拍或者吹都还是不下来、或者形态都还没有开始变圆的话，就需要把先消化下来的细胞中的胰酶中和，剩余的贴壁细胞再次进行消化。消化的时候，倒掉培养液之后一定要先用PBS或者胰酶把细胞瓶里残余的培养液洗去，培养液里的血清就算很少，也会影响胰酶的作用。回复谢谢楼上各位，我感觉MSC很难被消化下来，我加了2ml0.25的胰酶放孵箱里20分钟还是有大量成纤维状的贴壁细胞，同时培养基经有了很多悬浮细胞。我想先把胰酶转移出来加培养基离心，剩下的细胞加胰酶继续消化，不知道行不行？？谢谢。。。。回复我觉得应该可以分批消化。如果你用的是胰没酶，那消化后一定要离心，因为会影响细胞生长，如果你仅用的胰酶，消化后就没有必要离心，可以加入生长液后直接分瓶养回复我觉得你可能消化之前没有用PBS或者生理盐水洗过吧，洗过之后可以把细胞周围残留的血清去除，提高胰酶的活性，我们实验室以前也出现过你这样的事，就是因为没洗过细胞，你试试吧回复试一下胰酶和EDTA联合消化吧！消化缓和一下也许会好些的。我的同事和你的情况基本一样，后来我建议他这样消化就没问题了。只加胰酶也许消化太快，有的还没有消化好，有的已经成片掉下来了。希望楼主实验顺利。回复感谢大家了。。。。。
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