求助大肠农杆菌感受态细胞胞问题

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大肠杆菌感受态细胞转化能力的影响因素
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大肠杆菌感受态细胞转化能力的影响因素
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我用的菌种是TG1,1%的接菌量,取500ul到50ml,摇菌两个小时左右OD值大约在0.5,冰浴10分钟,4度4000rpm离心10分钟,加0.1M冰预冷氯化钙20ml冰浴10分钟,4度4000rpm离心10分,最后加2ml0.1M氯化钙悬浮沉淀分装。可是这样操作就是转不进去。我想有没有可能问题是出现在氯化钙配置的问题上。我是121°高压灭菌的氯化钙4°存放。真愁人
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我们做感受态的时候,氯化钙一般是用滤器滤的,没经过高温灭菌!
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121°高压灭菌的氯化钙没有问题,我们就是这样做的啊,你找一个非常容易转的质粒试一试,看能不能转?
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我在网上查过说高压灭菌没问题,用滤膜和高压灭菌都可以呀,到底问题出现在哪我也找不到。您用的氯化钙是怎么配制的呀?是简单的氯化钙溶解在灭菌吗?还有没有其他的成分了,有没有什么注意事项?
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gaoxiangsh
我找的都是正常的质粒呀。而且我后做的几次也换用别的质粒了,您的氯化钙是怎么配制的?有没有事呢么注意事项呀?
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