作物叶片蛋白质组提取与酶切方法比较研究--《作物杂志》2016年02期
作物叶片蛋白质组提取与酶切方法比较研究
【摘要】：蛋白质组样品制备主要涉及蛋白质的提取和酶切处理,是蛋白质组学分析的限制环节之一。为了提高作物叶片蛋白质组样品制备的效率和重复性,系统比较了6种缓冲液(pH8.5 Tris-HCl酚、pH7.0磷酸盐、pH9.0碳酸盐、尿素/硫脲、pH8.0 Tris-HCl、pH4.5醋酸盐)和TCA-丙酮处理对水稻、小麦、大豆和玉米叶片蛋白质提取的影响,同时以小麦叶片总蛋白和牛血清白蛋白为样本,比较了传统方法和微波辅助方法的酶切效率。结果表明,TCA-丙酮处理的小麦和水稻样品采用尿素/硫脲方法能获得较高的蛋白得率,而玉米和大豆样品采用尿素/硫脲直接提取时蛋白质得率更高,同时,微波辅助酶切值得用于蛋白质组样品制备。本研究采用适当的蛋白质提取和酶切方法,有效提高了蛋白质的提取率和鉴定率,可为进一步深入开展作物叶片的蛋白质组学研究提供借鉴。
【作者单位】：
【关键词】：
【基金】：
【分类号】：Q946【正文快照】：
蛋白质组学(Proteomics)在整体水平上研究蛋白质的组成、活动规律及相互作用,是一门涉及多种技术方法的学科,其中蛋白质组样品制备的影响因素较多,至今仍是阻碍蛋白质组学发展的瓶颈之一[1]。蛋白质组样品制备的关键步骤包括蛋白质提取和酶切处理,常用的酶切方法是用胰蛋白酶
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Cas9体外酶切法检测gRNA靶点效率试剂盒
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CRISPR/Cas9是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御，可特异剪切外源的病毒及DNA以对抗入侵。 人工改造过的Cas9/gRNA系统通过gRNA（short guide RNA）引导Cas9蛋白识别并剪切带有gRNA靶点的双链DNA，用于基因敲除和精确编辑DNA等操作。利用CRISPR技术进行基因敲除和编辑操作实验前，获得剪切活性高的gRNA靶点是实验成功的关键。Cas9/gRNA剪切活性与gRNA靶点的识别序列有关，每个gRNA的剪切活性都会不同。
本试剂盒通过Cas9/gRNA体外酶切靶点DNA片段，进行gRNA靶点活性的评估。体外Cas9酶切DNA效果与DNA浓度、Cas9酶量、反应时间、gRNA的量、靶点活性有关，为了科学地评价gRNA靶点效率，将固定DNA浓度和Cas9酶量，在一定单位时间内，测量Cas9酶切靶点DNA的效率，并通过与已知有活性的gRNA靶点进行比较，评价目标gRNA靶点的活性。
京、津、辽、吉、黑
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应用创造酶切位点法检测单碱基突变
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维普资讯 遗传 ＨＥ Ｅ Ｔ （ ｅ ｉｇ ５ ３ ：２ ￣３ ９２ ０　 Ｒ ＤＩ ＡＳ Ｂ ｉ ｎ ）２ （）３ ７ ２ ，０ ３ ｊ技 术 与 方 法 　应 用 创 造 酶 切 位 点 法 检 测 单 碱 基 突 变　赵 春江 ， 李　 宁 ， 学梅　 邓（ 农 业大 学农业 生 物技 术 国家重 点实验 室 ， 北京 １ ０ ９ ） ０ ０ ４　摘要： 应用 引 物错 配技 术结 合 单碱 基 突 变位 点 而 配 合 成 一个 酶切 位 点 ， 之 成 为 可 用 Ｐ Ｒ－ ＲＦ 使 Ｃ － ＬＰ方 法 分 析 的　突 变位 点 ， 对 单碱 基 突变 位点 进 行基 因 型鉴 定 的有 效而 简捷 的手段 。本 文以鸡 胞 外脂 肪 酸结 合 蛋 白（ ｘ ｒｃｌ ― 是 Ｅ ｔａｅｌ 　 ｕａ　ａｔ　ｃ 　 ｉｄｎ 　 ｒｔｉ ， ｘ―Ｆ Ｐ 基 因单碱 基 突变 的基 因型检 测 为例 ， ｒｆｔｖａｉ ｂｎ ｉｇｐ ｏｅｎ Ｅ ｄ ＡＢ ） 探讨 了应 用创 造 酶切 位 点 Ｐ Ｒ（ ｒ― Ｃ Ｃ ｅ　ａｅ　 ｅ ｔｉ ｉｎＳｔ Ｐ Ｒ， ＲＳ Ｐ Ｒ） 测单 碱 基 突变 基 因型 的思 路 、 法 和策 略 。 ｔｄＲ ｓｒ ｔ 　 ｉ 　 Ｃ Ｃ － Ｃ 检 ｃｏ ｅ 方 　关 键 词 ： ＲＳ Ｐ Ｃ ― ＣＲ； Ｘ― Ｆ Ｐ基 因 ； ＮＰ检 测　 Ｅ ＡＢ Ｓ 中图 分类 号 ： ５　 Ｑ９ ３ 文献 标 识码 ： 　 Ａ 文 章 编 号 ：２ ３ ９ ７ （０ ３ ０ ― ０ ２ ― ０ 　 ０ ５ ― ７２ ２０ ）２ ３ ７ ３Ｔｈｅ Ｅｓ ａ ｉｈｍ ｅ 　 　 ｅ ｈｏ 　 ｏ 　 ｄｅ ｉ ｙ ｎｇ 　 ｔ ｂｌｓ ｎｔ ｏｆ Ｍ ｔ ｄ ｆ ｒ Ｉ ｎｔ ｆ ｉ 　ＳＮＰ　 ｅ ｔ ｐｅ ｂｙ ＣＲ Ｓ－ ＰＣＲ　 Ｇ ｎｏ ｙ 　 　 －Ｚ ＡＯ　 Ｈ Ｃｈｕ ― ｉｎ ＬＩＮｉ ｇ， ｎ Ｊａ ｇ， 　 ｎ ＤＥＮＧ　 ｅＭ ｅ　 Ｘｕ ― ｉ（ ｔｏ ａ Ｋｅ Ｌ ｂ ｒ ｔｒ ｆ ｒＡｇ ｏｉｔｃ ｎ ｌｇ Ｃｈｎ Ｎａｉｎ ｌ ｙ ａ ｏ ａｏｙ ｏ ｒｂｏｅｈ ｏｏ ｙ， ｉａＡｇ ｉｕ ｔｒ ｌＵｎｖｒｉｙ， ｉｉｇ １ ０ ９ ， ｈ ｎ 　 ｒｃ ｌ ａ　 ｉｅｓｔ Ｂｅｊｎ 　 ０ ０ ４ Ｃ ｉａ） ｕ Ａｂ ｔａ ｔ Ｃｒａ ｅ 　 ｓ ｒｃ ｉｎＳｉ 　 ｓｒ ｃ ： ｅ ｔｄ Ｒｅ ｔｉｔｏ 　 ｔ ＰＣＲ （ ｅ ＣＲＳ― ＰＣＲ）ｉ　　ｉ ｌ　 ｎ 　 ｆｉｉｎ　 ｅｈ ｄ ｔ　ｄ ｎ ｉｙＳＮＰ ｇ ｎ ｔ ｐ ｓ Ｏｎ 　 ｓａｓｍｐ ｅａ ｄ ｅｆｃｅ ｔ ｔ ｏ 　Ｏ ｉｅ ｔｆ　 ｍ 　ｅ ｏｙ ｅ． ｅｏ 　 ｒ 　 ｓ ｔ ｈ ｂ ｓ ｓ ａ ｅ ｕ ｅ 　 ｎ ａ ｐ ｉ ｒ ｔ 　 ｒ ａ ｅ ａ ｒ ｓ ｒｃ ｉ ｎ ｓｔ 　 ｙ ｃ ｍ ｂ ｎ ｎ 　 ＮＰ ｓ ｔ　 ｆ ｅ 　 ｒ ｍｏ ｅ ｍｉ ｍａ ｃ 　 ａ ｅ 　 ｒ 　 ｓ ｄ ｉ 　 　 ｒ ｍｅ 　 Ｏ ｃ ｅ ｔ 　 　 ｅ ｔ ｉ ｔｏ 　 ｉ ｂ 　 ｏ ｅ ｉｉｇ Ｓ 　 ｉｅ ａ ｔ ｒ ＰＣＲ． ｅ ＣＲＳ Ｔｈ 　 　―Ｐ ＣＲ　 ｒ ｄ ｃ ｓ ｃ ｎ ｂ 　 ｅ ｏ ｙ ｅ 　 ｔ 　 　 ｙ ｔ ｅ ｓ ｍ ｅ ａ 　 ｐ ｏ ｕ ｔ　 ａ 　 ｅ ｇ ｎ ｔ ｐ ｄ ｗｉｈ ａ ｗａ 　 ｈ 　 ａ 　 ｓ ＰＣＲ― ＲＦＬＰ． ｎ ｔ ｅ ｓ ｕ ｙ， ｔ ａ ｅ ｌ ａ 　ａ ｔ 　 ｃ ｄ ｂ ｎ ｉ ｇ Ｉ 　 ｈ 　 ｔ ｄ Ｅｘ ｒ ｃ ｌｕ ｒｆ ｔｙ ａ ｉ 　 ｉ ｄ ｎ 　ｐ ｏ ｅｎ （ ｒ ｔ ｉ ＥＸ ― ＦＡＢ Ｐ） ｇ ｎ 　 ｓ ｓ ｒ ｅ 　 ｓａ 　 ｘ ｍｐ ｅ ｆｒ ｅ ｔ ｂｉｈｎ 　 ｈ 　 ｅ ｅ ｗａ 　 ｅ ｖ ｄ ａ 　 ｎ ｅ ａ ｌ　 ｏ 　 ｓａ ｌｓ ｉｇ ｔ ｅ ＣＲＳ― ＰＣＲ　 ｅｈ ｄ Ｓ ｒ ｔｇ 　 ｆＣＲＳ―　 ｍ ｔ ｏ ． ｔａ ｅ ｙ ｏ 　ＰＣＲ　 ｓ ａ ｓ 　 ｉ ｃ ｓ ｅ ． ｗａ 　 ｌｏ ｄ ｓ ｕ ｓ ｄ　 Ｋｅ 　 ｒ ｓ ＣＲＳ ＰＣＲ ； ｙ ｗｏ ｄ ： ― ＥＸ― ＦＡＢＰ ｇ ｎ ； ｅ ｏ ｙ ｉ ｇ ｏ 　 ＮＰ　 　 ｅ ｅ ｇ ｎ ｔ ｐ ｎ 　 ｆＳ单 碱 基突 点 是 Ｄ ＮＡ 序 列 突 变 中 常 见 的 一 种 。人 类 基　因组 计划 重 要成 果 之 一 就是 发 现 在 人 类 基 因序 列 中存 在 着　 大 量 单 碱 基 多 态 性 （ ｉｇｅ Ｓｎ ｌ 　Ｎｕ ｌ ｔ ｅ ｏｙ ｒ ｈｓ 　 ｃ ｏｉ 　Ｐ ｌｍｏ ｐ ｉｍ， ｅ ｄ Ｓ ）１］ ＮＰ ［ 。在 家 禽 、 畜 基 因组 内不 少 Ｓ 　 家 ＮＰ位 点 和 动 物 的　 生产 性 状密 切相 关 ， 通过 对这 些 位点 的检 测 可对 动 物 的选 种　 育 种提 供 大量 的辅 助 信 息 。而 对 单 碱 基 多 态 性 位 点 的检 测　 有赖 于 操作 简便 、 结果 明 了的检测 方 法 。较 常见 的 单碱 基 多　 态性 位 点 的检 测 方法 包 括 测 序 、 Ｓ 、 Ｌ Ｓ ＣＰ ＲＦ Ｐ等 方 法 。这 些　物碱 基 错配 技 术设 计 的检测 单 碱基 突 变 的简 单易行 的方 法 。 　其原 理 是 ： 据单 碱 基 突 变 位 点 的碱 基 替 代 情 况 设 计 Ｐ Ｒ 根 Ｃ 　 引 物 ， 中 一条 引物 根 据 突 变位 点 邻 近序 列 设 计 ， 为 引 入　 其 人错 配碱 基 ， 得 引 物 ３ 端 和 单 碱 基 突 变 的 一 种 突 变 型 在　 使 　Ｐ Ｒ扩 增后 形成 一个 酶切位 点 ， Ｐ Ｒ产 物 可 用 类 似 Ｐ Ｒ Ｃ 其 Ｃ Ｃ 　― ―ＲＦ ＬＰ（ ＰＣＲ　 ｓ ｒｃｉｎ Ｆｒ ｇ ｅ ｔＬｅ ｇ ｈ Ｐ ｙ ｒ ｈｓ ） Ｒｅ ｔｉｔｏ 　 ａ ｍ ｎ 　 ｎ ｔ 　 ｏｌｍｏ ｐ ｉｍ 　方 法进 行分 析 。 由于 这 种 方 法 应 用 了引 物 ３端 错 配 技 术 ， 　 　 Ｐ Ｒ产 物进 行 酶切 电泳 后 即 可 进 行 基 因型 的 鉴 定 工 作 ， Ｃ 因　 此在 实 际运 用 中具 有 很 大 的 灵 活性 ， 检 测 方 法 简 单 易 行 ， 且 　 是 一种 进行 单 碱基 突 变 位 点 基 因 型鉴 定 的较 好 方 法 。本 文　 以与鸡 腹脂 积 累密 切相 关 的鸡 胞 外脂 肪 结 合 蛋 白（ ｘｒｃｌ Ｅ ｔａｅ― 　 ｌａ　 ｔ 　ｃ 　ｉｄｎ 　 ｒｔｉ， ｘ―Ｆ Ｐ 基 因 的 单碱 基 突　 ｕ ｒ ａｔ ａ ｉ ｂｎ ｉｇｐｏ ｅ Ｅ ｆ ｙ ｄ ｎ ＡＢ ） 变基 因型［ 的检测 为 例 ， Ｃ Ｓ― Ｐ Ｒ 技 术 的 方 法 和 策 略　 ４ 　 对 Ｒ Ｃ进行 了探讨 。 　方法 虽 各有 优 点 ， 也各 有其 不 足之 处 。测 序可 以直接 测 出　 但Ｄ ＮＡ序 列 中 的所 有 突 变 位 点 的碱 基 替 代 情 况 ， 该 方 法 需　 但 要 昂贵 的仪 器 和 较 长 的 步 骤 ， 本 较 高 ； Ｓ Ｐ方 法 较 为 成　 成 ＳＣ熟Ｌ ， 操 作 繁 琐 ， 时 长 ， 果 易 造 成 误 判 ； Ｃ ３但 ］ 耗 结 Ｐ Ｒ― ＲＦ Ｐ Ｌ　方法 要求 待 测 多态 性 位 点 和某 一 酶切 位 点 相 关 。创 造 酶 切　位 点 法 （ ｅｔｄＲｅｔｉ ｉｎＳｔ Ｐ Ｒ， Ｒ － Ｐ Ｒ） 根 据 引　 Ｃｒａｅ　 ｓｒ ｔ 　 ｉ 　 Ｃ Ｃ Ｓ ｃｏ ｅ Ｃ 是收 稿 日期 ： ０ ２ ０ ―１ ： 回 日期 ：０ ２一Ｏ 一Ｏ 　 ２０－ ６ ３修 ２０ ９ ５ 作 者简 介 ：￣ －Ｅ １ ７ 一） 男 （ ｉ ￣ （ ９ ０ ， 汉族 ） 中国农 业大 学 生物学 院博 士后 ， ｔ ， 研究 方 向 ： 物技 术 。Ｅ― ｉ：ｈ ｎｉｎ ｚ ａ ＠ｈ ｔ ｉ ｃ ｍ　 生 ｍａ ｃ ｕ ｊ ｇｈ ｏ ｏｍａｌ ｏ ｌ ａ ． 通 讯作 者 ： 李 宁（ ９ ２ ， ， １ ６ 一） 男 江西 人 ， 教授 ， 士生导 师 ， 业 ： 博 专 生物 技术 。Ｔｅ： １ 一６ ８ ３ ２ 　 １Ｏ Ｏ ２ ９ ３ ３维普资讯 ３８ ２　遗传 ＨＥ Ｅ Ｔ Ｓ ｅ ｉｇ ２ ０　 Ｒ ＤＩ Ａ 　Ｂ ｉ ｎ ）ａ ３ ｊ２ ５卷　过删序 己知基 因型 的 Ｄ ＮＡ样 品作 为建立 Ｃ －Ｐ Ｒ方 法　 ＲＳ Ｃ１ 材 料 和 方 法　１ １ 材　 ． 料　的标准参照 　Ｉ２ 方　 ． 法　从 肉鸡和乌骨鸡原代和 Ｆ 　代中提取血液 ＤＮＡ， 并用经　一已知突变点邻近序列如下所示 ： 　１） ０ 　ｕ 　 ｃＬＩ 　 １ １ｌＡ 基 因　 ５ ＴＧＡ ＣＡＧ ’ ＣＡ ＧＧＴ ＴＧＴ ＧＴＧＴ Ｃ ＣＡ ＡＣ ＧＧＣ ＣＡ Ｃ Ｃ Ｇ． ＴＴ Ｔ ＧＴＧ ＣＣ Ｃ ３ Ｃ Ｇ 　 　＊　Ｂ基 因　 ５ ＴＧＡｃ ｃＡＧ 　 Ａ ＧＧＴＴ 　 ； ｔ丁ｔ 　 ＾Ｇｃ ｃｌ Ｇ Ｔｃ Ｇ ｌ　 ： ｒ ｃ Ａ ｒｒ Ｇｃ ＡＧＴ Ｃ ＧＣ ３ ＧＣ Ｃ 　 　其 中． ” 　＊ 为单碱基囊变位点． 融基替代情况 为 Ｔ Ｃ “” ／ ｝ 为碱基缺戋处 ， Ｂ基因对 Ａ基因有一 ｃ的插 人 　根据 已知 序列 和上述 序列 的反 向序 列设 计如下 Ｃ ＲＳ引 物 序列 ： 　ＣＲＳｔ 　 ＣＲ 　 ５ ＧＴＧＡＧＣＡＣＡＧＧＣＴＧＡＧＣＡＡＧ ３’ 　 　 　 ５ ＣＴＧＡＧＣＣＡ ＡＧＴＣＴＧＧＧＧＡＣＧＣ ３ 　 　 　 （ Ｉ２ 一 １ ０一 一 １ Ｏ ） ｔ ０　 （一 １ １ 一 一 ９ ９　 ００ ８）其 中． 引物 Ｃ Ｓ 　 第 二 个碱 基 人为 地 由 “ 　变 为　 Ｒ 　３端 Ａ进 行酶　 后 ． 等位基 因片段 比 Ａ等位基因片段 小大约一个　 ＢＣ Ｓ 引物的长度　 酶切结 果电泳 后 即可得 到 Ｅ 　 上 　 Ｒ： Ｘ― ｌ 尸 的 基因型鉴定 结果　 由于在 Ｐ Ｒ所扩增的 Ｅ Ｃ 　―Ｆ Ｂ尸基　 Ａ 序列范围内另有一个 Ｈｈ １ ａ 酶切识别位 点 ． Ｃ Ｐ Ｒ产物酶切　后 的情 况 如 阿 １ 示 ： 所 　“　在 Ｐ Ｒ扩 增后． 之与多 态性位点形成 如下序列 Ｇ． Ｃ 使 　 “ Ｃ （／ ）． 中“ Ｃ Ｃ 为 Ｈ ａ 的酶 切识 别位点 这 Ｇ Ｇ ＣＡ ” 其 Ｇ Ｇ” ｈｌ 　 　样． 当甩 Ｃ Ｓ Ｐ Ｒ引物扩 增 等位 基 因 Ｂ时 ． Ｐ Ｒ产物　 Ｒ － Ｃ 在 Ｃ 中就形 成了可南 Ｈ ａ 识 别的酶切位点　 Ｐ Ｒ产物用 Ｈｈ Ｉ ｈ］ Ｃ ａ　Ａ 目 　Ｉ 一２ 一 ３　《目Ｉ ―　― ―　图１ Ｅ 　 　― Ｆ ＢＰ ｃ ｓ Ｃ 产物 Ｈ ａＩ Ａ 　 Ｒ ―Ｐ Ｒ ｈ 　 酶切 图　苴 巾 ． ” 示 所扩 增 序 列 内的 酶 圳位 点　“ ” 示 多卷 眭 位点 ｝ 　▲ 袁 ● 表 　一 　表　 引 物 ｔ Ｓ ； ” 示 引 物 Ｃ ２　 ； Ｉ Ｒ 　一 表 ＲＳ ，Ｆ ｇ Ｉ Ｔｈ 　 ａ Ｊｄ ｇ ｓｉ ｎ ｐ ｔｅ ｎ 　 ｒ ｉ ．　 ｅ Ｈｈ 　　 ｉｅ ｔｏ 　 ａ ｔ ｒ ｓ ｎ 　 Ｅ　― ｎ 占Ｐ ｇ ｎ 　 ｍｐ ｉ ｅ 　 ｔ 　 Ｓ－ ＰＣ ｐ ｉ ｒ　 　 ｅ ｅ ａ ｌ ｄ ｗｉｈ ＣＲ － ｉ ｆ Ｒ　 ｒｍｅ ｓ由圈 ｌ可 知 ． 基 因 型 为 ＾‘ 时 ， 田后 可 得 到　 当 ４型 酶 １８ ｐ ２ｂ ０ ｂ 、３ ｐ两条带型 ｛ Ｂ型 有 ｓ ｂ 、３ ｐ ２ ｂ 　 Ｂ ７ ｐ ２ ｂ 、 ］ ｐ３荣带 型 ； 　 ＡＢ刚有 １８ ｐ ８ ｂ 、３ ｐ ２ ｈ 　 ０ ｂ ，７ ｐ ２ ｂ 、１ ｐ４条带型 。 　 Ｐ Ｒ条件为 ．５ ５ ｎ ３ 循 环 ×（ ５ ３ ｓ６ ℃ ３ ｓ Ｃ ９℃ ｍｉ，０ ９ ℃ Ｉ ．８ Ｏ ． ） 　７℃ Ｉ ｉ） ７ ℃ １ｍｉ。 Ｐ Ｒ Ｂ ｆ ｒ中 Ｍｇ 的 浓 度 为　 ２ ａ ｒ ｎ ．２ Ｏ ｎ Ｃ 　 ｕｆ ｅ 　ｌ５ ｍｏ ｌ ＿ｍ ｌ 　 ／ ＝取 Ｌｕ　 ｃ Ｏ ＩＰ Ｒ产物 ． 加入 ４ 　 Ｊ Ｉ Ｕ Ｈ ｌ 酶四４　用 ４ ｎ ｈ 　 琼脂 糖凝 胶进行电泳 ． 化乙锭染色． 演 在紫外灯下观察结果　２ 结　粜　料 　图 ２为用 Ｈｈ ｌ ａ 酶切Ｅ Ｘ―Ｆ Ｐ基　 ｃ ｓ Ｃ 　Ｂ Ｒ 　Ｐ Ｒ产物　 的电 泳 图。第 一 罚 道 为 Ｄ 　 ｒｅ 质 粒 Ｐ Ｒ ２ ＝ ＮＡ Ｍａｋ ｒ（ Ｂ ３２用　 Ｈａ ｌ 酶切所制）第二 泳道为 Ｂ ｅＩ Ｉ ， Ｂ基因型 ． 在紫外 ｌ 下清晰　 光 可见 的为 ８ ｂ ７ ｐ的带型 ； 第ｉ泳 道为 ＡＢ基因型 ． 晰可 见 的 清 　 为 ｌ ８ｐ ８ ｈ Ｏ ｂ 、７ ｐ两十带型 ： 第四泳道为 ＡＡ基 因型． 晰可见　 清 的为 ］８ ｐ的带 型｛ 五泳道 为 术经酶 田的 Ｐ Ｒ 产物。 因 ０ｈ 第 Ｃ 　 此 ． 据 １ ８ ｐ和 ８ ｈ 根 ０ｂ ７ ｐ两条带 型即可分辩出 Ｅ 　 Ｆ Ｐ基　 Ｘ ＡＢ 因在谈位点单碱基突 变的 ３种基 固型　围 ２ 用 Ｈｃｌ 切 Ｆ ｉ 酶 ａ 　― Ｆ Ｂ Ａ Ｐ基 因　ｃｓ Ｃ Ｒ ―Ｐ Ｒ产物的电泳圈　Ｆ ｇ ２ Ｔｈ 　 Ｓ Ｐ 　 ｒｄ ｃ 　 ａ ｄ 　 ｆ￡　― ＦＡＢＰ ｉ． 　 ｅ ＣＲ － ＣＲ ｐ ｏ ｕ ｔ ａ ｓ ｏ ｂ 　 ｇ ｎ 　 ｉ ｅ ｔｄ ｗ ｔ 　 ａ 　 ｅ ｅ ｄｇ ｓｅ 　 ｉｈ Ｈｈ ｌ维普资讯 ３期　赵春 江 等 ： 用创 造 酶切 位 点法 检测 单 碱基 突 变　 应３９ ２　用 上 述 设 计 的 ＣＲ ― Ｐ Ｓ ＣＲ 体 系 对 ２ ３只 肉 鸡 和 乌 骨 鸡 杂　将 严重 影 响 Ｐ Ｒ 的扩 增效 率　 在 设计 Ｃ Ｃ ＲＳ引物 的错 配 碱基　 时， 还应 考 虑 到所 配合 的酶 切 位点 对 应 的 限 制性 内切 酶 是否　 易 购得 、 价格 是 否 昂贵 。应 用 ＣＲ ―Ｐ Ｓ ＣＲ时所 扩 增 的序 列长　 度 宜短 。ＣＲ ―Ｐ Ｒ产 物 酶切 后 ， 同 等位 基 因间 片 段 的长　 Ｓ Ｃ 不段 差 异 只 有 大 约 一 个 引 物 的 长 度 （ 般 为 ２ ｂ ～ ２ ｂ ） 如　 一 Ｏ ｐ ５ｐ ， 果 扩 增 的 长 度 较 大 ， 样 小 的 片 段 长 度 的 差 异 在 电 泳 时 不 易　 这交 后 代 的 ＤＮＡ 样 品进行 鉴 定 ， 结果 如 表 １所示 。 其 　表 １ Ｅ 　 Ｘ― Ｆ ＢＰ基 因 频 率 和 基 因 型 频 率　 ＡＴａ ｌ　 　 Ｆｒ ｑ ｅ ｃｅ 　 ｆ ｇ ｎｅ 　 ｎ 　 ｅ ｏ ｙ ｅ 　 ｆ ＥＸ ― ＦＡ ＢＰ ｂ ｅ１ ｅ ｕ ｎ ｉｓ ｏ 　 ｅ ｓ ａ ｄ ｇ ｎ ｔ ｐ ｓ ｏ 　 　显 示 出来 ， 给 基 因型 的判 断 带来 很 大不 便 。因 此应 用 ＣＲ 　 将 Ｓ～Ｐ ＣＲ 时 ， 增 的 长 度 应 在 １ ０ ｐ以 内 为 好 。 扩 ０ｂ 　３ 讨　论　参 考 文 献 （ ｆｒｎ ｅ ）　 Ｒｅｅｅ ｃ ｓ ：［ ］ ＮｇＰＣ， ｅ ｉ ｆＳ Ａｃｏ ｎ ｉ 　 ｒ ｕ ａ 　ｏｙ ｒ ｈｓ 　 ｒ― １ 　　 Ｈ ｎｋ ｆ ． ｃ ｕ ｔ ｇｆ 　 ｍ ｎｐ ｌ ｏ　 ｎ ｏｈ ｍｏｐ ｉ ｐｅ ｍｓ 　 ｄｃ ｄｔ　ｆ ｃ ｐｏｅ 　 ｎ ｔ ｎ Ｊ ． ｅ ｏ ｅＲ ｓ ２ ０ ， ２ ３ ： ｉ ｅ　ｏａｆ ｔ ｒｔｉ ｆ ｃ ｏ Ｅ］ Ｇ ｎ ｍ 　 ｅ ， ０ ２ １ （ ） ｔ ｅ　 ｎｕ ｉ 　４３ ～ ４ ６ 　 ６ ４ ．Ｃ ―Ｐ Ｒ是 一 种应 用 引 物 碱 基 错 配 技 术 结 合 单 碱 基　 ＲＳ Ｃ多 态性 位点 及其 近 旁 序 列 而 设 计 的 一 种 检 测 单 碱 基 突 变 型　的 简捷 有效 的手 段 。通 过错 配碱 基 的方 法 使 引物 ３ 　端 邻 近　 的 序列 在 Ｐ ＣＲ扩增 后与 单碱 基 突 变位 点 的一 种 基 因 型配 合　 成一 个酶 切 位点 ， 而 使 Ｐ 从 ＣＲ产 物 可用 类 似 于 Ｐ Ｒ― Ｒ Ｌ 　 Ｃ Ｆ Ｐ 的方法 进行 基 因 型 的 鉴 定 。建 立 这 一 基 因型 检 测 方 法 的关　 键 在 于 ＣＲ Ｓ引物 的设 计 。引 物设 计 时 应 考 虑 到 多 态性 位 点　 邻 近序 列 的情况 、 配碱 基 的选择 和 扩 增 片段 大 小 等几 方 面　 错 的 因素 。Ｃ ＲＳ引 物 的选择 余 地较 小 ， 只能 利用 多 态 性位 点 的　Ｅ］ 吴 ２涛， 曹佳， 钱频 ， 明杰 ． Ｎ 诱 导带 Ｌ ｃ 杨 Ｅ Ｕ ａ Ｚ靶 基 因 的　ｋ ｔ　 Ｎ 突变 分子 机理 的初 步研 究Ｅ ］ 遗传 ，９ ９ ２ （ ） １　 ｇ ｌＤ Ａ ｌ Ｊ． １ ９ ，１ １ ：９～２ 　 ２．［ ］ Ｓ ｚ ｋ Ｍ　 　 ｒ ａ Ｓ ｋｙ　 Ｈ ｙ ｓ ｉ ． ａ ｉ ａ ｄｓｎ ｉｖ　ｅ ３ ｕ ｕ ｉ Ｙ Ｏ ｉ ， ｅ ｉａ 　 ｔ Ｔ， ａ ａ ｈ Ｋ Ｒ ｐｄ ｎ 　ｅ ｓ ｉ ｄ ― 　 　 ｔｅ 　ｔ ｃｉ ｎ ｏ 　 ｉｔ ｍ ｕ ａ ｉｎｓ ｎｄ ｅ ｔｏ 　 ｆｐｏｎ 　 ｔ ｔｏ 　ａ 　ＤＮＡ　 ｏｌｍ ｏ ｐｈｓ 　ｕ ｉ ｇ ｔ 　 ｐ ｙ ｒ ｉｍｓ ｓｎ 　 ｈｅｐ ｌｍ ｒｓ　ｈ ｉ ｒａｔ ｎ Ｊ ． ｅ ｏ ｉ ， ９ ９ ５ ８ ４ ７ ． ｏ ｅａ ｅ ａ 　ｅ ｃ ｏ Ｅ］ Ｇ ｎ ｍ ｃ １ ８ ， ： ７ ￣８ ９ ｙ ｃ ｎ ｉ ｓ 　 ［ ］ ｗ ｎ 　 ｉｕ， ｉ ｉｇ Ｄ ｎ 　 ｕ ｍ ｉ ｔ １ Ｓｎ ｌ ｎ ｃ ｏｉｅ ｏ― ４ ａ ｇＱ ｇ ｉＬ Ｎ ｎ ， ｅｇ Ｘ ｅ ｅ， 　 ． ｉ ｅ ｕ ｌ ｔ 　 ｌ 　 ｅａ ｇ　 ｅ ｄ ｐ 　ｙ ｏ ｐ ｉｍ　 ｎ ｌｓｓ ｏ 　ｃ ｃ ｎ ｅ ｔａ ｅ［ ｒ ａ ｔ 　 ｃｄ ｂｎｄｎｇ ｍ ｒ ｈ ｓ ａ ａｙ ｉ　 ｎ ｈｉｋｅ 　 ｘ ｒ ｃ ｌ ｕａ　ｆｔｙ ａ ｉ　 ｉ ｉ 　近旁 序列 。当邻 近 多 态 性 位 点 的 正 向 序 列 不 适 于 作 为 引 物　序列时， 可选 择 其 反 向 序 列 作 为 引 物 ， 之亦 然 。选 择 错 配　 反 碱 基时 应 注意碱 基 错 配的类 型 和数 量 。有 研 究 报 道 ， 引物　 当 ３ ， 端序 列 与模板 出现 Ｇ― Ａ、 Ｇ― Ｇ或 Ｃ― Ｃ的 碱 基错 配 时 对　 Ｐ Ｒ的扩 增 效率 有 显著 的影 响 ， 较 严 谨 的 Ｐ Ｃ 在 ＣＲ条 件 下 会　ｐｏ ｅ 　 ｅ ｅａ ｄｉ 　 ｓｏｉ ｉｎ　 ｉ 　ａ ｉ ｓ ｔａ ｝ ］ Ｓ ｉｃ　 ｒｔｉ ｇ ｎ　ｎ 　 ｓａｓ ｃ ｔ ｓｗ ｔ ｆｔ ｎ ｓ ｒｉ Ｊ ． ｃ ｅ ｎ ｔ ａｏ ｈ ｔｅ　 ｔ － ｎｉ　 ｉａ， ０ ｎ Ｃｈｎ ２ ０１， ４（ ）： ９～ ４ ４． ４ ４ ４２ ３ 　［ ］ Ｋｗ ｋ Ｓ Ｋ ｌ ｇ 　 　 ， Ｋｉ ｅ　 ｅ ａ ． ｆ ｃｓ ｆ ｒ ｅ ― ５ ｏ 　 ， ｅｌ ｇ Ｄ Ｅ Ｍｃ ｎ ｙ Ｎ，ｔ １ Ｅ ｆ ｔ ｏ　 ｉ ｒ 　 ｏ ｎ 　 ｅ 　 ｐｍｔ ｍ ｐａ ｅ ｍｉｍ ａ ｃ ｓｏ 　ｈｅ ｐ ｌｍ ｅ ａ ｅｃ ａｎ ｒ ａ ｔｏｎ： ｕ ａ 　 ｅ ｌｔ 　 ｓ ｔｈｅ　 ｎ ｔ 　 ｏｙ ｒ ｓ 　 ｈ ｉ　 ｅ ｃｉ Ｈ ｍ ｎ致 使引 物无 法延 伸 。而其 它错 配情 况 对 Ｐ Ｒ 扩增 效率 则 无　 Ｃ显著影 响 『 。此 外 ， ３端 的 错 配 碱 基 过 多 （ 过 ３个 时 ）　 ５ ］ 当 　 超 ，ｉ ｍｕ ｏ ｅ ｃ ｎ ｙｖｒｓｔｐ　　 ｏ ｅ ｓｕ ｉ ［ ］ Ｎ ｃ ｉ Ａｃ ｓ ｒ ｎ ｄ ｆ ｉ ｃ　 ｉ 　ｙ ｅ１ｍ ｄ ｌ ｔｄｅ Ｊ ． ｕ ｌ ｃ ｉ 　 ｎ ｉ ｅ ｕ 　 ｓ ｅ　 ｄＲｅ １ ９０， ８： ９９ １ ０５　 ｓ， ９ １ ９ ～ ０ ．“ 育 和 疾 病 中 的 表 观 遗 传 学 ’ 讨 会 通 知　 发 ’ 研表 观遗传 学是针 对不 涉及 到 Ｄ ＮＡ顺 序变 化而表 现 为 Ｄ ＮＡ 甲基 化谱 、 色 质结 构 状 态和 基 因表达 在 细胞 代 问 传递 的遗 传　 染 现 象 的一 门科学 。在真 核细胞 的正常发 育 中， ＮＡ 甲基化谱 和染 色 质状 态 的确 定 和 时 空变 化 受着 精 细 的调 控 。我 们 对 这一 调　 Ｄ 控 的细节 和关键 参与 者仍 知之甚 少 。同时 ， ＤＮＡ 甲基 化 ， 蛋 白的修 饰 和染 色 质 高级结 构 的监控 机 制之 间有 着 密切 联 系 ， 　 在 组 由 此调 控有 关基 因的表 达 。高等 真核细 胞 的正常发 育取 决于表 观 遗传 学调 控 机 制 的准 确无 误 的 运 行 。该 机 制 的失 误 可 引起 对 包　 括肿 瘤和神 经退行 性病 变在 内 的多种疾病 。为推动我 国表 观遗 传 学 领域 的研 究 ， ｅ　 ｅｅｒｈ编辑 部 ， 国科 学 院 上 海生 命科　 ｃ ｌ Ｒ ｓａｃ ｌ 中 学研 究院 ， 上海 交通 大学肿 瘤研究 所等 有关单 位将 联合举 办 题为“ 发育 和疾病 中的表观 遗传 学” 为期 一天 的 国际学术 研讨 会 。 　 会 议 时 间与地 点 ：０ ３年 ８月 １ ， 海市 肇 嘉浜 路 ５ ０号　 中科 院 上海 学 术会 议 中心 ，暂 定 ） ２０ ３上 ０ （ 　 二、 名誉 主 席 ： 姚　 鑫 院 士 Ｃ ｌＲｅｅｒｈ主编　 中科 院上 海生 命科 学 研究 院 生物 化 学 与细 胞生 物 学研 究所　 ｅｌ ｓａｃ 　 三、 主席 ： 景 德 博士 Ｃ ｌＲｅｅｒｈ编委 ， 海 交通 大 学肿 瘤 研 究 所 ； 国 良 博 士　 中科 院 上 海 生 命 科 学 研 究 院 生 物　 朱 ｅｌ ｓａｃ 　 上 徐 化 学 与 细 胞 生 物 学 研 究 所 ； 　 博 士 Ｍ ａｓｃ ｕ ｅｔ　 ｎ ｒｌ ｓ ｉ ｌＵＳ 　 ＥｎＵ ｓａ ｈ ｓｔ Ｇｅｅａ Ｈｏ ｐｔ ； Ａ ｓ 　 ａ 四、 专题 ： 育 和疾 病 中 的表 观遗传 学 （ ｉｅ ｅｉ 　 　 ｅ ｅｏ ｍｅ ｔ ｎ 　 ｓａ ｅ） 发 Ｅｐｇ ｎ ｔ ｓｉ Ｄ ｖ ｌｐ ｎ　 ｄＤｉ ｓｓ　 ｃ ｎ ａ ｅ 五 、 要 报 告 者 ： ｎ Ｌ ，Ｍ ａｓｃ ｕ ｅｔ Ｇ ｎ ｒ ｌＨｏｐ ｔｌ Ｇ ｏｉｎ 　 Ｕ， Ｉｓｉ ｔ　 ｆ Ｂｉｃ ｅ ｓ ｙ ａ ｄ Ｃ ｌ Ｂｉｌｇ 　 主 Ｅ　Ｉ ｓ ｈ ｓｔ 　 ｅ ｅａ　 ｓ ｉ ； ｕ ｌ ｇ Ｘ ａ ｓ ａ ａ ｎｔ ｕｅ０ 　 ｏｈ ｍｉｔ 　 ｎ 　 ｅｌ ｏｏ ｖ， ｔ ｒ 　一、Ｓ， ＢＳ， 　 （ＡＳ； 　 ＹｉＺＨＡＮＧ， ｉ ｅ ｓｔ　 Ｕｎ ｖ ｒｉｙ ０厂Ｎｏ ｔ　 ｒ ｌｎ Ｃｈ ｐ ｌＨｉｌ ＮＣ； ａ ｆｎ 　 ｒｈ Ｃａ ｏ ｉ ａ， ａ ｅ　 ｌ ， Ｘｉｏｅ ｇ ＣＡ０，Ｉ ｓｉｕ ｅ０ｆ Ｇｅ ｒ ｉｓａ ｄ Ｄｅ ｅ０ 　 ｎ ｔｔ ｔ　 　 ｎ ｔｃ　 ｎ 　 ｖ ｌ　一 ｅｍｅ ｔｌ ｏｏ ｙ， ｈｎ ｓ Ａｃ ｄ ｍｙｏ 　 ｃｅｃｓＪｎ ｙ ａ 　 Ａ ｎａ　 ｌｇ Ｃ ｉｅｅ ａ ｅ 　ｆ Ｓ ｉｎｅ ；ｉｇｕ ｎＦ ＮＧ， ｈ ｎ ｈ ｉ ｎ ｉＨｏｐ ｔｌ Ｊ ｍｅ　ＨＥ Ｉ Ｂ， ａ ｅ ａＳｎ ― Ｂｉ Ｓ ａ ｇ ａ　 ｊ　 ｓ ｉ ； ａ ｓ Ｒｅ ａ Ｓ Ｎ，Ｍ Ａｃｄ ｍｉ　 ｉｉ 　ｃ Ｔａ ｐｅ ； ｅ ｇ ｏ ＺＨＵ， ｋ ｎ 　 ｉ ｅ ｓｔ ， ｉ ｇ ｅ ＺＨＵ ， ａ ｇ ａ 　 ｎ ｅ 　 ｎ ｔｔ ｔ ． ａ， ｉ ｉ Ｗ ｉ ｕ 　 Ｐｅ ｉ ｇ Ｕｎ ｖ ｒ ｉｙ Ｊ ｎ ｄ 　 Ｓｈ ｎ ｈ ｉＣａ ｃ ｒ Ｉ ｓ ｉｕ ｅ　六 、 议语 言和 论 文摘 要 注意 事项 ： ． 告 和摘 要均 为英 语 ； ． 要 应 在 一 页 Ａ４纸 范 围 内 ， 超 过 ６ ０ｃ ａａ ｔｒ ， 会 １报 ２摘 不 ０ 　ｈ ｒｃｅｓ字 以　 Ｍｉｒｓ ｆ Ｗｏ ｄ２ ０ 、２ Ｎｅ Ｔｉ ｓＲ ｍａ ｃｏ ｏｔ ｒ　０ ０ １ Ｐ、 ｗ　 ｍｅ　 ｏ ｎ字体 打 印 、ｏ 　 ｄ ｃ格式 存 盘 ； 注 明 作 者 中 、 文 姓名 ， 位 和联 系地 址 （ 括 电话　 请 英 单 包 和 Ｅ ｍａｌ ， ５月 ３ 日之 前 用 ｅ ｉ发 送 或 邮 寄 至 以 下 地 址 ： ― ｉ 于 ） ０ ｍａｌ 　 上海 市 斜土 路 ２ ０ ２ ０弄 ２ ５号 ， 邮编 ：０ ０ ２ 上海 交 通大 学肿 瘤 研究 所 癌基 因和相 关 基 因国 家重 点实 验 室 朱 景德 教授 收　 ２０３， 电话 ／ 真 ：２ － ６ ２ ４ ８ ， 　 ｉ ｚ ｕｉｇ ｅ ２ ｃ． ｏ 　 传 ０ １ ４ ２ ２ ５ Ｅ ｍａｌ ｈ ｊｎ ｄ ＠ １ ｎ ｃ ｒ ： ｎ 七 、 议 注册 及 住宿 登记 事 宜 ：． 会 １ 注册 费 ２ ０元 ／ ０ 每位 （ 于 会场 费 、 用 资料 和餐 饮 费等 补 贴） 食 宿费 自理 。 ， 　
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欢迎分享：优秀研究生学位论文题录展示基于肺炎衣原体核糖核酸酶HII酶促反应的单核苷酸多态性分型检测技术专　业: 生物化学与分子生物学关键词: 单核苷酸多态性 肺炎衣原体 酶促反应 分型检测 核糖核酸酶 错配碱基分类号: R374.3形　态: 共 114 页　约 74,670 个字　约 3.572 M内容阅　读: 内容摘要单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism，SNP)是一种在基因组水平上由于单个核苷酸变异引起的DNA序列多态性。SNP密度高，遗传稳定，非常适合构建最精细的遗传图谱；SNP连锁分析能够确定致病基因的变异，反映个体之间的遗传差异，为基因诊断、基因治疗、个性化药物的开发和使用提供遗传信息。目前已经发展多种SNP分型检测技术，但是很多技术需要精密仪器，而且检测成本比较高。开发操作简便的低成本SNP分型技术是众多研究者追寻的目标。
RNaseH是一类特异性降解RNA-DNA\DNA或者RNA\DNA杂合双链中RNA链的核糖核酸酶，酶切产生具有5’磷酸末端和3’羟基末端的RNA片段。根据氨基酸序列特征可将RNaseH分为两个主要家族，1型RNaseH和2型RNaseH。
衣原体(Chlamydiapneumoniae)的基因组序列分析表明衣原体没有编码1型RNaseH的基因，但有两个序列不同的编码2型RNaseH的基因：CP0645和CP0782，(表达的蛋白分别命名为CpRNaseHII和CpRNaseHIII)。克隆CpRNaseHII和CpRNaseHIII基因，表达并纯化得到有活性的CpRNaseHII和CpRNaseHIII蛋白。CpRNaseHII和CpRNaseHIII的活性有所不同。CpRNaseHII在12-bpRNA\DNA底物的多个位点发生切割，而CpRNaseHIII只在这种底物的一个位点发生切割；CpRNaseHII酶切12-bpRNA\DNA底物的最适Mg2+或Mn2+浓度分别为1mM和0.1mM，并且Mg2+的活性促进作用高于Mn2+，而CpRNaseHIII酶切12-bpRNA\DNA底物的最适Mg2+或Mn2+浓度均为10mM。CpRNaseHII能够酶切21-bpDNA-rN1-DNA\DNA嵌合双链，而且酶切效率不受核糖核苷酸类型的影响，而CpRNaseHIII不能够切割这种底物；CpRNaseHII酶切21-bpDNA-rN1-DNA\DNA底物的最适镁离子浓度是10mM。
在DNA-rN1-DNA\DNA底物的不同位点引入错配碱基，研究CpRNaseHII酶切携带错配碱基的DNA-rN1-DNA\DNA嵌合底物的酶切速率。发现当底物携带错配碱基时，CpRNaseHII酶切错配底物的酶促反应速度低于正确配对底物，即错配碱基的存在能够降低CpRNaseHII酶促反应速度。错配碱基位于底物不同位点时，CpRNaseHII酶切错配底物的酶促反应速度有很大不同。错配碱基距离核糖核苷酸越远，CpRNaseHII酶切错配底物的酶促反应速度越接近正确配对底物。错配碱基位于核糖核苷酸位点(0)或者位于紧挨核糖核苷酸的脱氧核糖核苷酸位点(-1或者+1)时，CpRNaseHII酶切错配底物的酶促反应速度最低。因此CpRNaseHII酶切错配底物的酶促反应速度与错配碱基距离核糖核苷酸的相对距离成反比。
在0，-1或者+1位点引入不同的错配碱基，结果表明错配碱基位于0位点或者紧挨核糖核苷酸的5’端(-1)时，比起错配碱基紧挨核糖核苷酸的3’端(+1)，CpRNaseHII酶促反应速度受到更显著影响。不同的错配碱基位于DNA-rN1-DNA\DNA底物相同位点时，CpRNaseHII酶促反应速度不同，即错配碱基的类型与CpRNaseHII酶促反应速度有密切关系。错配碱基对CpRNaseHII酶促反应速度的影响可能是因为错配碱基的存在能够影响底物的构型，不同的错配碱基造成底物不同的构型变化，导致CpRNaseHII酶促反应速度产生很大差异。
研究表明CpRNaseHII酶切DNA-rN1-DNA\DNA嵌合底物的酶切效率不受核糖核苷酸类型的影响，且CpRNaseHII酶切核糖错配底物的酶促反应速度远远低于配对底物。根据CpRNaseHII这一特点，建立一种新型的SNP分型检测技术-CpRNaseHII酶切法，区分DNA-rN1-DNA\DNA的单碱基突变，力求达到简单检测SNP的目的。
CpRNaseHII酶切法分型SNP技术是以5’端荧光基团标记，3’端淬灭基团标记的分子信标作为检测探针，利用CpRNaseHII对检测探针酶切效率的差异导致的荧光信号的强弱来达到SNP分型检测的目的。该分型方法的探针为中间嵌合一个核糖核苷酸的DNA-rN1-DNA分子信标(cMB)。目标单链DNA分子(ssDNA)与cMB分子杂交形成正确配对或错配的CpRNaseHII底物。如果cMBs与目标单链DNA分子正确配对，CpRNaseHII切割配对底物，发出的荧光可以实时检测。第一轮酶切之后，过量的cMB分子与从酶促反应复合物中释放出来的目标单链DNA分子杂交，起始第二轮酶促反应，这样更多的荧光信号被释放出来。相反，如果cMBs与目标单链DNA分子形成的底物含有碱基错配，错配底物几乎不能或很少被酶切，目标单链DNA片段不能被有效释放出来，阻止CpRNaseHII对过量cMBs分子进一步酶切和荧光信号的积聚。因此可以根据检测的荧光信号强度对SNP位点进行分型检测。
CpRNaseHII酶切法对所有错配均可有效区分识别，它可以检测1680-nt之内的ssDNA，这些ssDNA片段的长度对SNP的分型检测没有影响。CpRNaseHII酶切法检测SNP时，目标片段拷贝数不变的情况下，增大检测探针的摩尔数，match\mismatch荧光信号比值增大，这能够提高SNP分型检测的有效性和准确性。利用CpRNaseHII酶切法对人HLA基因上的9个SNP位点进行基因分型，并且利用DNA测序技术验证CpRNaseHII酶切法分型SNP的准确性。由于cMBs设计简单，加上分型操作只是反应底物的简单添加和反应混合物的温育，因此CpRNaseHII酶切法是一种简单可行的SNP分型检测技术，可以用来做高通量的SNP分型检测..……全文目录文摘英文文摘论文说明：符号说明第一章 文献综述一、SNP分型检测方法研究二、RNase H的研究进展参考文献第二章 衣原体RNase H蛋白的酶切特性分析1.引言2.材料和方法3.结果与分析4.讨论5.小结参考文献第三章 基于衣原体RNase HII酶促反应的SNP分型技术研究1.引言2.材料和方法3.结果4.讨论5.小结参考文献附录相似论文,67页,R374.1,139页,R374 Q754,50页,R374,39页,R374,155页,R374,53页,R374 Q933,44页,R374 R322.6,37页,R374 R392.11,60页,R374 R446,26页,R374 R563.1,49页,R374 R691.301,92页,R374.1,40页,R374.1,34页,R374.1,54页,R374.1,35页,R374.1,56页,R374.1,50页,R374.1,33页,R374.1,91页,R374.1中图分类:
> <font color=@4.3 > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学） > 衣原体属
& 2012 book.