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Re:【求助】HPLC 峰形总是拖尾是什么原因?
最近我在做HPLC时,出来的峰形总是拖尾,请教大家这是什么原因呢?跟流动相有关系吗?有什么好的解决方法吗?望大家不吝赐教,谢谢!换一个新的柱子试试，如果还拖尾，那就调整一下流动相。目前条件下我们的柱子不能换,如果流动相调过之后仍然拖尾,需要用什么方法来解决,流动相里面需要加入什么东西吗?谢谢!峰拖尾原 因
1、筛板阻塞
1.a、反冲色谱柱 b、更换进口筛板 c、更换色谱柱
2、色谱柱塌陷
2.填充色谱柱
3.a、使用更长的色谱柱 b、改变流动相或更换色谱柱
4、流动相PH选择错误
4.调整PH值。对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰
5、样品与填料表面的溶化点发生反应
5、a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂b、更改色谱柱还有进样量过大也有可能 ，不过一般都是柱子的问题，最好更换一根，或者就是按照柱子的保存条件进行小流速冲洗过夜1.用的流动相是什么？要测的成分是什么？酸性还是碱性？2.如果要测酸性成分的话，流动相中就要加一些算，仅用甲醇-水或是乙腈-水就是容易拖尾；如果酸的浓度不合适的话也容易拖尾，但要提醒一下，用酸的话，进液相前要测PH值，以免PH值过低而损坏柱子，一般柱子的PH值范围2-8，但是安全范围是3-7，有些柱子是耐酸的，有些是耐碱的，具体要看你柱子说明书。3.如果用酸的话，大多都用是是冰醋酸，磷酸，浓度自己摸索，冰醋酸为弱酸，浓度也PH值也不会太低，但是分离效果不如磷酸好，磷酸是中强酸，可能PH值要些，具体条件还要你自己来摸索把4.如果换了柱子，用酸水还是怎么分也拖尾的话，可以考虑在酸水中加一些三乙胺来防止拖尾，效果还不错，而且不会影响你要测的酸性成分的含量。5.如果实在不行，可以考虑用磷酸盐缓冲液，峰形要比酸水好，但是如果要走梯度的话，甲醇比例不能太高，以免磷酸盐结晶堵塞柱子。6.如果测的是碱性成分，可以在流动相中加一些弱碱，比如三乙胺，氨水，当然PH值也要测的。以上仅为个人一点建议，希望对楼主有用看来柱子要处理一下了,应该不是流动向或者进样量的问题,不过还是要先排除这些,还有你的流动向含有酸,碱性成分不,调一下PH,如果还是不行,那就要把柱子拆下来处理一下,先打开两头的螺丝口,然后注入稀硝酸,用超声超一定时间,应该会解决问题的!谢谢大家了!应该是柱子的问题，我也 遇到过这样的问题，换根柱子试一下吧
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【求助】色谱柱pH适用范围
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这个帖子发布于6年零296天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
请教一下：一般所说的ODS反相色谱柱pH适用范围为2-8，指的是水相的pH范围，还是混合后的流动相的pH范围呢？谢谢！
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混合后的流动相的pH
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应该是混合后流动相的ph，但是我们一般会考虑水相中流动相的ph，如果水相ph值太高或太低，超过色谱柱的承受范围，我们一般也不用的！！！
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水相的pH和混合有机相之后的pH值是差不多的
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我的水相pH是7.3，混合后的有机相是8.15。
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反问：分离是有水相分离还是混合以后的梯度分离？
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混合后的，但我们一般考虑水相的，不过比如色谱柱的范围是2-8。我们水相PH值不会超过7.8
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一般都是指混合后的，加有机相之后pH一般都会有变化，至于变多少就与具体的试剂种类和比例有关了
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举例：1、CAPCELL PAK(属于ODS)日本资生堂Acceptable pH range for columns Bonding group TypeAcceptable pHbonding group：Type ACR； Acceptable pH：1~10bonding group：Type UG、MC、AG； Acceptable pH：2~10bonding group：Type SG、AQ； Acceptable pH：2~9以上pH指的是流动相最终得pH值2、shim-pack VP-ODS 日本岛津column shim-pack VP-ODSdimensions：各种规格storage solvent：70% methanolpH range：2~7.53、Agilent TechnologiesEclipse XDB-C1 can be used with basic,neutral or acidic compounds.Ionizable compounds(basic,acidic)generally are best separated at pH~3 with this column.However,Eclipse XDB-C18 is especially suited for separating basic compounds when intermediate pH(4~8)must be used to maintain compound stability or to obtain desired band spacing(selectivity).
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当然是混合后的PH值了。
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【求助】C18柱的PH适用范围
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这个帖子发布于8年零124天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
小生最近在做一个单方制剂的质量标准。遇到点问题，想请教大家！我做的药是个盐酸盐，拖尾很严重，三乙胺的量已经加到3%，拖尾因子为1.5左右，再增加三乙胺的量对峰形没有改善。不知道这样行不行？现在水相的PH值已调到6，加上有机相（50：50），PH在7左右，这种碱性较高的流动相很损伤柱子，不知道是不是因为这个原因，使我跑的图谱的重现性很差?保留时间有时相差1.5min.而且有两个挨在一起的杂质有时分的开，有时又包在一起，我想不通是怎么回事，流动相没有变，柱压也很稳，现在就怀疑是不是因为流动相太碱，是硅胶融化了？（我用的柱子是菲罗门C18，常规柱）拜托各位大虾提点宝贵意见！
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首先LZ应该查下你使用的色谱柱的PH适用范围，虽然都是C18，但是不同厂家的柱子，它的耐酸值是不同的！另外，由于你做的是盐酸盐，个人认为你的流动相的PH值应为碱性，而且碱性可能需较强，这样保留会比较好。所以建议你找一款能耐碱性的色谱柱，这种柱子现在市面上很多，可以咨询一下相关的色谱柱厂家，如迪马、非罗门、agilent等。
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谢谢解答！我用的是菲罗门，因为这根柱子的说明书找不到了，应该不是宽范围的柱子。我现在的流动相PH是在规定范围内，就是怕碱了点对柱子不好，使硅胶慢慢溶解了，所以重复性不好
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我以前做过一个盐酸盐的样品，需要的流动相ph到了7.6，还要再加30%的乙腈。所以用了agilent的一款plus的柱子，可以适用2~9，建议可以试试。
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谢谢！我们实验室没有这种柱子，要买的话有点困难哦！
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谢谢！我们实验室没有这种柱子，要买的话有点困难哦！
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那么你就找一款你们实验室里有的PH宽范围的柱子。如果固定相不合适，那么其他的色谱条件再调整都是 没用的。
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你有没有咨询菲罗门的技术工程师呢？他们没有给你什么好的建议吗？
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Agilent不同标号有适应不同pH的柱子。c18sb耐酸 C18 extend 耐碱 还有许多别的有特色的柱子。
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建议你用缓冲液（调节不同的pH）做水相试试。
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液相色谱柱的选择、使用、维护和常见故障及排除
核心提示： 液相色谱柱的选择、使用、维护和常见故障及排除
液相色谱的柱子通常分为正相柱和反相柱。正相柱大多以硅胶为柱，或是在硅胶表面键合-CN,-NH3等官能团的键合相硅胶柱；反相柱填料主要以硅胶为基质，在其表面键合非极性的十八烷基官能团(ODS)称为C18柱，其它常用的反相柱还有C8,C4,C2和苯基柱等。另外还有离子交换柱，GPC柱，聚合物填料柱等。本文重点介绍反相色谱柱的选择和使用：
&一、反相色谱柱的选择
&1．柱子的pH值使用范围　　
反相柱优点是固定相稳定，应用广泛，可使用多种溶剂。但硅胶为基质的填料，使用时一定要注意流动相的PH范围。一般的C18柱pH值范围都在2-8，流动相的pH值小于2时，会导致键合相的水解；当pH值大于7时硅胶易溶解；经常使用缓冲液固定相要降解。一旦发生上述情况，色谱柱人口处会塌陷。同样填料各种不同牌号的色谱柱不尽相同。如果流动相PH较高或经常使用缓冲液时，建议选择pH范围大的柱子。
2．填料的端基封尾(或称封口)　　
把填料的残余硅羟基采用封口技术进行端基封尾，可改善对极性化合物的吸附或拖尾；含碳量增高了，有利于不易保留化合物的分离；填料稳定性好了，组分的保留时间重现性就好。如果待分析的样品属酸性或碱性的化合物，最好选用填料经端基封尾的色谱柱。
二、液相色谱柱的使用　　
色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。在做柱性能测试时要按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同。
1、样品的前处理　　a、最好使用流动相溶解样品。　　b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不 可逆吸附的杂质。　　c、使用0.45&0.8&m的过滤膜过滤除去微粒杂质。
2、流动相的配制　　
液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：　　a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。　　b、流动相与样品不产生化学反应　　c、流动相的黏度要尽量小，以便得到好的分离效果；降低柱压降，延长泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。　　d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。　　e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。 & &　　f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。　　
3、流动相流速的选择　　
因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的色谱柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。对内径为4.6mm的色谱柱，流速一般选择1mL／min，对于内径为4.0mm柱，流速0.8mL／min为佳。　　当选用最佳流速时，分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量)。注意：　　a．含水流动相最好在实验前配制，尤其是夏天使用缓冲 & & & 溶液作为流动相不要过夜。最好加入叠氮化钠，防止细菌生长。　　b．流动相要求使用0.45&0.8&m滤膜过滤，除去微粒杂质。　　c．使用HPLC级溶剂配制流动相，使用合适的流动相可延长色谱柱的使用寿命，提高柱性能。
三． 色谱柱的维护
1. 色谱柱的平衡　　
反相色谱柱由工厂测试后是保存在乙腈/水中的。新柱应先使用10－20倍柱体积的甲醇或乙腈冲洗色谱柱。请一定确保您分析样品所使用的流动相和乙腈/水互溶。 每天用足够的时间以流动相来平衡色谱柱，您就会在处理问题方面获得最大的&补偿&，而且您的色谱柱的寿命也会变得更长！操作步骤：　　a. 平衡开始时将流速缓慢地提高，用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂流速如果较低，则需要较长的时间来平衡)　　b. 如果使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水&过渡&即每天分析开始前必须先用纯水冲洗30分钟以上再用缓冲盐流动相平衡； 分析结束后必须先用纯水冲洗30分钟以上除去缓冲盐之后再用甲醇冲洗30分钟保护柱子。
2． 色谱柱的再生　　
长期使用的色谱柱，往往柱效会下降(柱子的理论塔板数减低)。可以对色谱柱进行再生，在有条件的实验室应使用一个廉价的泵进行柱子的再生。　　　　
建议用来冲洗柱子的溶剂体积：　
　色谱柱尺寸 & 柱体积 & 所用溶剂的体积 　　
125-4mm & &　 1.6mL & &　 30mL　　
250-4 mm & &　 3.2mL & 　 60mL　　
250-10mm & 　 20mL & 　 & 400mL 　　
选择再生方法：　　极性固定相(如Si，NH2* ，DIOL基色谱填料)的再生：　　正庚烷&氯仿&乙酸乙酯&丙酮&乙醇&水**　　非极性固定相(如反相色谱填料RP－18，RP－8，CN等)的再生：　　 水&乙腈&氯仿(或异丙醇)&乙腈&水注意：　　a. 在对-NH2改性的色谱柱进行再生时，由于-NH2可能以铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0.1mol/L的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。 　　b. 0.05mol/L稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱，如果简单的用有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，在水洗后加用0.05mol/L稀硫酸冲洗非常有效。
3. 色谱柱的维护 　　
a．使用预柱保护分析柱(硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度)　　
b．大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2－7.5，尽量不超过该色谱柱的pH范围　　
c．避免流动相组成及极性的剧烈变化　　
d．流动相使用前必须经脱气和过滤处理　　
e．如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕柱子冲洗干净，并保存于甲醇或乙腈中　　
f．氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性，故使用时要注意，柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂，以避免腐蚀。
编辑：songjiajie2010
食品实验室技术、实验室管理资料分享
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氨基柱的使用维护保养
我们购买的安捷伦ZORBAX系列的4.6*250mm，5um的氨基柱，使用的流动相为乙腈和磷酸二氢钾的混合溶液，柱子的使用寿命非常短，请问怎样去延长我柱子的使用寿命。
帖子永久地址：<input type="text" onclick="this.select();setCopy('氨基柱的使用维护保养\nhttp://www.yaoq.net/thread--1.html', '帖子地址已经复制到剪贴板您可以用快捷键 Ctrl + V 粘贴到 QQ、MSN 里。');" value="http://www.yaoq.net/thread--1.html" size="40" class="px" style="vertical-align:" />&<button type="submit" class="pn" onclick="setCopy('氨基柱的使用维护保养\nhttp://www.yaoq.net/thread--1.html', '帖子地址已经复制到剪贴板您可以用快捷键 Ctrl + V 粘贴到 QQ、MSN 里。')">推荐给好友
1. 氨基柱既可以正相使用，也可以反相使用，但是要注意到的是：正相溶剂和反相溶剂往往是不互溶的，正常情况新氨基柱保存在正相环境中， LUNA 氨基柱保存在正己烷-乙腈（99：1）中。
2. 正相使用清洗与保存
2.1 收到柱子后，如果使用正相的方法，可直接用流动相平衡。用完后保存在异丙醇或正己烷中。
2.2 推荐先用正己烷-乙腈（99：1）以0.5ml/min的流速冲10倍柱体积，再根据流动相选用极性相近的氯仿或二氯甲烷以相同的流速冲10倍柱体积，最后换成流动相。
2.3 正相使用时，不宜分析含醛基、羰基的化合物，不可用于还原糖的分析；流动相要彻底脱气，并不得含有羰基化合物和过氧化物（质量不好的乙醚、四氢呋喃含有少量）。
2.4任何时候更换流动相时都要确保新流动相与柱子原保存液可互溶！
3. 反相使用清洗与保存
3.1 由于新的LUNA 氨基柱保存在正己烷-乙腈（99：1）中，与反相流动相是不互溶的，因此如果使用反相的方法，必须用异丙醇冲洗仪器管路，除去管路中的乙腈，甲醇或水，再必须用至少20倍柱体积的异丙醇冲洗过渡（约3h，0.5mL/min），以除去正相保存溶液。过渡过程中注意因异丙醇粘度较大，会导致柱压很高，适当调低流速即可。
再用至少10倍柱体积95％水-5％乙腈（或甲醇）冲洗（不含缓冲盐的流动相可省去），最后用流动相平衡。
用完后洗柱时，必须先用95％水冲洗至少10倍柱体积，除去所用缓冲盐（不含缓冲盐的流动相可省去）。然后保存于乙腈/水（80：20）溶液中。长期不用的话，建议用异丙醇保存。
3.2 任何时候更换流动相时都要确保新流动相与柱子原保存液可互溶，并不会导致盐结晶！
4. 反相使用时色谱柱的再生
& &&&以0.5ml/min的流速用30倍柱体积的pH10.0的氨水或氢氧化钠水溶液冲柱子（注意pH值切不可超过11.0），立即用水（ 0.5ml/min的流速，30倍柱体积）冲洗，再乙腈/水（80：20）溶液冲洗保存。
& & 5. 其它
5.1 反相条件下使用时，要特别注意控制pH值范围，pH值越低越有发生水解的危险，流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。LUNA 氨基柱pH范围为1.5-11.0，能耐100％水。
5.2 有一种情况是，当使用氨基柱进行酸性物质的分析时，酸性物质的存在意味着质子的存在，可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化，导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。建议：用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗该柱（冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨），之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1％。
4. 反相使用时色谱柱的再生
& &&&以0.5ml/min的流速用30倍柱体积的pH10.0的氨水或氢氧化钠水溶液冲柱子（注意pH值切不可超过11.0），立即用水（ 0.5ml/min的流速，30倍柱体积）冲洗，再乙腈/水（80：20）溶液冲洗保存。
& & 5. 其它
5.1 反相条件下使用时，要特别注意控制pH值范围，pH值越低越有发生水解的危险，流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。LUNA 氨基柱pH范围为1.5-11.0，能耐100％水。
5.2 有一种情况是，当使用氨基柱进行酸性物质的分析时，酸性物质的存在意味着质子的存在，可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化，导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。建议：用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗该柱（冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨），之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1％。
以上是一个氨基柱的厂家工程师提供的，你可以参考一下，基本上这种可用于正相也可用于反相的氨基柱是保存在正相体系的，但最好和厂家确认一下~问一下维护保养的注意事项。我们也在用氨基柱，也比较头疼柱子寿命的事，有机会多多交流~
本帖最后由 怡然自乐 于
13:21 编辑
我咨询过另一家氨基柱厂家的工程师，对方认为磷酸盐浓度高的话，操作结束后水洗时间半小时是不够的，建议洗一个小时
我咨询过另一家氨基柱厂家的工程师，对方认为磷酸盐浓度高的话，操作结束后水洗时间半小时是不够的，建议洗 ...
非常感谢，以后我们会注意
非常感谢，以后我们会注意
以后多多交流，我们这么认真的对待，寿命也还是很短的，应该还是有我们不了解的问题存在。
就是啊，这一直是让我们比较头痛的问题。
有些氨基柱不耐受水，用才纯水或低浓度水去冲洗会水解
有些氨基柱不耐受水，用才纯水或低浓度水去冲洗会水解
能否指点一下，哪家的氨基柱比较耐水？
能否指点一下，哪家的氨基柱比较耐水？
每一家都有耐水和不耐水的，买的时候好好问问！我用的就是Waters 不耐水的！
每一家都有耐水和不耐水的，买的时候好好问问！我用的就是Waters 不耐水的！
那你们清洗的时候，水的比例是多少呢~，
没有用水哈！我们的流动相没有盐
没有用水哈！我们的流动相没有盐
流动相没有盐是蛮好的，我觉得我们使用寿命短，很大的原因是清洗时水解~
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