土壤中的2-甲基萘组蛋白甲基化检测方法法是什么

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-03-17 01:15 标签： dna甲基化的检测方法
您现在的位置：>>> 正文
1-甲基萘纯化方法
本篇文章由专业生化试剂供应商上海岚兴生物为您提供.&用氯化钙干燥数天或者用氧化钡长时间回流干燥。通过玻璃单环填充的柱子从钠中分馏。在甲醇中通过溶解进一步提纯并且在甲醇中通过加入饱和的苦味酸溶剂使苦味酸盐络合物沉淀。用甲醇把苦味酸盐结晶之后，再将其溶解在苯中，并用lO%的氢氧化锂溶液萃取直到无色。真空下苯蒸发就得到1-甲基萘[Kloetzel and HerzogJ Am Chem Soc 72 ]。尽管如此，苦味酸盐和收敛酸盐络合物都不能很好地分离1-甲基萘和2-甲基萘。为了达到这个目的，将2-甲基萘(10.7g)溶于95%乙醇(50mL)中，再用1，3，5-三硝基苯(7.8g)使其沉淀，并且络合物用甲醇结晶(熔点153～153.5℃，2-甲基的异构体熔点是124℃)。[另一种方法是可以在热的冰醋酸中用2，4，7-三硝基芴酮来沉淀，其衍生物(163～164℃)从冰醋酸中重结晶]。1-甲基萘能够再生：将无水苯中的络合物溶液经过一个15in的活化氧化铝柱子，并用苯一石油醚溶液洗涤，直到硝基化合物的色带转移到接近柱的末端。该络合物用锡和乙酸一盐酸还能分解，随后用乙迷和苯萃取；将提取物分别用稀盐酸、强碱性的次磷酸钠、水、稀盐酸和水连续洗涤[Soffer and StewartJ Am Chem Soc 74 567 1952]。用蒽通过区域熔化能够提纯该络合物。
关注本网官方微信 随时阅权威资讯
全年征稿 / 资讯合作
联系邮箱：
版权与免责声明
凡本网注明“来源：中国化工仪器网”的所有作品，版权均属于中国化工仪器网，转载请必须注明中国化工仪器网，，违反者本网将追究相关法律责任。
本网转载并注明自其它来源的作品，目的在于传递更多信息，并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性，不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时，必须保留本网注明的作品来源，并自负版权等法律责任。
如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起一周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。
监测药物、毒素等物质在体内的实时动态反应一直
第十七届中国国际石油石化技术装备展览会于-22日在北京?中国国际展览中心（
“十三五”国家科技规划指出，应加强平台建设系统布局，形成涵盖科研仪器、科研设施、科
我国是仪器仪表行业规模最大、品种最齐全、综合实力最强的一个国家，尽管我国仪器仪表还土壤中石油类分析方法
来源/作者：中国标准物质网　　日期：
一、适用范围本方法适用于土壤样品中类的测定。二、方法摘要(1) 受石油污染的土壤（或底质），常用氯仿提取，挥发去氯仿，于60℃恒重后即得氯仿提取物。能反映有机污染状况。(2) 氯仿提取物用热乙醇-氢氧化钾液处理，使有机酸、腐殖酸、油脂等皂化后，以石油醚萃取。其非皂化物进入石油醚层，如果需测非皂化物总量，则赶去石油醚后称重。也可用非分散红外光度法于3.4 μm波长处测定吸光度。(3) 在红外分光光度法中，石油类被定义为经四氯化碳萃取而不被硅酸镁吸附，在波数为2 930 cm -l、2 960 cm -1和3 030 cm-1处全部或部分谱带处有特征吸附的物质。三、干扰(1) 非分散红外光度法具有一定的选择性，所有含甲基、亚甲基的有机物都将引起干扰。对动、植物性油脂以及脂肪酸物质引起的干扰，可采用预分离方法去除，但要加以说明。(2）当萃取液中石油类正构烷烃、异构烷烃和芳香烃的比例含量与标准油差别较大时，非分散红外光度法测定误差也比较大，需采用红外分光光度法测定。四、仪器和设备(1) 分析天平。(2）恒温箱。(3) 恒温水浴埚。(4）分液漏斗。(5）干燥器。(6）非分散红外测油仪：能在2 930 cm-1 (3.4 μm）的近红外区进行操作、测定。(7) 红外分光光度计：能在2
cm-1之间进行扫描操作，并配有适当光程的带盖石英比色皿。(8）玻璃层析柱，内径10 mm，长约200 mm。五、试剂(1) 氯仿。(2) 0.5 mol/L氢氧化钾一乙醇液；称取28 g氢氧化钾，用少量水溶解后，以95％乙醇定容至1 000ml。(3）石油醚：将石油醚(30-60℃）重蒸馏，取40-42℃馏分。(4) 无水硫酸钠：在高温炉内300℃加热2h，冷却后装入磨口玻璃瓶中，于干燥器内保存。(5）标准油品：15号机油或20号重柴油。(6) 油的标准贮备液：准确称取100.0 mg 15号机油或20号重柴油，用四氯化碳溶解并在棕色容量瓶中定容至 100 ml，摇匀。此液含油为1 mg/ml，置于冰箱中保存备用。(7）油的标准使用液：准确吸取1.00 ml油标准贮备液，再用四氯化碳稀释定容为10 ml，摇匀。此溶液含油为100μg/ml。(8）四氯化碳：重蒸馏。(9) 硅酸镁：60-100目，取硅酸镁于瓷蒸发皿中，置高温炉内500℃加热2h，在炉内冷却至200℃后，移入干燥器中冷却至室温，于磨口玻璃瓶内保存。使用时，称取适量的干燥硅酸镁于磨口玻璃瓶中，根据干燥硅酸镁的重量，按硅酸镁占6％的比例加适量的蒸馏水，密塞并充分振荡数分钟，放置12h后使用。六、样品的采集、保存和处理土壤样品的采集参照土壤监测技术规范。七、步骤（一）提取(1) 氯仿提取物：准确称取通过0.25 mm筛孔土样25 g，置于带塞磨口锥形瓶中，加50 ml氯仿，加盖，轻轻振摇1-2 min；放置过夜。次日，将锥形瓶置于50-55℃水浴上热浸1h（开始时注意打开盖放两次气）；取下锥形瓶过滤，滤液接收于已知重量的100 ml烧杯中。土样再用氯仿热浸两次，每次使用氯仿约25 ml，在水浴上加热半小时。每次浸提液分别流入烧杯中。然后把烧杯放在通风橱中55-58℃水浴上，通氮气或通风浓缩至干，擦去外壁水汽，置于60-70℃烘箱中4h，取出于干燥器中冷却半小时后称重，增加的重量即为氯仿提取物。(2) 非皂化物：如果需要测定非皂化物，向氯仿提取物加入50 ml 0.5N氢氧化钾一乙醇液，盖上表面皿，于65-75℃水浴上皂化水解1h，并不时搅拌。皂化完毕取下烧杯，将皂化液转移到250 ml分液漏斗中，用50 ml水、50 ml石油醚分别洗烧杯，洗液并入分液漏斗中。加塞，振摇1-2 min（开始时注意排气2-3次）静置分离，下层水相再用25 ml石油醚提取1次，合并两次石油醚提取液，用水洗2-3次，每次加水50 ml。振摇1 min（注意放气）。萃取物作非皂化物总量测定。（二）测定1．重量法测定非皂化物总量将以上石油醚萃取物放入盛有15g无水硫酸钠的具塞磨口锥形瓶中，加塞轻轻摇动，放置片刻后，滤入己知重量的烧杯中，于通风橱中在40-42℃水浴上通氮气或通风浓缩至干，擦去外壁水气，置于60-70℃烘箱中烘4h，取出于干燥器中冷却半小时后称重。增加的重量即为非皂化物。氯仿提取物即总烃量 (mg/kg) =W/M×1000非皂化物（mg/kg)=W/M×1000式中：W――氯仿提取物或非皂化物重量，M一―土样重量，g。2．红外分光光度法测定（1)试液制备将皂化后的石油醚萃取液在通风橱中于40-42℃水浴上通氮气或通风浓缩至干，于65-70℃烘箱中烘半小时，冷却后加25 ml四氯化碳溶解。(2）吸附净化1) 吸附柱法：将玻璃层析柱出口处填塞少量用四氯化碳溶剂浸泡并晾干的玻璃棉。将处理好的硅酸镁缓缓倒入层析柱中，边倒边轻轻敲打，填充高度为80 cm。之后使试液经过吸附柱，弃去前约5 ml的滤出液，余下部分接入玻璃瓶用子测定石油类。2）振荡吸附法：只适合于通过吸附柱后测定结果基本一致的条件下使用。本法适于大批量样品的测量。称取3g硅酸镁吸附剂，倒入50 ml磨口三角瓶，加入试液，密封塞。将三角瓶置于振荡器上，以大于200次/min的速度连续振荡20 min，之后经玻璃砂芯漏斗过滤。滤出液接入玻璃瓶用于测定石油类。(3）测定标准曲线的绘制：吸取标准油使用液0.00 ml、0.50 ml、1.00 ml、1.50 ml、2.00 ml、2.50 ml，用四氯化碳稀释至25 ml，摇匀，即为0.0 μg/ml、2.0 μg/ml、4.0 μg/ml、6.0 μg/ml、8.0μg/ml、10 μg/ml的系列标准液，使用适当光程的比色皿，从2 700-3 200 cm -1进行扫描，在扫描区域画一直线做基线，测量在2 930 cm-1处的最大吸收峰值，并用吸光度减去该点基点的吸光度。以标准油使用液的吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制校准曲线。样品测定，按标准曲线绘制方法测定经硅酸镁柱净化后试液，从标准曲线上查得石油类物质含量。3．非分散红外测油仪测定(l) 试液制备：同红外分光光度法。(2）吸附净化：同红外分光光度法。(3) 测定：按照仪器规定调整校正仪器，根据仪器的测量步骤，测定经硅酸镁柱净化后试液中石油类的含量。
【关键词】氯仿 红外分光光度法 石油

我要回帖

更多关于 dna甲基化的检测方法 的文章

 

随机推荐