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About AizhanKIAA1199基因的研究进展--《内蒙古医学院学报》2010年S3期
KIAA1199基因的研究进展
【摘要】：随着人类基因组学进入了后基因组计划,研究人类基因组所蕴藏的遗传信息,探索其具有的功能成为重要的方向之一。HUGE蛋白质数据库的建立正式这个方向的代表。它具有代表性的KIAA基因家族因其编码一些重要的蛋白而为人重视,其中KIAA1199基因因其与多种肿瘤的发生、发展密切相关而备受关注。本文就KIAA1199基因的结构、认识、研究新进展而作一综述。
【作者单位】：
【关键词】：
【基金】：
【分类号】：R341【正文快照】：
2001年公布的人类基因组图谱及初步分析结果表明,人类基因组学研究已经取得了巨大的成就。随后人类的后基因组计划,将探索基因的遗传信息具有的功能;蛋白质组学的功能研究是其最重要的研究方向之一[1]。1994年起Kazusa基因研究中心开始建立了一个HUGE蛋白质数据库(human unide
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京公网安备75号KIAA0008基因与肝细胞癌侵袭表型的关系及其机制研究--《复旦大学》2004年博士论文
KIAA0008基因与肝细胞癌侵袭表型的关系及其机制研究
【摘要】：目的 KIAA0008基因是复旦大学肝癌研究所(以下简称“我所” )前一时期通过基因芯片技术发现的与肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)侵袭转移潜能高度相关的候选基因之一,可能在HCC侵袭转移中起重要作用。本课题进一步验证此基因与HCC侵袭转移潜能的关系,并探讨其作用机制。 方法 用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测27例HCC手术标本中KIAA0008基因的表达水平,并采用更精确的荧光定量实时RT-PCR(Real-time RT-PCR)作定量分析;27例HCC中有23例伴有相邻无瘤肝组织标本,5例还伴有肝内转移灶标本;根据临床病理学指标,将27例HCC分为高、中、低侵袭性三组,对不同侵袭性HCC之间KIAA0008基因的表达水平进行比较分析。为验证HCC临床标本中的检测结果,采用实时RT-PCR检测我所建立的遗传背景相同,而侵袭转移潜能逐级升高的三株HCC细胞系(MHCC97L、MHCC97H及HCCLM3)中KIAA0008基因表达水平的差异。为进一步证实KIAA0008基因的表达与HCC侵袭性的关系,利用真核表达质粒载体pIRES2-EGFP构建包含KIAA0008基因全长序列的重组表达质粒载体,以阳离子脂质体转染试剂LipofectamineTM 2000转染MHCC97L细胞系(其KIAA0008基础水平较低),以空质粒pIRES2-EGFP转染作为对照,采用实时RT-PCR检测重组质粒转染后KIAA0008基因表达水平的改变;通过细胞增殖实验,克隆形成实验以及体外Matrigel侵袭实验,研究重组质粒转染对MHCC97L细胞增殖与侵袭能力的影响。为探讨KIAA0008基因影响HCC侵袭性的可能机制,特别是其对细胞周期的影响,利用真核表达质粒载体pEGFP-C3构建包含KIAA0008基因全长序列的第二种重组表达质粒载体,以阳离子脂质体转染试剂LipofectamineTM 2000转染HCCLM3细胞系,同时以空质粒pEGFP-C3转染作为对照,在激光共聚焦显微镜下观察融合蛋白EGFP-KIAA0008在细胞内的分布情况;通过不同的方法将HCCLM3细胞同步化于细胞周期的各个不同阶段后,以流式细胞仪检测同步化效果,并以实时RT-PCR检测KIAA0008基因在细胞周期的各期中的表达水平。 结果 HCC组织中KIAA0008基因的表达水平显著高于无瘤肝组织(1.05E-3 vs. 0.397E-3, 中位数, Z=-3.83, P0.001);高侵袭性HCC显著高于低侵袭性HCC(1.29E-3 vs. 0.162E-3, 中位数,Z=-3.14,P=0.002)。在MHCC97L、MHCC97H和HCCLM3三株细胞系中,KIAA0008基因的表达水平随其侵袭与转移潜能的逐级提高也相应的逐步增高,其表达水平在MHCC97H细胞系中高于MHCC97L细胞系,但差异尚不具有统计学意义(P=0.324),在HCCLM3细胞系中显著高于MHCC97L与MHCC97H细胞系(P0.001)。经重组表达质粒载体pIRES2-EGFP-KIAA0008转染后,MHCC97L细胞中KIAA0008基因的表达水平明显增高,可明显促进MHCC97L细胞的增殖能力(1.79±0.06 vs. 0.96±0.10,均数±标准
差; P0.001),克隆形成能力(14.4±3.97 vs. 8.6±2.40,均数±标准差;P=0.024)以及体外侵袭能力(18.8±5.31 vs. 11.8±3.34,均数±标准差;P=0.037)。激光共聚焦显微镜观察显示:在pEGFP-C3-KIAA0008质粒转染的HCCLM3细胞中,EGFP-KIAA0008融合蛋白集中分布于胞膜与胞核,特别是细胞核;而在对照组中,EGFP信号均匀的分布于整个细胞,包括胞膜、胞浆及胞核。KIAA0008基因的表达水平在G0期、G1期、G1/S期及S期中均维持于较低水平,而在G2/M期,其表达水平显著增高;KIAA0008基因的表达水平与被测细胞样本中G2/M期细胞群所占的比例数之间存在显著相关性(r=0.993; P=0.001)。 结论 KIAA0008基因的过表达与HCC的侵袭表型相关;在HCCLM3细胞系中,KIAA0008的基因表达产物分布于细胞核与细胞膜,且其集中高表达于细胞周期中的G2/M期,提示KIAA0008基因可能通过对细胞周期的调节作用影响HCC的侵袭性。该推论尚需进一步的研究证实,以阐明KIAA0008基因作用于HCC侵袭性的具体机制。
【关键词】：
【学位授予单位】：复旦大学【学位级别】：博士【学位授予年份】：2004【分类号】：R735.7【目录】：
中文摘要5-7
英文摘要7-9
中文详细摘要9-13
英文详细摘要13-18
第一部分 不同侵袭表型肝细胞癌组织及细胞系中KIAA0008基因表达水平的检测22-44
一 逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肝细胞癌组织中KIAA0008基因表达水平22-29
材料与方法22-27
二 荧光定量实时RT-PCR检测肝细胞癌组织中KIAA0008基因表达水平29-36
材料与方法29-32
三 荧光定量实时RT-PCR检测不同转移潜能人肝细胞癌细胞系中KIAA0008基因表达水平36-38
材料与方法36-37
第二部分 体外转染KIAA0008基因对MHCC97L细胞侵袭性的影响44-63
一 重组表达质粒载体pIRES2-EGFP-KIAA0008的构建与扩增44-52
材料与方法44-50
二 MHCC97L细胞培养与质粒转染52-54
材料与方法52
三 KIAA0008基因转染对MHCC97L细胞生长、侵袭能力作用的体外研究54-60
材料与方法54-57
第三部分 KIAA0008基因作用机制的初步探讨63-76
一 重组表达质粒载体pEGFP-C3-KIAA0008的构建与扩增63-66
材料与方法63-65
二 HCCLM3细胞中KIAA0008基因产物的亚细胞定位66-67
材料与方法66-67
三 KIAA0008基因在不同细胞周期中的表达分析67-72
材料与方法67-69
全文总结及创新点76-77
附录:论文中涉及的质粒基因序列及测序结果77-83
博士就读期间发表及待发表文章99-100
致谢100-103
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