请教大家一个问题:空白组和对照组对照CT值偏低的原因

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荧光定量PCR空白对照没有Ct值,可是DNA电泳却有条带是什么原因
荧光定量PCR空白对照没有Ct值,可是DNA电泳却有条带是什么原因?刚刚看了一下直接导出结果显示没有CT值,可是单独选中这几个孔显示平均CT值是31.36
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有,只是导出结果的时候显示没有CT值
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【求助】探针法阴性对照和空白对照有扩增曲线的原因
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这个帖子发布于2年零277天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
阴性对照或空白对照阴性不正常,有Ct值的话就让人很揪心!对于SYBR Green法可以很好理解,但对于Taqman探针法就让人难以理解了,新合成的引物、探针,从没接触过这个基因的任何阳性,污染肯定不是,但就是它的阴性不正常,有Ct值和扩增曲线,Ct值一般在37以后,40个循环的ΔRn也有20000以上,这个是为什么呢?难道是有了恰好可以作为模板的副产物,探针退火后发生了聚合、外切,释放了荧光基团?好多巧合在一起?
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大家别保留呀,帮忙解决下这个困惑.....
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八连管做的呢还是96孔板做的?96孔板的话注意封膜时来回多压几次,八连管的话注意封盖的时候操作手法,要轻一些,防止相邻孔液体溅出!
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苯苯兔 八连管做的呢还是96孔板做的?96孔板的话注意封膜时来回多压几次,八连管的话注意封盖的时候操作手法,要轻一些,防止相邻孔液体溅出!谢谢你的回复!八联管和96孔板都用过,有出现了。我每次都是加完所有阴性,封号后再加阳性,八联管的肯定是封的很好,而且阴性和阳性不在一个地方加,阴性在安全柜里加,阳性在通风橱加的。费解的很!有没有可能是非特异性扩增的结果呢?
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做一个只加探针不加引物的实验,排除下是否存在探针不稳定情况。
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upandup2008 做一个只加探针不加引物的实验,排除下是否存在探针不稳定情况。谢谢!我下问下,这种现象有没有可能是非特异性扩增的结果?
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pcr ct值越高是否说明表达越低,△ct值越高说明表达也低,是吗?最后结果2-△△ct,这里△△ct=(CT目的-CT参比)实验-(CT目的-CT参比)对照,假如我这个实验室实验组比对照组表达高,那么△实验ct就应该小于△对照ct,出来的才是负数,那么结果2-△△ct才能是1倍以上,那也就是说△ct越小表示表达越多对吗?~~~谢谢~
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你参考一下我以前的回答
原来是ylgtwcat老师,久仰久仰。下过您的文库里的文章。您说“一般都是相对量。则用delta delta CT方法来计算。举例如下:基因A: delta CT=20-18=2。2的2次方是4。也就是说基因A的量在实验组是对照组的4倍“。结果不应该是2^-△△ct吗,您这个没有前面的负号啊,应该是2的负2次方为1/4 我的理解有错误吗?
这个负号是相对的。看你用哪个CT值作为减数,哪个作为被减数了。
千万不要死记硬背是否有减号。你看哪个CT值小,哪个的表达量就高。
我举的那个例子,就是这个情况。实验组的CT值是18, 对照组是20,差值是2. 用对照组CT减去实验组CT,不加负号的时候,表示实验组是对照组的4倍。反过来,加上负号,那就是把减数和被减数换个位子,表示对照组是实验组的1/4。
说来说去,其实表达的是一个意思。你要理解就好,千万不要死记硬背。
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如果有标准曲线,按照标准曲线计算。一般都是相对量。则用delta delta CT方法来计算。举例如下:对照组基因A的CT值为20, 内参(比如βactin)CT值15。实验组基因A CT值18,内参CT值14。首先算加样量:delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是说实验组的加样量是对照组的2倍。基因A: delta CT=20-18=2。2...
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【求助】求问Qpcr CT值过低原因
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问题已解决悬赏丁当:10
PCR结果如图,用tranzol法提取组织RNA,浓度约1000ng/ul,A260/280:1.95,用TAKALA 逆转录试剂盒按20ul体系行逆转录,cDNA浓度约为1000ng/ul,CT值29位内参基因,34为目的基因,分别做了2个重复,请大神帮忙看看
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其实你内参起峰ct应该是26左右,目的基因在31左右,你的阈值线设置的太高了个人认为有两种可能,1、rna存在降解;2、反应条件不是最佳条件,比如我们实验室最近就遇到过这样一种情况,我们买的mix中的酶在pcr循环之前要95℃10分钟激活,而之前买的mix却不需要,学生们还用之前的扩增程序pcr导致酶活性差,从而起峰晚
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CT值过低?过高吧,内参26左右这个CT值高了,不知道楼主反转了多少ng的RNA?cDNA一般的测量值都不准的,楼主你可以把RNA换成水试试,反转后的cDNA是不是依然还是1000ng/ul左右?至少我这边是这样~
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用的1ug的RNA做的逆转录
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