耐青霉素肺炎链球菌菌op试验抑菌环到底是大于10mm敏感还是大于14mm敏感

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-09-27 05:45 标签： 肺炎链球菌疫苗
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标题: 奥普托欣试验|奥普托欣试验
摘要: [奥普托欣试验|奥普托欣试验]　　1 奥普托欣（Optochin）试验原理：几乎所有肺炎链球菌对奥普托欣试验敏感，而奥普托欣试验对其他链球菌则无抑制作用。 　　2 培养基：血琼脂平板。 　　3 方法：将待检菌菌落或肉汤培养液均匀涂布于血琼脂平板上，稍干后贴上含5&g 片的Optochin纸片，35℃培养18～24h观察结果。 　　4 结果：抑菌环直径：…… [关键词:奥普托欣试验 肺炎链球菌 血琼脂 链球菌 敏感 抑菌 涂布]……
　　1.奥普托欣（Optochin）试验原理：几乎所有肺炎链球菌对奥普托欣试验敏感，而奥普托欣试验对其他链球菌则无抑制作用。 　　2.培养基：血平板。 　　3.方法：将待检菌菌落或肉汤培养液均匀涂布于血平板上，稍干后贴上含5&g/片的Optochin纸片，35℃培养18～24h观察结果。 　　4.结果：抑菌环直径：&14mm为敏感，若抑菌环直径&14mm，对此菌株应再做胆汁溶菌试验，以证实是否为肺炎链球菌。 　　5.应用：主要用于肺炎链球菌与其他链球菌的鉴别。
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电话：021-CHAPTER8；IdentificationandCharact；肺炎链球菌是一种可以在细胞内或细胞外寄生革兰氏阳；下面的试验用于在BAP平板上鉴定肺炎双球菌相及相；由于此种细菌对于相关操作人员及环境存在潜在的危险；图1.在血琼脂平板上，肺炎链球菌周围出现草绿色的；翻译人：；图2.在血琼脂平板上，肺炎链球菌生长24-28小
Identification and Characterization of Streptococcus pneumoniae
肺炎链球菌是一种可以在细胞内或细胞外寄生革兰氏阳性球菌，以单个或短链的形式存在。该菌的生长条件较为严格，最适宜生长条件为35-37℃、5%CO2。通常可以在血平板（BAP）或巧克力平板（CAP）上生长。在血平板上菌落形态较小、灰色、湿润有时候有粘液，有α溶血现象（图1）。 这种溶血特性可以将该菌与很多细菌区分开，但是无法与草绿色链球菌区别。但是该菌在培养24-28小时后，菌落形态表现为平坦、中心凹陷，而草绿色链球球菌不会出现以上变化（图2）。利用显微镜对菌落形态的观察有利于鉴别两种菌。在鉴定之前一定要分纯培养。在下列的鉴定程序中，应着重鉴别有肺炎链球菌的α溶血特性，35-37℃、5%CO2条件下培养时间<24小时经典肺炎链球菌菌落均会出现这种溶血特性。
下面的试验用于在BAP平板上鉴定肺炎双球菌相及相似菌落（图3）。肺炎链球菌可以通过同时进行革兰氏染色，触酶试验，奥普托欣敏感性试验进行鉴定，用胆盐溶解试验进行确证试验。如果这些试验鉴定是肺炎链球菌时，则进行血清分型。辅助用于鉴定肺炎链球菌分子分型方法将在第10章：PCR技术和第12章：分子技术中分别进行介绍。其他的方法见网址http://www.cdc.gov/ncidod/biotech/strep/strep-doc/index.htm.
由于此种细菌对于相关操作人员及环境存在潜在的危险，生物安全2级试验室是进行肺炎链球菌相关操作的必要条件。根据第4章的具体要求要求进行防护和操作。
图1. 在血琼脂平板上，肺炎链球菌周围出现草绿色的α溶血环（黑色箭头所指）
图2. 在血琼脂平板上，肺炎链球菌生长24-28小时后，菌落扁平、中央凹陷；而草绿色链球菌菌落中央仍然保持凸起
标本(脑脊液/血液) 接种血琼脂平板 3个鉴别试验需平行进行 挑取α溶血菌落 革兰氏染触酶试验 奥普托欣试挑取革兰氏染色阳性双球菌或 呈短链状的球菌 触酶阴性 奥普托欣敏感 (直径≥14 mm) 奥普托欣耐受 (直径<14 mm) 根据革兰氏染色、触酶试验结果鉴别相关链球菌 按肺炎链球菌进行报告 (前提为革兰氏染色阳性、触酶阴性) 胆汁溶解试验 胆汁溶解阳胆汁溶解阴按肺炎链球菌进行报告 非肺炎链球菌的α溶血性链球菌 血清型鉴别 翻译人：
Figure 3. 肺炎链球菌鉴别流程图
I. 触酶试验 触酶能够将H2O2分解为H2O和O2。O2在液体中形成气泡。触酶试验最初用于革兰氏阳性球菌间的鉴别。葡萄球菌属触酶试验阳性，而链球菌属和肠球菌属都是触酶试验阴性。 A. 触酶试验操作 1. 挑取菌落在BAP平板上35-37℃5% CO2环境下，培养18-24小时。 2. 在过夜生长的BAP平板上用无菌环挑取1个菌落涂抹在玻璃平板上。 不要将BAP的培养基成分挑取到玻璃板，因为培养基中的红细胞成分可以造成假阳性反应。 3. 吸取1ml3% H2O2 溶液滴加于玻璃板上与细菌充分混合 也可以购买商品化的双氧水。 双氧水一旦打开，应保存于4℃，拧紧瓶盖。 4. 观察细菌悬液是否立即产生气泡。 5. 试验应作阳性对照和阴性对照。已知的葡萄球菌作阳性对照，其他的如链球菌可作阴性对照。 B. 触酶试验结果判读 如果没有气泡产生，则为阴性 如果有气泡产生则为阳性（图4）。 C. 可能遇到的问题 假阳性的结果可能是在挑取菌落的时候，将平板上的红细胞带到菌落中。 D. 质量控制 试验中必须使用明确的触酶阳性、触酶阴性菌株作为质量控制。已经开启的触酶试剂每隔6个月需要用触酶阳性菌株验证有效性。
触酶阴性和触酶阳性结果。 阴性结果在滴加触酶试剂后未出现气。所有的链球菌属菌落触酶试验均为阴性。
II. 奥普托欣敏感性试验 肺炎链球菌对奥普托欣敏感。奥普托欣敏感性试验可能会将部分α溶血性链球菌误鉴定为肺炎链球菌，尽管一小部分肺炎链球菌对奥普托欣耐受。非肺炎链球菌的α溶血性链球菌对奥普托欣耐受。 A. 奥普托欣敏感性试验操作
奥普托欣纸片（P，6mm，5μg）一般采用商品化的成品。奥普托欣纸片常被称为“P纸片”，标记为“P”。 1. 细菌培养BAP平板上35-37°C，5% CO2条件下培养18-24小时 2. 用无菌取菌环挑取过夜培养的菌落接种于BAP上，划线涂布半个板。 一个平板上可以划线接种2个待检样品，但不要互相污染。 3. 将奥普托欣药敏片贴于划线涂布处，35-37°C、5% CO2过夜培养 4. 观察细菌生长情况，和抑菌环的大小。 B. 结果判读 对于6mm5μg的药敏片，抑菌环等于14mm或者大于14mm为敏感，鉴定为肺炎球菌（图5） 测量抑菌环时应拿掉平板上盖，从平板上部测量 用尺子或者卡尺进行测量抑菌环。如遇到待测细菌完全对奥普托欣耐受，测量结果记录为纸片的直径。 C. 可能遇到的问题 如果抑菌环小于14mm或者没有抑菌环，需要做胆盐溶解试验。因为肺炎球菌有时候是对奥普托欣耐受的。 D. 质量控制 新购置的奥普托欣应当用阳性菌和阴性菌进行测试，保证纸片的有效性。肺炎链球菌ATCC 49619作阳性菌，缓氏链球菌 ATCC 49456作阴性菌。
图5. 肺炎链球菌的奥普托欣敏感性检测.
左侧的缓氏链球菌对奥普托欣耐受，未出现抑菌环。右侧的肺炎链球菌对奥普托欣敏感。 III. 胆盐溶解试验 该试验能够区分肺炎链球菌和其他α溶血性链球菌。肺炎链球菌在胆盐中溶解其他的不行。2%脱氧胆酸钠溶液能够溶解肺炎链球菌的细胞壁。 A. 配置2%的脱氧胆酸钠 1. 将2克脱氧胆酸钠溶解于100毫升无菌蒸馏水中。 B. 胆汁溶解试验操作
1. 接种细菌BAP平板上， 35-37°C，5% CO2培养18-24小时 翻译人：
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