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【求助】请问Hela细胞是悬浮生长还是贴壁生长
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这个帖子发布于2年零294天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
请问Hela细胞是悬浮生长还是贴壁生长，我看的文献中是悬浮生长，但是在丁香园中有人说是贴壁生长，究竟怎么回事啊，请各位帮忙讲解一下！！！
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同学的是贴壁的
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正常培养基是贴壁的，但是可以进行别的处理让他悬浮。
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正常是贴壁生长
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关于丁香园您现在的位置是： &
天花粉蛋白抑制HeLa细胞增殖的实验研究
□ 黄益玲 黄利鸣 惠燕 鲁华
摘　要:目的研究天花粉蛋白（TCS）对人宫颈癌HeLa细胞生长的抑制作用，探讨TCS抗肿瘤的作用机制。方法采用MTT法检测TCS对Hela细胞的抑制作用，形态学观察、DNA电泳及流式细胞仪检测TCS对HeLa细胞的诱导凋亡作用。结果TCS对HeLa细胞的生长具有明显的抑制作用，显微镜下可见细胞圆缩，胞浆凝聚等凋亡细胞的形态学改变，DNA凝胶电泳呈梯级格局，流式检测出现凋亡峰，凋亡比例具有剂量和时间依赖性。结论天花粉蛋白通过诱导细胞发生凋亡而抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖。
【关键词】& 天花粉蛋白；,,hela细胞；,,细胞凋亡
　　摘要：目的研究天花粉蛋白(tcs)对人宫颈癌hela细胞生长的抑制作用, 探讨tcs抗肿瘤的作用机制。方法采用mtt法检测tcs对hela细胞的抑制作用，形态学观察、dna电泳及流式细胞仪检测tcs对hela细胞的诱导凋亡作用。结果tcs对hela细胞的生长具有明显的抑制作用，显微镜下可见细胞圆缩，胞浆凝聚等凋亡细胞的形态学改变，dna凝胶电泳呈梯级格局，流式检测出现凋亡峰，凋亡比例具有剂量和时间依赖性。结论 天花粉蛋白通过诱导细胞发生凋亡而抑制宫颈癌hela细胞的增殖。
　　关键词：天花粉蛋白；& hela细胞；& 细胞凋亡
　　experimental study of trichosanthin's effect on hela cells proliferation
　　huang yi ling,& huang li ming*,& hui yan, lu hua
　　(morphology department of three gorges university, yichang, hubei 443002,china)
　　abstract：objectiveto study the inhibitory effect of trichosanthin(tcs) on& hela cells and its anti-tumor mechanism.methodsthe antiproliferative effect of tcs on hela cells was measured with mtt assay. light microscopy was used to observe the morphology changes , dna agarose electrophoresis and fcm analysis were carried out to examine the induced apoptosis.resultsthe proliferation of hela cells was significantly inhibited by tcs, hela cells showed a serial of characteristic changes of apoptosis such as cell& volume shrinkage , chromatin& the occurrence of dna ladder& and apoptosis& rate of& hela cells was dose and time dependent. conclusion trichosanthin can inhibit the proliferation of hela cells by its induction of apoptosis.
　　key words：&& proliferation&&& 　　宫颈癌是导致妇女死亡的第二大原因，严重威胁女性身体健康。天花粉蛋白（trichosanthin,tcs）是从葫芦科植物栝楼（trichosanthin kirilouii maxim）的块根中提取出来的一种单链核糖体失活蛋白(ribosome - inactivating protein , rip)，具有多种生物学效应，主要包括免疫调节、抗肿瘤、抗病毒等作用［1］ 。目前，tcs的抗肿瘤研究主要集中在绒毛膜上皮癌、胃肠道肿瘤和白血病等方面［2～3］。本实验研究tcs对人宫颈癌hela细胞生长的抑制作用，并从诱导细胞凋亡的角度探讨其抗癌作用，为药物的进一步研究开发提供实验依据。&
　　1& 材料与方法&
　　1.1& 试剂&& mem培养基和胎牛血清（fbs）购自美国gibcobrl公司，碘化丙啶（propidium iodide ，pi）及rnase a (rna酶)为simga公司产品，噻唑蓝(mtt)购自amresco公司。二甲基亚砜(dmso)购自fluka公司，tcs购自上海金山制药厂（纯品，规格为1.2 mg/ml）。
　　1.2& 细胞培养人宫颈癌hela细胞为本室传代保存,培养于5%co2，37℃湿化孵箱中。培养基mem含10%fbs，0.1 u/l青霉素，0.1 u/l链霉素，取对数生长期细胞待用。
　　1.3& 细胞生长抑制实验采用噻唑蓝(mtt)还原法进行检测:将hela细胞接种于 96 孔细胞培养板内(每孔的细胞数为2×104个)，细胞贴壁后对照组换新鲜培养基，实验组换用含有不同浓度tcs的培养基，置 co2 培养箱内分别培养 24 ，48，72 h ，去上清，加入 mtt 溶液200 μl/孔，置 co2 培养箱内培养 4 h，去上清，每孔加入200 μl dmso ，轻度振荡后，测定 570 nm 处光吸收值。取8孔吸收值平均数，按公式细胞抑制率(%)=(1-实验组平均吸光度值/对照组平均吸光度值)×100%计算药物对细胞生长的抑制作用。
　　1.4& 细胞凋亡的检测
　　1.4.1& 细胞形态学观察& 将处于指数生长期的hela细胞以不同浓度的tcs处理后，倒置显微镜下观察hela细胞的形态改变。
　　1.4.2& dna琼脂糖凝胶电泳　胰蛋白酶消化收获实验组及对照细胞, 1 000 r/min离心5 min,pbs清洗细胞两遍, np 40溶液作用细胞沉淀,加入sds(终浓度1%)及rnase(终浓度2 μg/μl)，56℃处理2 h，蛋白酶k(终浓度2 μg/μl)37℃作用3～5 h， 加入1/10体积的3m醋酸钠及2倍体积的无水乙醇，轻轻振摇后置于-70℃冰箱中过夜, 14 000 r/min离心15 min，弃上清，用冰冷的 70％乙醇漂洗，1.2% 琼脂糖凝胶30 v电泳3～5 h，紫外观察拍照。
　　1.4.3&& 流式细胞仪检测分别离心收集对照组及实验组细胞，以含0.2%fbs的pbs清洗后加入75%冰冷的乙醇固定, 在10& 000 r/min条件下离心5 min，去乙醇，pbs洗涤两次，弃上清；用0.5 ml pbs重悬，加入等体积的细胞裂解缓冲液室温作用5&&& min，加rnase a (终浓度30 μg/ml)置37℃水浴中消化30 min，离心后再加人1m1 pi染色(终浓度50 μg/ml)避光染色30 min，以300目尼龙网滤过，上流式细胞仪检测， multicycles 软件分析结果。
　　1.5& 数据统计分析用 spss 10.0 for windows统计软件包作anov方差分析。
　　2& 结果
　　2.1& mtt法测定结果20，40和80 μg/ml的天花粉蛋白分别作用于hela细胞后，随着作用时间的延长，细胞的生长抑制率逐渐升高,且抑制率随药物浓度增加而上升, 呈一定的剂量、时效依赖性。结果见图1。
　　图1& tcs对hela细胞作用的时间-剂量曲线（略）
　　2.2& hela细胞的形态学改变& 镜下可见(×200)对照组hela细胞始终为多角形，梭形，贴壁牢固, tcs处理的hela细胞逐渐变圆, 细胞体积缩小，胞浆凝缩, 折光率增强, 呈现凋亡细胞的形态改变。结果见图2。&
　　图2& hela& 细胞形态改变（略）
　　2.3&& dna凝胶电泳图谱& 凝胶电泳分析经不同浓度的tcs（20，40和80 μg/ml）处理48 h的hela细胞dna断裂成相差约200 bp的片段，呈现凋亡细胞的梯级（ladder）格局，而对照组细胞dna无断裂现象。结果见图3。
　　图3& 凋亡细胞dna琼脂糖凝胶电泳（略）
　　2.4& 细胞凋亡的检测& 凋亡细胞在流式细胞仪直方图上可出现特征性的亚二倍体峰（sub―g1 peak）。由表1可见, 随着天花粉蛋白药物浓度的增大及作用时间的延长，凋亡细胞的比例增加，表明tcs诱导hela细胞凋亡具有时间和剂量依赖性。
　　表1& 凋亡细胞在各组标本中所占的百分比时间（略）
　　3& 讨论
　　细胞凋亡是细胞生长、发育过程中发生的一种复杂的生理过程。dunne等［4］发现肿瘤的发生与细胞凋亡的调节紊乱密切相关。有资料表明，许多抗癌药物都是通过最终触发肿瘤细胞凋亡而达到治疗的目的，有效的诱导肿瘤细胞凋亡是肿瘤治疗的新的手段之一［5］。天花粉蛋白(tcs)是一种有效并具有专一性的抗肿瘤药物，与一般化疗药物造成的肿瘤细胞和正常细胞两败俱伤的作用不同，它对人的外周血淋巴细胞、t细胞和羊膜细胞等正常体细胞影响极小［6］，具有显著优势。天花粉蛋白是ⅰ型单链核糖体失活蛋白(ribosome-inactivating protein , rip)，能进入细胞内直接使核糖体失活。tcs能够使绒毛癌细胞发生凋亡,其诱导凋亡的作用与胞内的ca2+浓度升高和活性氧基团(reactiveoxygenspecies，ros)的产生有关［7～8］。本实验将天花粉蛋白处理hela细胞后，hela细胞的生长受到明显抑制，出现凋亡的特征性改变：染色体凝聚、核碎裂等形态改变，凝胶电泳呈现典型的梯级（ladder）格局，流式结果可见特征性的亚二倍体峰，且凋亡细胞的比例随药物浓度的增高及作用时间的延长而增高。这些结果表明tcs对hela细胞具有良好的抑制作用和明显的诱导凋亡效应，并具有浓度和时间依赖性，初步显示了良好的药物开发前景。对其抗癌机理进行深入研究，有望应用于宫颈癌等肿瘤的临床治疗。
　　参考文献：
　　［1］& shaw pc ,lee km ,wong kb.recent advances in trichosanthin, a ribosome-inactivating protein with multiple pharmacological properties ［j］.toxicon.)：683.
　　［2］& 汪& 猷，金善炜.天花粉蛋白，第2版［m］.北京：科学出版社，2000.
　　［3］& 孙&
，涂水平，吴裕圻，等.天花粉蛋白诱导胃癌细胞mkn245凋亡中p53、bcl 2、 c myc蛋白表达变化［j］.上海医学，）：291.
　　［4］& dunne al,price me,mothersill c,et al.relationship between clonogenic radiosensitivity ,radiation-induced apoptosis and dna damage/repair in human colon cancer cells［j］.br j cancer.)：2277.
　　［5］& waxman dj,schwartz ps.harnessing apoptosis for improved anticancer gene therapy［j］.cancer res,)：8563.
　　［6］& 戴荣禧，徐国江，刘莲英，等. 天花粉蛋白对滋养层细胞专一损伤机制的研究［j］.实验生物学报，）：411.
　　［7］& zhang cy,gong yx,ma h,et al.reactive oxygen species involved in trichosanthin induced apoptosis of human choriocarcinoma cells［j］.biochem,3.
　　［8］& zhang cy,gong yx,ma h,et al.trichosanthin induced calcium dependent generation of reactive oxygen species in human choriocarcinomacells［j］.analyst,)：1539.
　　基金项目：湖北省教育厅重大科研项目(no.z) ......(未完，请点击下方“在线阅读”)
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金月芽期刊网 2018Hela复苏细胞为什么不贴壁?请各位高手指点一下，谢谢！_百度知道
Hela复苏细胞为什么不贴壁?请各位高手指点一下，谢谢！
我有更好的答案
Hela很容易贴壁的，不贴壁的原因可能为：1、你的培基没加血清；2、冻存细胞的程序不对导致细胞大量死亡，没有活细胞复苏时就无法贴壁；3、培养箱的温度可能出现异常
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