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子宫颈糜烂与生殖道人乳头瘤病毒感染关系
作者：李明成，张晓英，郑华&&&&作者单位：1.北华大学医学院微生物学教研室,吉林 132013； 2.吉林省吉林市中心医院妇产科； 3.吉林大学第一医院皮肤科
探讨女性生殖道感染人乳头瘤病毒基因类型及与子宫颈糜烂关系，为宫颈癌防治提供依据。方法
收集454份子宫颈糜烂标本，分成尖锐湿疣（CA）组和非CA组，采用免疫组化法和PCR技术检测人乳头瘤病毒（HPV）基因类型。结果
免疫组化法检测宫颈糜烂感染HPV阳性率，CA组为67.8%，非CA组为47.7%。PCR检测宫颈糜烂Ⅰ°、Ⅱ°、Ⅲ°感染HPV阳性率，CA组Ⅰ° 55.5%，Ⅱ° 64.7%，Ⅲ° 83.3%。非CA组Ⅰ° 32.8%，Ⅱ° 49.6%，Ⅲ° 62.3%。HPV-DNA类型以6，11，16，18，58，45，33型为主。结论
本地区宫颈糜烂患者有较高的HPV感染率，并与糜烂程度呈正相关，监测和控制女性生殖道HPV感染对宫颈癌防治具有重要意义。
【关键词】& 人乳头瘤病毒；尖锐湿疣；宫颈糜烂
基金项目： 吉林省科技发展计划项目（）
　　Study on human papilloma virus infection association with cervical erosion among female congential tract&
　　LI Ming?Cheng，ZHANG Xiao?ying,ZHENG Hua.
　　Medical College of Beihua University(Jilin 132013，China)
　　Abstract： Objective& To explore the genotype and distribution of humam papilloma viruses among cervical erosion patients，and to guide the preventing and treating cancer of uterine cervix.Methods& The cervical erosion specimens were collected and divided into two groups,the CA group and no-CA group.The immunohistochemistry assay and PCR technique were used to detect the genotypes of HPV-DNA.Results& The 76 cases (67.8%) in CA group and the 163 cases (47.7%) in no-CA group were confirmed to be HPV-DNA positive.The positive rates of HPV were Ⅰ& 55.5%,Ⅱ& 64.7% and Ⅲ& 83.3% in CAand Ⅰ& 32.8%,Ⅱ& 49.6% and Ⅲ& 62.3% in non-CA group among cervical erosion patients respectively.The genotype of HPV-DNA was 6,11,16,18,58,45 and 33.Conclusion& There is higher incidence of HPV among cervical erosion patients in the region,and the incidence of HPV has a positive association with the cervical erosion degrees.It is of paramount importance to control HPV infection and treat cervical erosion effectively for preventing and treating cancer of uterine cervix.
&&& Key words： human papilloma virus；condyloma
acuminatum；cervical erosion
　　近年来，越来越多的研究表明，病毒感染是宫颈糜烂的主要原因之一〔1〕。其中，人乳头状瘤病毒(human papilloma virus,HPV)的感染与宫颈糜烂的发生发展直接相关。HPV感染引起的尖锐湿疣（condyloma acuminatum,CA）是以生殖器、会阴和肛门为主要部位的最常见性传播疾病之一。HPV具有高度组织和宿主特异性。生殖器HPV感染有临床感染、亚临床感染和潜伏感染。临床常见的CA即为临床感染的表现，症状隐匿的亚临床感染病变不典型，需借助阴道镜检查及醋酸白试验来发现和诊断，而此型更具传染性，医学研究表明，宫颈HPV亚临床感染与宫颈癌的发生关系密切〔2〕。为了解吉林地区子宫颈糜烂患者HPV感染及基因类型分布，本研究采用免疫组化法和PCR技术对454例子宫颈糜烂患者感染HPV基因类型进行检测。现将结果报告如下。
　　1& 对象与方法
　　1.1& 临床资料&
　　取自2004年1月～2006年8月期间吉林市区三级甲等医院妇科门诊确诊宫颈糜烂患者454份标本。临床症状：白带增多，呈淡黄色脓性或带有血性，伴有腰骶酸痛及盆腔下坠痛和痛经。妇科检查：阴道分泌物多，宫颈呈不同程度的糜烂。112例女性患者在阴道镜下可见外阴、阴道及肛门周围出现大小不等、数量不一的乳头瘤状、菜花状或鸡冠状增生物；其中85例疣体位于外阴及阴道壁等处，27例在宫颈口出现疣体；醋酸白试验后可见增生物变白，乳头直立，基底融合，久不消退，符合CA诊断标准〔2〕。342例没有阴道镜可见的疣体。年龄18～72岁，平均32.1岁，病程2 d～2月，平均27 d。受检取材者均在15 d内未用抗HPV药物。
　　1.2& 试剂&
　　TaqDNA聚合酶（5u/&l）、dNTPs（大连TaKaRa公司）。链霉素抗生物-过氧化物酶(SP)超敏试剂盒和二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒（福州迈新生物技术开发有限公司）。人乳头瘤病毒（HPV通用型）单克隆抗体（美国CHEMICON公司）。
　　1.3& 取材方法&
　　外阴常规消毒，放入阴道窥器，将棉拭子(或刮板)沿宫颈鳞-柱上皮交接处顺时针旋转2～3圈，涂布在经多聚赖氨酸处理过的载玻片上，干燥，放入100%丙酮，4℃固定10 min；涂布后的棉拭子置于1 ml生理盐水混匀，置于-80℃冰箱保存。疣体活组织用血管钳摘取适量，放置保存液保存，用于组织病理学检查。
　　1.4& 免疫组化法检测HPV&
　　采用亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法（avidin biotin peroxidase complex，ABC）检测宫颈糜烂感染HPV。按试剂盒方法操作进行，判断标准为HPV定位于胞核，胞核染为棕黄色为阳性。
　　1.5& PCR检测HPV-DNA类型
　　1.5.1& 引物设计&
　　根据GenBank公布的HPV-DNA序列，设计12对HPV分型特异性引物，由大连TaKaRa公司合成。
　　1.5.2& DNA模板的制备&
　　将标本从-80℃冰箱内取出转移至1.5 ml Eppendorf管中，挤干棉拭子中的水分，10 000 r/min离心5 min，弃尽上清，在沉淀中加入50 &l DNA提取液充分混匀，100℃水浴10 min，10 000 r/min离心5 min，取上清2 &l进行PCR反应。
　　1.5.3& PCR反应&
　　在50 &l反应体系中，加入Buffer、dNTPs、引物、Taq-DNA聚合酶、模板等，经40个循环后取10 &lPCR产物与2 &l缓冲液混匀，在20 g/L琼脂糖凝胶中电泳30 min，紫外线灯下观察结果，出现与阳性对照平行的DNA带为阳性。
　　1.6& 统计分析&
　　采用SPSS软件进行分析。
　　2& 结& 果
　　2.1& CA疣体组织病理学诊断&
　　112例CA发生于会阴、阴道前庭、宫颈及肛门周围，呈菜花状、丘疹样、扁平头斑块状的生殖器疣，呈外向性生长，增生的乳头小而密集，表层细胞有角化不全或过度角化；基底层和棘细胞层增生，表皮浅层或浅中层可见有特征性的灶性分布的核周空穴细胞。
　　2.2& 免疫组化法检测2组宫颈糜烂感染HPV阳性率&
　　CA组HPV阳性率为67.8%，非CA组HPV阳性率为47.7%(&2=13.8，P<0.005)，差异有统计学意义。
　　2.3& PCR技术检测2组宫颈糜烂感染HPV类型及分布
　　CA组宫颈感染HPV阳性率：Ⅰ&55.5%（17/32），Ⅱ&64.7%（24/38），Ⅲ&83.3%（42/35）。非CA组宫颈感染HPV阳性率：Ⅰ&32.8%（17/116），Ⅱ&49.6%（60/121）。 Ⅲ&62.3%（65/105）。HPV-DNA分型：HPV-6为16.3%（74/454）、HPV-11为12.1%（55/454）、HPV-16为9.5%（43/454）、HPV-18为7.5%（34/454）、HPV-33为5.3%（24/454）、HPV-45为4.0%（18/454）、HPV-58为3.7%（17/454）。
　　3& 讨& 论
&&& 本研究结果显示，CA组的阳性率为67.8%，无CA组的阳性率为47.7%，2组感染率明显高于研究报道中HPV在正常宫颈组织中的阳性率10%～30%〔3〕，说明HPV感染与宫颈糜烂关系密切。HPV在正常妇女中有一定比例的感染率，其原因可能是HPV对正常细胞的感染为隐性感染，不一定导致细胞病变或病变太小，以至无法辨别。
&&& 目前已分出100余种HPV-DNA，其中30多种与宫颈感染和病变有关。宫颈HPV感染常发生在宫颈上皮移行区，此区域易发生鳞-柱异位病变致宫颈糜烂，HPV常通过微小糜烂面感染宫颈储备细胞或化生上皮〔3〕。根据其致病力的大小可分为高危型和低危型。HPV 6.11型主要引起皮肤黏膜的疣样病变，与CA的发病有关；而HPV 16.18型，主要引起上皮细胞的恶变，与宫颈癌的发病有关〔4〕。HPV-DNA基因型在不同国家、地区的检出率不同，与地区、人群差异有关〔5〕。本地区454例宫颈糜烂患者宫颈感染以HPV低危型6和11型为主，分别为16.3%和12.1%。高危型16，18，33，45，58型分别为9.5%，7.5%，3 5.3%，4.0%，3.7%。
&&& 流行病学研究表明，宫颈糜烂是宫颈癌的高危因素之一〔6〕，但糜烂与癌变的关系却不明确。HPV的短暂感染并不引发恶性病变的发生，数年乃至数十年的持续感染方能诱生癌变。说明HPV对细胞的致癌作用需要一个漫长的积累过程，HPV对细胞的转化是其他因素作用积累过程的前提〔6〕。我国由于年轻妇女性传播疾病发病率的增高，宫颈病变的发生率也在上升。及时治疗宫颈糜烂可有效地遏制其癌变。因此，临床上针对不同程度的糜烂选择治疗方法时，必须考虑加强宫颈糜烂患者HPV的检测，早期给予抗病毒治疗。
&&& 女性HPV感染发生的高危因素与性行为特别是多个性伴侣有关，与吸烟及口服避孕药有关，可使妇女发生HPV相关肿瘤的机率增加〔7〕。要加强生殖健康教育，对女性HPV感染高危人群加强检测，定期复查，早期诊治，积极治疗，可预防生殖道肿瘤的发生〔8〕。
【参考文献】
& 　　〔1〕Cruickshank MZ.The role of human papillomavirus in risk management［J］.Gynaecol Practice,-233.
　　〔2〕Bosch FX,Manos MM,Manoz N,et al.Prevalence of human papillomavirus in cervical cancer:a worldwide perspective［J］.J National Cancer Insti,):199.
　　〔3〕Herrero R,Castle PE,Schiffman M,et al.Epidemiologic profile of type-specific human papilloma virus infection and cervical neoplasia in guanacaste ［J］.J Infect Dis,):.
　　〔4〕李安信，尹锐，钟白玉，等.人乳头瘤病毒感染检测及其临床意义［J］.中华实验和临床病毒学杂志，）：49-51.
　　〔5〕Munoz N.Epidemiologic classification of human papilloma virus types associated with cervical cancer［J］.N Engl J Med,):518-527.
　　〔6〕Hernadi Z,Gazdag L,Szoke K,et al.Duraton of HPV-associated risk for high grade cervical intraepithelial neoplasia［J］.Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol,):114-119.
　　〔7〕Rocha-Zavaleta L,Yescas G.Human papilloma virus infection and cervical ectopy［J］.Int J Gynaecol Obstet,-266.
　　〔8〕王阳，赵晶.人乳头瘤病毒感染与宫颈癌发生关系的探讨［J］.中国公共卫生，）：.
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&HPV病毒感染能否药物清除？
HPV病毒感染能否药物清除？
& &由于人们物质生活水平提高，健康意识增强，很多女性都定期进行身体检查，因此“HPV”这一词引起了广大女性的强烈关注，现本文就HPV相关知识进行宣教。&&&HPV是什么东西？人乳头瘤病毒（human&papillomavirus&vaccination，简称HPV）是一种DNA病毒，有多种基因型，目前被确定有120余种基因型，其中约30种涉及生殖道感染。根据生物学特征和致癌潜能，HPV分为高危型和低危型，高危型如HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68等与癌及癌前病变相关，其中HPV&16和HPV&18可导致70%的宫颈癌，HPV&45和HPV&31分别导致5%和10%的宫颈癌；低危型如HPV6、11、42、43、44等主要与轻度鳞状上皮损伤和泌尿生殖系疣、复发性呼吸道息肉相关，其中90%生殖道疣及96%的尖锐湿疣与HPV&6和HPV&11感染有关，但不会导致癌变。HPV具有高度宿主特异性，主要感染人体特异部位皮肤、粘膜，最常见就是口咽部和肛门生殖道。性接触为其主要传染途径，包括阴道、肛门和口腔的性交，其他途径如接触性传播或母婴传播感染不能排除。HPV感染率高低主要取决于人群的年龄和性行为习惯，包括性生活开始时年龄较小，性伴侣数量多等，性活跃妇女的HPV感染率最高，感染高峰年龄18-28岁，然而大部分妇女HPV感染期比较短，一般在&8-10个月便可自行消失，大约只有10%-15%的妇女呈持续性感染状态。高危型别HPV的持续感染是促使子宫癌发生的最主要因素。&&无论是高危类型的HPV还是低危类型的HPV，目前都没有有效的抗病毒药物治疗，正如肝炎病毒、艾滋病病毒、SARS等都不能通过有效抗病毒而治愈，只能治疗HPV导致的病变，如生殖道和肛门的疣、癌前病变、癌症。虽然市面上有很多类型抗病毒药物（口服或者阴道使用），但病毒清除效果均不理想，主要还是靠自身免疫力清除病毒。由于HPV自身清除率高，持续感染非常少，低级别的宫颈病变预后很好，因此对于单纯的HPV感染或者低级别癌前病变（CIN1）可保守观察、随访；对于CIN2或更严重的病变（癌症），则需要到正规医疗中心、向有经验的妇科肿瘤医师寻求帮助。总之HPV感染并不可怕，大多数感染可以通过自身免疫力清除，正规的筛查可以及时发现HPV引起的癌前病变并加以阻断。
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