我来说两句
点赞& 条评论&&&&&人次参与
查看更多评论 > >
生物通微信公众号
生物通新浪微博
知名企业招聘
版权所有 生物通
Copyright©
eBiotrade.com, All Rights Reserved
联系信箱：mefs是什么细胞？_百度知道
mefs是什么细胞？
最好详细点的！谢谢！
小鼠胚胎成纤维细胞
采纳率：61%
来自团队：
小鼠胚胎的成纤维细胞系，可以作为胚胎干细胞的饲养层以外，也是研究天然免疫的重要材料。小鼠胚胎成纤维细胞的富集1、给13-14天的孕鼠注射大约0.5ml阿佛丁。当鼠麻醉后，实施断颈法处死小鼠。2、用70％乙醇擦拭腹部，把皮肤向后拉，暴露出腹膜。用消毒过的工具，剪开腹壁以暴露出子宫角。将子宫角移到10cm的皿里。用10ml不含钙镁离子的PBS洗三遍。3、用剪刀剪开每一测的胚囊,并将胚胎移到培养皿中。4、用两副钟表镊子将胎盘和膜与胚胎分离开，分离后切除内脏（所有深色的东西）。将胚胎转移到(有盖)培养皿中，用10ml不含钙镁离子的PBS洗三遍。5、用带有弯钩的眼科剪将组织剪碎，当你剪的很累以致于不能再剪的时候，加入2ml胰蛋白酶/EDTA继续剪。再加入另外5ml胰蛋白酶/EDTA，并在37℃孵育大约20分钟。此时，返回至第一步，对下一只鼠进行操作。6、执行1－4步，到将胚胎置于胰蛋白酶/EDTA中这一步。7、吹打胰蛋白酶/EDTA中的胚胎，直到有很少的组织物残留。将皿放回培养箱再孵育10分钟。8、用20ml培养基以终止胰蛋白酶/EDTA的消化，将皿中的物质转移至50ml锥形管中。9、混匀管内的物质，加入到含有20ml培养基的T75培养瓶中。每个培养瓶中装大约3个胚胎。10、将这些培养瓶放在培养箱中37℃培养过夜。11、将胚胎置于PBS中，并重复第5步。12、第二天更换培养基，以去除碎片和中毒的细胞及其分泌的物质。13、当培养瓶中的细胞长到80-90%汇合时并仍处于指数生长期时，是冻存细胞的最佳时期。一般说来，这发生在准备胚胎的第二天。这可能或早或晚发生，所以请注意观察你的培养瓶。注释：我们已用CF－1品系的鼠制备了成纤维细胞。培养基成分：88％ DMEM10％ FBS1％
双抗对于新建立的细胞系，要对样本进行支原体检测。小鼠胚胎成纤维细胞的消化/传代1、移去MEF培养基2、用5ml不含钙镁离子的PBS洗涤细胞（以去除胰蛋白酶的抑制物）。3、每个培养瓶里加入1.5ml的胰蛋白酶/EDTA（0.05%的胰蛋白酶），消化5min。4、为了使细胞分散开，轻轻吹打细胞。5、每加入1ml的胰蛋白酶/EDTA，加入至少1ml的MEF培养基以终止胰蛋白酶的消化。6、将细胞悬液加入到15ml的锥形管中，吹打几次，使细胞分散为单个的。7、在新的T75培养瓶中加入10mlMEF培养基。8、将细胞悬液分装到新的T75培养瓶中，放在37℃培养箱中进行培养。注释：MEF培养基成分：89% DMEM (Gibco # )10% FBS (Gibco # )1%
NEAA (Gibco # )MEF每传一代就会生长得较慢些。你第一次传代的比例可以是1:5，但是最后一次的传代（第4代或第5代）比例应该是1:2。小鼠胚胎成纤维细胞的冻存重悬培养基：80% DMEM20% FBS1%
NEAA冻存培养基：60％ DMEM30％ FBS20％ DMSO1、用不含钙镁离子的PBS洗一次细胞。2、加入胰蛋白酶/EDTA37℃消化大约5min。3、将细胞吹打下来。4、加入与胰蛋白酶/EDTA等体积的培养基以终止胰蛋白酶的消化。5、吹散大块组织。如果还有大块组织存在，可将悬液加入到50ml的管中使其沉淀。6、取上清液，将其分装到锥形管中，1000rpm离心5min。7、每个冻存瓶中加入0.5ml（冻存液的一半体积）的重悬培养基重悬细胞。8、逐滴加入等体积的（0.5ml/瓶）冻存培养基，混匀。现在DMSO的浓度是10％。9、每个冻存瓶中加入1ml的细胞。10、迅速将细胞转移到冻存的容器中，-70℃冻存过夜。（细胞不能长时间放置在室温而含有DMSO的情况下）11、第二天将细胞放于液氮中长期保存。注释：提前标注好冻存细胞的以下信息：细胞系名称传代的代数冻存细胞的数目日期Initials注明冻存/解冻形式小鼠胚胎成纤维细胞的解冻/复苏1、将冻存瓶从液氮中取出。2、放在37℃水浴中快速解冻，being careful not to immerse the vial above the level of the cap.3、当仅还有一点冰晶残留时，用95％的乙醇消毒冻存瓶的外面，并将其置于hood中。（为什么用95％的乙醇消毒？hood是什么？）4、轻轻地上下翻转细胞一次，将它们放入15ml锥形管中。5、想管中逐滴加入10ml培养基。这一步操作不能少于两分钟。做快了对细胞将是一种打击，你将得到比其他方法具有更低生活能力的细胞。6、1000rpm离心5min。7、将细胞重悬于10ml培养基中，然后放入T75培养瓶中。8、放入37℃培养箱。9、注明冻存/解冻的形式，以更新数据。
小鼠胚胎成纤维细胞
为您推荐：
其他类似问题
换一换
回答问题，赢新手礼包
个人、企业类
违法有害信息,请在下方选择后提交
色情、暴力
我们会通过消息、邮箱等方式尽快将举报结果通知您。图一是培养小鼠胚胎成纤维细胞（MEF细胞）的示意图，图二是在用MEF细胞制成的饲养层上培养胚胎干细胞（ES细胞）的示意图．（1）图一所示，制备细胞悬液时，常用酶来消化剪碎的组织块．配制培养液时，通常需要在合成培养基的基础上添加等一些天然成分．当MEF细胞分裂生长到细胞表面相互接触时就停止分裂，这种现象称为细胞的．（2）ES细胞是由中分离出来的一类细胞，ES细-学库宝
图一是培养小鼠胚胎成纤维细胞（MEF细胞）的示意图，图二是在用MEF细胞制成的饲养层上培养胚胎干细胞（ES细胞）的示意图．（1）图一所示，制备细胞悬液时，常用&&&&酶来消化剪碎的组织块．配制培养液时，通常需要在合成培养基的基础上添加&&&&等一些天然成分．当MEF细胞分裂生长到细胞表面相互接触时就停止分裂，这种现象称为细胞的&&&&．（2）ES细胞是由&&&&中分离出来的一类细胞，ES细胞在功能上具有发育的&&&&．（3）MEF细胞能够分泌某些蛋白质，其合成到分泌至细胞外的过程是：核糖体→&&&&→囊泡→&&&&→囊泡，再通过&&&&方式分泌到细胞外．在培养液中单独培养ES细胞时，ES细胞容易发生分化，结合图二可推知MEF细胞的作用是&&&&．（4）在治疗性克隆过程中，细胞核取自患者细胞，这是为了避免向患者移入组织细胞后体内发生&&&&反应．
动物细胞与组织培养过程,胚胎干细胞的来源及分化下图一是培养小鼠胚胎成纤维细胞（MEF细胞）的示意图，图二是在用MEF细胞制成的饲养层上培养胚胎干细胞（ES细胞）的示意图。（1）图一所示，制备细胞悬液时，常用________________酶来消化剪碎的组织块。配制培养液时，通常需要在合成培养基的基础上添加_____________等一些天然成分。当MEF细胞分裂生长到细胞表面相互接触时就停止分裂，这种现象称为细胞的_____________。（2） ES细胞是由____________________________中分离出来的一类细胞，ES细胞在功能上具有发育的&&&&&&&&&&&&&&&。（3） MEF细胞能够分泌某些蛋白质，其合成到分泌至细胞外的过程是：核糖体→&&&_____→囊泡→ &&&&&&&&&&&&&&→囊泡，再通过____________方式分泌到细胞外。在培养液中单独培养ES细胞时，ES细胞容易发生分化，结合图二可推知MEF细胞的作用是&&&&&&&&&&&&&&____________________________________________。（4）在治疗性克隆过程中，细胞核取自患者细胞，这是为了避免向患者移入组织细胞后体内发生____________反应。提示：下载试题将会占用您每日试题的下载次数，建议加入到试题篮统一下载（普通个人用户：3次/天）【知识点】&&&& 类题推荐胚胎工程染色体平衡易位是人类最多见的一类染色体结构畸变，在新生婴儿中的发生率为1/500～1/1 000。平衡易位携带者通常没有临床表征，但这类患者生育染色体正常后代的概率较低。2017年1月，郑州大学第一附属医院院长阚全程教授宣布国际首例“MaReCS（等位基因映射识别胚胎平衡易位携带状态）”成功阻断染色体平衡易位向子代传递的健康试管婴儿在郑州大学第一附属医院诞生。结合所学知识回答下列问题：（1）试管婴儿技术首先要做的是_________和早期胚胎培养。胚胎培养液的成分，除一些无机盐和有机盐类外，还需要添加_________等营养成分，以及_____等物质。（2）人的体外受精胚胎可在__________阶段进行移植；在胚胎移植前要对接受胚胎的受体进行____________处理；胚胎移植的实质是___________。胚胎能在受体的子宫内存活并正常发育的生理原因是____________。（3）基因探针___________（填“能”或“不能”）诊断出染色体平衡易位患者。回答下列有关生物工程技术问题：（1）在植物基因工程中，构建重组Ti质粒时，通常要______________分别切割____________和____________，再用____________进行连接。整合了目的基因的重组质粒，在组成上还含有启动子、终止子和____________。（2）体内受精作用进行时，防止多精入卵的机制有____________和____________。（3）动物细胞体外培养时，要保证被培养的细胞处于____________的环境；在营养方面通常需要在培养基中加入____________等天然成分。细胞培养需在适宜的理化条件下进行，此外还需要一定的气体环境，其中CO2的主要作用是________________________。（4）植物组织培养技术的理论依据是____________；在该技术应用的过程中，关键步骤是利用含有一定营养和激素的培养基诱导植物细胞进行____________和__________________。在畜牧业中，为了生产的需要，利用胚胎工程扩大畜群数量，需要对移植的胚胎进行性别鉴定。请根据所学知识，回答下列问题：（1）对移植的胚胎进行性别鉴定，最好选择被测胚胎___________（填写相关的胚胎时期及部位）为材料，这样选材的好处是___________。（2）可对材料进行细胞的核型分析，通过观察________________判断其性别。（3）目前最有应用前景的方法是SRY-PCR法，SRY基因是位于Y染色体上的性别决定基因。进行鉴定时，首先要提取__________作为模板，根据____________合成引物，进行PCR扩增。扩增产物可以用____________技术进行检测，出现阳性反应者，胚胎为雄性，反之为雌性。（4）在PCR的引物设计中，要注意引物长度不宜过短，主要原因是__________,引物中G＋C的含量相差不宜过大，否则会影响_______的温度设置。试题点评评分：0评论：暂时无评论暂时无评论末页使用过本题的试卷同步试卷相关知识点组卷网 版权所有