蛋白过镍柱纯化的过程 我是初学者，所以麻烦大家给的详细一点 谢谢啦！_百度知道
蛋白过镍柱纯化的过程 我是初学者，所以麻烦大家给的详细一点 谢谢啦！
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见或镍柱离纯化固定金属离亲柱主要用于金属螯化离位于许蛋白组氨酸残基许金属离例锌铜镍铁等形复合物该柱料能选择性螯合些具组氨酸残基蛋白质半胱氨酸咯氨酸残基能固定化金属螯亲力比组氨酸要弱所结合强度缓冲液PH金属离决定金属螯柱料主要由亚氨基乙酰乙酸耦联琼脂糖柱料借助醚<img class="word-replace" src="/api/getdecpic?picenc=0a5f原空间全部容量：24-30um含zn干胶柱料结构：6%高铰链琼脂糖柱料：45-165um平均微粒：90um直流速度：25度/0.1MPa/30倍柱床/5厘米高度/每达700厘米压强：0.3MPaPH变化：期3-13
短期2-14化稳定：通用含水缓冲液0.01M盐酸<img class="word-replace" src="/api/getdecpic?picenc=0ad.0M NAOH,
20%乙醇（保存7）物理性质：忽略PH或者离变化体积变化耐热性能：121度<img class="word-replace" src="/api/getdecpic?picenc=0aM乙酸钠作用半金属螯柱料保存于事先填充于20%乙醇所要搅拌驱除20%乙醇溶液换离水比例25%离水75%处理胶处理金属螯柱料：1 平衡所用材料于室温2 搅拌金属螯柱料3 倒水进柱驱除气体用离水液封几厘米4 金属螯柱料连续倒进柱用玻璃棒支撑柱壁防止气泡形5 立即用离水液封装柱盖连接泵6 打柱底部关调节泵流速通超<img class="word-replace" src="/api/getdecpic?picenc=0af.3MPa7 经稳定柱床填鸭维持填压速度3柱床使用adaptor1 经溯填鸭关闭柱床面关移面薄膜加离水进行液封2 定角度插入adaptor确保没气泡3 确保所连接都没问题柱/泵/品接受器4 倾斜插入塞确保没气泡管道充满液体利用泵反向流确保没气泡5 固定adaptor打柱关始缓冲液流先填鸭速度直柱床稳定固定金属离：金属螯柱料通水螯金属避免发沉淀胶1 确保柱已经平衡必要洗2柱床（离水）2 选择金属离0.1-0.3M弱性酸例铁离PH 3左右避免形沉淀共沉3 加入倍柱床金属离溶液4
5倍柱床离水洗涤5
至少2倍柱床平衡缓冲液结合：发于PH5.5-8.5间.强反映发于初始缓冲液选择决定于金属离品结合性质乙酸钠或者磷酸钠比较缓冲液能使用EDTA或者柠檬酸盐通用缓冲液：0.01-0.2M磷酸钠0.05M乙酸钠强烈推荐加入0.15-0.5M NaCl用于防止离交换通知道蛋白结合能力使用锌离性磷酸或者乙酸盐同含<img class="word-replace" src="/api/getdecpic?picenc=0a-0.5M NaCl垢剂影响蛋白质结合能力金属离取代意味着蛋白发结合种现象通颜色决定洗脱蛋白：（3种）1 降低PH(步或者步)部蛋白溶解于PH4-6终3-4容选择柠檬酸盐磷酸或者乙酸盐2 逐步提高咪唑浓度（0-0.5M）梯度变化初始缓冲液PH范围3 加入EDTA或者EGTA洗脱蛋白质通用利用离或者重力作用纯化组氨酸位点蛋白通镍进行选择性结合含组氨酸位点蛋白利用含咪唑缓冲液洗脱蛋白实验化组氨酸位点蛋白结合金属螯柱料确保能够洗脱结合洗脱条件尚未明些用获高纯度蛋白必须摸索咪唑缓冲液品柱洗脱浓度通使用10mM-500mM范围咪唑缓冲液进行剃度洗脱通收集SDS-PAGE 蛋白电泳确定洗脱浓度纯化容含his位点蛋白质（包含体）变性条件进行利用8M尿素或者6M盐酸呱进行溶解蛋白品处理：品要经能溶解避免现堵塞现象所利用0.45uM虑膜滤杂志品溶解于20mM磷酸缓冲液（含<img class="word-replace" src="/api/getdecpic?picenc=0aM Nacl,PH7.4）必须调整PH7－8柱前准备：洗柱料：1 亲柔震胶瓶充旋胶料2 利用吸管吸足量柱料用纯化目每毫升柱料吸纳5毫克蛋白3
500g 离<img class="word-replace" src="/api/getdecpic?picenc=0af－5钟沉淀柱料4
加入5倍体积离水充振荡柱料倒置5钟要机械搅拌6
再500g 离<img class="word-replace" src="/api/getdecpic?picenc=0af－5钟沉淀柱料7
再除清挂镍：1 加入0.5倍柱床体积0.1M硫酸镍充振荡柱料倒置5钟要机械搅拌2
500g 离<img class="word-replace" src="/api/getdecpic?picenc=0af－5钟沉淀柱料3
除清洗柱：1加入5倍体积离水充振荡柱料倒置5钟2
500g 离<img class="word-replace" src="/api/getdecpic?picenc=0af－5钟沉淀柱料3除清4 再洗两柱料（共3×5柱床离水）5 用倍体积起始缓冲液充旋柱料（20mM Na2HPO4
/0.5MnaCl/10mM咪唑/PH7.4）利用离纯化：：1 起始缓冲液加入品使整体胶浓度达50％2 亲柔搅拌室温离<img class="word-replace" src="/api/getdecpic?picenc=0af－30钟结合能力取决于蛋白品浓度3 500g 离<img class="word-replace" src="/api/getdecpic?picenc=0af－5钟沉淀柱料4 取清部用于SDS-PAGE 蛋白电泳洗胶：1 加入5倍体积起始缓冲液搅拌5钟2 500g 离<img class="word-replace" src="/api/getdecpic?picenc=0af－5钟沉淀柱料3取清部用于SDS-PAGE 蛋白电泳4再洗两柱料（共3×5柱床起始缓冲液）记取清部用于SDS-PAGE 蛋白电泳洗柱：1 加入2倍体积洗脱缓冲液（20mM Na2HPO4
/0.5MnaCl/10mM咪唑/PH7.4）搅拌5钟2再500g 离<img class="word-replace" src="/api/getdecpic?picenc=0af－5钟沉淀柱料3再洗四柱料（共5×2柱床洗脱缓冲液）记取清部用于SDS-PAGE 蛋白电泳<img class="word-replace" src="/api/getdecpic?picenc=0ad0nM吸光值ELISA,WESTERN利用流速重力纯化：1 柱底部加滤器2 加水排气3 加柱帽除残余水推荐<img class="word-replace" src="/api/getdecpic?picenc=0af Ml柱料品结合：1 倒胶进入柱2 用波棒室温搅拌5－30钟3 打柱帽收集流峰用于析洗胶：1 加入5倍体积起始缓冲液收集流液用于SDS-PAGE 蛋白电泳2再洗两柱料（共3×5柱床起始缓冲液）记取清部用于SDS-PAGE 蛋白电泳洗柱：1 加柱帽加入2倍体积洗脱缓冲液（20mM Na2HPO4
/0.5MnaCl/10mM咪唑/PH7.4）搅拌5钟打柱帽收集流峰2再洗四柱料（共5×2柱床洗脱缓冲液）记取清部用于SDS-PAGE 蛋白电泳<img class="word-replace" src="/api/getdecpic?picenc=0ad0nM吸光值ELISA,WESTERN注意：0.5M咪唑280nM吸光值＝0.5见问题：1 品太粘稠答：核酸存影响继续超声加入RNA酶至10ug/ml
DNA酶至5ug/ml冰浴10－15钟或者用注射器充旋防止堵塞柱料2 平衡品洗脱答: 检查PH缓冲液缓冲液确EDTA加入强原剂加入都导致现象现加胶量胶料承载能力绘现现象准备新鲜柱料柱料断裂挂蛋白3 洗脱液含组氨酸蛋白答：SDS-PAGE 蛋白电泳已经发现蛋白存于超声液超声能完全用显微镜观察超声情况AD260/280比值（通超声前10mg/ml溶菌酶加入25mM Tris-HCLPH6-8）避免发泡降解融合蛋白蛋白能包含体使用4－6M盐酸呱或者4－8 M尿素溶解尿素溶解进行SDS-PAGE 蛋白电泳盐酸呱溶解进行SDS-PAGE 蛋白电泳必须换缓冲液洗脱液浓度太稀加咪唑浓度或者降低PH 决定佳洗脱条件平衡前洗柱发现目蛋白证明起始缓冲液咪唑浓度太高适降低4 考马氏亮蓝或者银染发现条带答：加入蛋白激酶抑制剂能蛋白降解用凝血酶切割前必须除丝氨酸蛋白酶抑制剂采用梯度咪唑洗脱蛋白平衡洗脱液加入10mM咪唑洗脱量杂质洗脱融合蛋白低于500mM咪唑洗掉绝部杂质洗脱步奏往起始缓冲液加入垢剂（2％TRITON x-100或者2％Tween20）50% 葡萄糖<img class="word-replace" src="/api/getdecpic?picenc=0admM B-巯基乙醇记杂质通没特意结合能力改变缓冲液洗脱杂志目蛋白相同结合能力能用于纯化使用别纯化系统例含GST尾巴用谷胱甘肽琼脂糖4B柱料再清洁保存柱料再：1 使用0.05M EDTA,0.5M NaCl洗脱镍离用3柱床0.5M NaCl洗干净EDTA2铁离用0.05M EDTA泡夜3 步洗脱面未能洗脱残余结合蛋白清洗柱料：1 0.5倍柱床2M NaCl反向洗脱10－15钟2 1M NaOH洗1除残余蛋白3 每步都要用3倍柱床起始缓冲液清洗4 4倍柱床70%乙醇洗脱强亲水蛋白脂类蛋白使用2倍柱床垢剂0.1-0.5%非离垢剂溶于0.1M乙酸浸泡1－2用5柱床70％乙醇除垢剂清洁：1 尽能除微物2 0.5-1M NaOH反向流半3 再用3－5倍柱床消毒起始缓冲液平衡4 清洁步奏定能够提高纯化能力保存：期保存于20％乙醇或者0.01M NaOH 于4度自百度文库希望能帮
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出门在外也不愁哈尔滨市香坊区向阳中学具体在什么位置？？百度上有个向阳小学校，是在那吗？请说的具体一点，谢谢啦！！_百度知道
哈尔滨市香坊区向阳中学具体在什么位置？？百度上有个向阳小学校，是在那吗？请说的具体一点，谢谢啦！！
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出门在外也不愁none后面的谓语动词用单数还是复数？none of呢？_百度知道
none后面的谓语动词用单数还是复数？none of呢？
none of面谓语词都用单数
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none 用作代词接单复数均None has been found.None have arrived,none 指指物 of 连用指数名词接单数形式；指数名词接单复数均
都可以的，要看个人习惯。通常都是用单数。none 的话就要看你怎么用了。
none (of) 作主语时若指不可数名词，谓语用单数；若指复数可数名词，谓语可用单数(正式文体)或复数(非正式文体)
如果后面接可数名词的复数形式，如果是表示所有人的状态，谓语动词用复数，如果是表示每个人的状态，谓语动词用单数。---------《薄冰语法书》
none of 由后面所接名词决定
根据它们后面所接的名字的单复数来决定
谓语动词的相关知识
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出门在外也不愁英语中，感谢和道歉的应答语。要全面，越多越好，不过尽量选一些常用一点儿的，还要附上翻译。谢啦！_百度知道
英语中，感谢和道歉的应答语。要全面，越多越好，不过尽量选一些常用一点儿的，还要附上翻译。谢啦！
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【道谢应答】 1. Not at all. 2. That’s all right. / That’s OK. 3. You’re welcome. 4. Don’t mention it. 5. It’s my pleasure. 6. I’m very glad you enjoyed it. 意思用谢 或乐意效劳【道歉应答】 1. That’s OK. / That’s all right. 2. It doesn’t matter. 3. It’s nothing. 4. Forget it. 5. You’re forgiven. 6. Never mind. 7. Don’t worry about it. 8. No problem. We all make mistakes.注意: It doesn’t matter或Never mind虽汉语翻译没关系,属于道歉应答语,属于道谢应答语
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