谁能解释一下qPCR和FISH的原理？
谁能解释一下qPCR和FISH的原理？
09-12-26 & 发布
Realtime PCR定量荧光(实时定量PCR定量荧光) 定量PCR定量荧光已经从基于凝胶的低通量分析发展到高通量的荧光分析技术，即实时定量。实时荧光定量技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出，由于该技术不仅实现了从定性到定量的飞跃，而且与常规相比，它具有特异性更强、有效解决污染问题、自动化程度高等特点。实时定量 (real-time quantitative )是指在指数扩增期间通过连续监测荧光信号强弱的变化来即时测定特异性产物的量，并据此推断目的基因的初始量，不需要取出产物进行分离。目前实时定量作为一个极有效的实验方法，已被广泛地应用于分子生物学研究的各个领域。 实时荧光定量 技术的主要应用： 1. DNA 或RNA 的绝对定量分析：包括病原微生物或病毒含量的检测,转基因动植物转基因拷贝数的检测，RNAi 基因失活率的检测等 2. 基因表达差异分析：例如比较经过不同处理样本之间特定基因的表达差异(如药物处理、物理处理、化学处理等 )，特定基因在不同时相的表达差异以及cDNA 芯片或差显结果的确证 3. 基因分型：例如SNP 检测，甲基化检测等 Realtime 常用的两种方法分别为：Sybr green（荧光染料掺入法） 和Taqman probe （探针法） SYBR green 在反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与产物的增加完全同步。 此方法适用： 1、灵敏度高：使用SYBR可使荧光效果增强到1000倍以上 2、通用性好,不需要设计探针,方法简便,省时,价格低廉。 3、通用型方法，在国内外科研中普遍使用。 4、高通量大规模的定量检测 5、专一性要求不高的定量检测。 Taqman Probe 扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；扩增时，Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与产物形成完全同步 此方法适用： 1、具有高适应性和可靠性，实验结果稳定重复性好，特异性更高。 2、适用于扩增序列专一的体系的检测。 3、样品中靶基因含量过低的定量检测。 4、靶基因的特异序列较短，无论怎样优化引物设计条件都不能解决。 5、存在与靶基因同源的序列，在中容易出现非特异性扩增，对特异性要求较高的定量。 6、广泛用于人类传染病的诊断和病原定量,在动物病原体基因的检测,畜禽产品的检验检疫,生物制品的鉴定。 （来源：GENELIFE Biotech 基莱生物）
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做了EBV-DNA血浆(探针法)检查，能帮忙解释下这个检查结果吗？
检验结果.15E1： &lt，参考项目.0E3： EBV-DNA血浆(探针法)，单位 copies&#47： 3;1.能帮忙解释下这个检查结果吗检验项目;ml
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远低于 = 1000，你的检测结果是3，表示检测结果高于1000的判断为EBV阳性.15，是EBV阴性参考值1.15E1 = 3
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分子生物学名词解释、简答题和论述题
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内容提示：名词解释：。探针（probe）：具有特殊可检测标记、序列已知的DNA或者RNA片段，可以与待测样品中的互补序列核酸片段结合形成杂交分子。。聚合酶链式反应（PCR）：是一种在体外对特定DNA片段进行高效扩增的技术，原理类似于体内的DNA复制过程。。基因芯片（gene chip）：是基于核酸分子杂交原理建立的一种对DNA进行高通量分析的技术，其原理是将大量DNA或cDNA探针固定于支持物表面，然后与标记的待检测核酸样品进行杂交，通过检测杂交信号对样品核酸进行分析。。酵母双杂交（yeast two-hybrid system）：是根据酵母转录激活因子的作用，即其分别由DNA结合域和转录激活结构域共同完成这一原理建立的，在酵母细胞内分析蛋白质相互作用的研究方法。。限制性核酸内切酶（restriction endonnuclease）：又简称为限制性内切酶或限制酶，是一类核酸内切酶，能识别双链DNA分子内部的特异位点并裂解磷酸二酯键。。回文结构（palindrome）：又称反向重复序列，是指在两条核苷酸链中，从5’→3’方向的核苷酸序列是完全一致的。。转座（transposition）：大多数基因在基因组内的位置是固定的，但有些基因可以从一个位置移动到另一个位置，这些可移动的DNA序列包括插入序列和转座子。由插入序列和转座子介导的基因移位或重排现象称为转座。。位点特异性重组（site specific recombination）：由整合
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正常双亲产下一头矮生雄性牛犊，以下解释不可能的是
A．雄犊营养不良B．雄犊携带了X染色体C．发生了基因突变D．双亲都是矮生基因的携带者
题型：单选题难度：中档来源：广东省高考真题
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据魔方格专家权威分析，试题“正常双亲产下一头矮生雄性牛犊，以下解释不可能的是[]A．雄犊营养..”主要考查你对&&分离定律，基因突变&&等考点的理解。关于这些考点的“档案”如下：
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因为篇幅有限，只列出部分考点，详细请访问。
分离定律基因突变
&基因的分离定律及应用：1．基因的分离定律 (1)内容：在生物的体细胞中，控制同一性状的遗传因子成对存在，不相融合；在形成配子时，成对的遗传因子发生分离，分离后的遗传因子分别进入不同的配子中，随配子遗传给后代。(2)实质：在杂合子的细胞中，位于一对同源染色体上的等位基因，具有一定的独立性；在减数分裂形成配子的过程中，等位基因会随同源染色体的分开而分离，分别进入到两个配子中，独立地随配子遗传给后代。（3）适用范围：①一对相对性状的遗传；②细胞核内染色体上的基因；③进行有性生殖的真核生物。（4）细胞学基础：同源染色体分离。（5）作用时间：有性生殖形成配子时（减数第一次分裂后期）。2、分离定律在实践中的应用（1）正确解释某些遗传现象两个有病的双亲生出无病的孩子，即“有中生无”，肯定是显性遗传病；两个无病的双亲生出有病的孩子，即“无中生有”，肯定是隐性遗传病。（2）指导杂交育种 ①优良性状为显性性状：连续自交，直到不发生性状分离为止，收获性状不发生分离的植株上的种子，留种推广。 ②优良性状为隐性性状：一旦出现就能稳定遗传，便可留种推广。 ③优良性状为杂合子：两个纯和的不同性状个体杂交后代就是杂合子，但每年都要配种。（3）禁止近亲结婚的原理每个人都携带5～6种不同的隐性致病遗传因子。近亲结婚的双方很可能是同一种致病因子的携带者，他们的子女患隐性遗传病的机会大大增加，因此法律禁止近亲结婚。& 交配方式类：1、杂交：基因型不同的个体间相互交配的过程。 2、自交：植物中自花传粉和雌雄异花的同株传粉。广义上讲，基因型相同的个体间交配均可称为自交。自交是获得纯合子的有效方法。3、测交：就是让杂种(F1)与隐性纯合子杂交，来测F1基因型的方法。4、正交与反交：对于雌雄异体的生物杂交，若甲♀×乙♂为正交，则乙♀×甲♂为反交。&5、常用符号的含义
孟德尔杂交实验的科学方法:1．遗传学实验的科学杂交方法
2．假说一演绎法分析 (1)假说一演绎法：在观察和分析的基础上提出问题以后，通过推理和想像提出解释问题的假说，根据假说进行演绎推理，再通过实验检验演绎推理的结论。如果实验结果与预期结论相符，就证明假说是正确的，反之，则说明假说是错误的。这是现代科学研究中常用的一种科学方法，叫做假说一演绎法。(2)一对相对性状的杂交实验“假说一演绎分析”&&&&&&&一对相对性状的杂交实验:1、实验过程及结果（如下图）2、对分离现象的解释(l)生物的性状是由遗传因子决定的。(2)体细胞中遗传因子是成对存在的。(3)生物在形成生殖细胞——配子时，成对的遗传因子彼此分离，分别进入不同的配子中。(4)受精时，雌、雄配子的结合是随机的。 3、对分离现象解释的验证——测交（如下图）结果证实了：①F1是杂合子，基因型为Dd；②F1能产生D和d两种配子且比例相等；③F1在形成配子过程中，D和d能彼此分离（即没有融合）。4、孟德尔的研究思路：假说一演绎法(3)设计测交实验，验证假说。 (4)归纳综合，总结规律：基因的分离定律。 表解基因的分离定律和自由组合定律的不同：
知识点拨：分离定律实验注意1、亲本上结的种子为F1，F1植株上结的种子为F2。2、亲本产生的雌雄配子数量不等，雄配子数量远远多于雌配子，基因型为Dd的植物产生的雄配子中，含D的和含d的相等，雌配子中含D的和含d的相等。& 杂合子Aa连续自交后代分析：1、杂合子连续自交n次后，第n代的情况如下表：
&2& 、曲线分析根据上表比例，杂合子、纯合子所占比例坐标曲线图为： 注：1、自交n次后，第n代杂合子比例为1/2n，其余为纯合子，且显性纯合子与隐性纯合子比例为1:1，据此原理，可只记忆杂合子的计算公式，其他比例由此推到即可。2、在育种实践中，可通过让杂合子连续自交的方法来提高纯合子所占的比例。 知识拓展： 1、孟德尔遗传规律的发现是运用了“假说一演绎法”的结果，孟德尔以高茎纯种豌豆和矮茎纯种豌豆作亲本，分别设计了纯合亲本杂交、F1的自交、F1的测交三组实验①在现象分析阶段完成的实验是纯合亲本杂交和 F1的自交。②孟德尔在解释一对相对性状的杂交实验现象时，提出的假设是控制生物性状的成对的遗传因子在形成配子时会彼此分离，分别进入不同的配子中，随配子遗传给后代。③在检验假设阶段完成的实验是F2的测交。2、萨顿利用类比推理，提出“基因在染色体上” 的假说；摩尔根利用“假说—演绎法”找到基因在染色体上的实验证据。 3、DNA半保留复制的提出也是“假说一演绎法” 的正确运用。沃森和克里克在发现了DNA分子的双螺旋结构后，又提出了遗传物质半保留复制的假说。 1958年，科学家以大肠杆菌为实验材料，运用同位素标记法设计了巧妙的实验，实验结果与根据假说一演绎推导的预期现象一致，证实了DNA的确是以半保留方式复制的。 4、基因的分离定律和自由组合定律中，F1和F2要表现特定的分离比，应具备以下条件。①所研究的每一对相对性状只受一对等位基因控制，且相对性状为完全显性。②不同类型的雌、雄配子都能发育良好，且受精的机会均等。③所有后代都处于比较一致的环境中，且存活率相同。 ④进行实验的群体要大，个体数量要足够多。 5、常见问题解题方法（1）如果后代性状分离比为显：隐=3：1，则双亲一定都是杂合子（Dd）。即Dd×Dd→3D_：1dd（2）若后代性状分离比为显：隐=1：1，则双亲一定是测交类型。即Dd×dd→1Dd：1dd（3）若后代性状只有显性性状，则双亲至少有一方为显性纯合子。即DD×DD或DD×Dd或DD×dd分离定律的实质：减Ⅰ分裂后期等位基因分离。基因突变：
&知识拓展： 1、基因突变和生物性状的关系 ①多数基因突变并不引起生物性状的改变。a．不具有遗传效应的DNA片段中的“突变”不引起基因突变，不引起性状变异。 b．由于多种密码子决定同一种氨基酸，因此某些基因突变也不能引起性状的改变。 c．某些基因突变虽改变了蛋白质中个别位置的氨基酸种类，但并不影响蛋白质的功能。d．隐性突变在杂合子状态下也不会引起性状的改变。 ②少数基因突变可引起性状的改变，如人的镰刀型细胞贫血症。 2、基因突变对后代的影响①基因突变若发生在体细胞有丝分裂过程中，这种突变可通过无性繁殖传给后代，但不会通过有性生殖传给后代。 ②基因突变若发生在精子或卵细胞形成的减数分裂过程中，这种突变可通过有性生殖传给后代。3、基因突变对蛋白质结构的影响
4、基因突变在普通光学显微镜下无法看到，但染色体变异一般可以镜检出来。5、基因突变的结果：基因突变引起基因“质”的改变，产生了原基因的等位基因，改变了基因的碱基序列，如由A→a(隐性突变)或a→A（显性突变），但并未改变染色体上基因的数量和位置。 6、显性突变和隐性突变的判定 （1）基因突变的类型显性突变：aa→Aa（当代表现）隐性突变：AA→Aa（当代不表现，一旦表现即为纯合体）(2)判定方法 ①植物：让突变体自交②动、植物：让突变体与其他未突变体杂交
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与“正常双亲产下一头矮生雄性牛犊，以下解释不可能的是[]A．雄犊营养..”考查相似的试题有：
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&&副主任医师
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中国医科大学附属盛京医院辽东湾分院&&妇产科
&&副主任医师
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