& 【求助】sds-page 问题多了，急啊~~
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
【求助】sds-page 问题多了，急啊~~
信誉分 102
可用分 5088
阅读权限 255
注册 状态 离线
【求助】sds-page 问题多了，急啊~~
我做了一个月的westen了，遇到一系列的问题，有一系列的疑问，请高人指点！
1.电泳速度奇快。我用六一的电泳槽，型号dycz-24D，开始配的10%分离胶，5%浓缩胶（均按照分子克隆配置),60v浓缩，25分钟到分界，80v分离，50分钟到底。
2.溴芬蓝不能压成线。我得上样量每孔只有7ul。总蛋白量约10ug。上样缓冲液是根据分子克隆配的，只是按比例缩成了5*buffer，没有dtt，就按摩尔数家的b-巯基乙醇。
3.marker条带模糊。我用的碧云天的预染marker，每次点样6ul。几本上只是一条蓝色的条。没有带。后来观察，跑到中间的时候似乎是有带的，但跑到下面以后就没什么带了。
4. 发现上电泳槽的缓冲液跑到快结束时全变浑了，好像有盐一样的东西析出来。（缓冲液是今天才配的）
我做的努力：
1.重新调整了1.0和1.5mol/l tris.hcl的ph值。在浓缩胶里似乎压缩好了一点，但是一进分离胶就散了。
2.重新配了电泳缓冲液，没有用盐酸调ph值，我量了大概ph8.03。（原来的buffer是调了的。）
3.降低电泳电压，同时加大了分离胶的浓度（12%）。我用浓缩胶40v，分离胶60v，电泳时间分别是50分钟和1.5小时。没有很大改观。marker还是分不出带的。（这个marker我是新买的，分装了，应该不会那么快降解吧）
4.考马斯亮蓝染色，我的蛋白条带好像还跑得可以，但是marker就是跑不好。
另外，甘氨酸会不会过期阿。实验室里我只找出来一瓶89年的，一瓶90年的，我就那么用了，暴汗~~
暑假里实验好痛苦啊~~我已经啃了半个月泡面了。我得猫也跟着受苦。各位高人给点指点，快点做好它，就能回家了
7月28日 我做的努力
甘氨酸我重新买了，电泳液用的我同学的，肯定没有问题。
tris.hcl我重新配了，ph值我重新校正了。
上样缓冲液也应该问题不大，因为我请同学帮我在他的胶上点样了，还好。
我现在怀疑是我得胶出了问题，我今天分别用我得30%acr/bic和同学的tris，同学30%acr/bic和我得tris配了两块胶一起电泳，溴酚蓝还是散的，跑得速度倒是慢了一点，但是还是很快。难道是sds有问题？还是我得ｔｒｉｓ和30%acr/bic都有问题？我该怎么办呢？？
　另外我想问一下，ｓｄｓ有析出是不是代表ｓｄｓ不好了？我用同学的好像就没有这个问题啊
信誉分 100
可用分 4731
阅读权限 255
注册 状态 离线
1 我用的也是六一的.前一段时间电泳时间大约5小时,后来不知道为什么缩短到2小时了.
2 我的预染marker刚开始时还不错,但是跑一会后就越发弥散. 汗啊
3 上样缓冲液最好加DTT.你加5被buffer的目的如果不是为了提高蛋白浓度的话,最好使用2被buffer
我也在实验室坚持western,食堂关门了.整天面条.
兄弟们好辛苦啊
信誉分 100
可用分 5735
阅读权限 255
注册 状态 离线
呵呵，看来我们的食堂比较人性话
建议上样缓冲配成2X的，临用前家DTT。
另外可以检查下配胶时用的两种TRISCL的PH。这个好像非常关键
可以观察一下电泳时的电流大小
国产的电泳仪用起来非常麻烦
信誉分 102
可用分 5088
阅读权限 255
注册 状态 离线
电流一般都是在20-30ma左右，tris.hcl ph我仔细的调了，甚至担心我得ph计有问题，还换了一个调的。应该是对的了。
信誉分 100
可用分 4896
阅读权限 255
注册 状态 离线
估计电极缓冲液有问题,我也有类似经历,换了新配的电极缓冲液,效果就好了.
信誉分 100
可用分 5286
阅读权限 255
注册 状态 离线
电极缓冲液的PH不用调。tris；甘氨酸；SDS三者按比例配好就行了，用时稀释到1×即可。
我觉得是配胶时tris-HCl的PH不对。浓缩胶用PH=6.8的；分离胶用PH=8.8的。
信誉分 100
可用分 6976
阅读权限 255
注册 状态 离线
我的loading buffer是2*的，自配的。在配置时，我适当加了溴酚兰和甘油的量，感觉还不错。
信誉分 100
可用分 5286
阅读权限 255
注册 状态 离线
我的方子，你核对一下
2×loading buffer&&终浓度&&实用&&5ml加
SDS&&4%&&固体&&200mg
水&&3.85ml (PH 6.8 Tris-HCl加后利于溶解SDS，SDS+ DTT增加150ul体积）
Tris-HCl, PH 6.8&&120mM&&1M&&0.6ml
DTT&&0.2M&&固体&&155.4mg
甘油&&20%&&100%原液&&1ml
溴芬蓝&&枪头沾取痕量溴芬蓝加入以达到电泳指示剂的效果即可。
注&&500ul 分装-20℃保存&1年，融化后4℃保存&2周~2月
5×loading buffer&&终浓度&&实用&&2ml加
Tris-HCl, PH 6.8&&300mM&&1M&&0.6ml
SDS- - - - - - - - - - -10%&&固体&&200mg
水- - - - - - - - - - -0.85ml (PH 6.8 Tris-HCl加后利于溶解SDS，SDS+ DTT增加150ul体积）
DTT- - - - - - - - - - -0.5M&&固体&&155.4mg
甘油- - - - - - - - - 50%&&100%原液& &1ml
溴芬蓝- - - - - - - -枪头沾取痕量溴芬蓝加入以达到电泳指示剂的效果即可。
注&&500ul 分装-20℃保存&1年，融化后4℃保存&2周~2月
信誉分 103
可用分 5056
阅读权限 255
注册 状态 离线
你的甘氨酸使用时间太久了，建议你换一瓶试试
信誉分 102
可用分 4841
阅读权限 255
注册 状态 离线
以下是我试验中蛋白电泳各种试剂的配方，效果一直很好啊！
SDS-PAGE凝胶溶液和电泳缓冲液
1．30％丙烯酰胺储存液（100 mL )：29g 丙烯酰胺，1g甲叉双丙烯酰胺，加蒸馏水定容至100 mL，过滤避光保存。
2．1.5 mol/L Tris-HCl pH8.8（100mL）：18.2 g Tris溶于40 mL 蒸馏水中加入盐酸调pH值到8.8加蒸馏水定容至100 mL。
3．1 mol/L Tris-HCl pH6.8：12.1 g Tris 溶于 40 mL 蒸馏水中，加入盐酸至pH6.8，加蒸馏水定容至100 mL。
4．Tris－甘氨酸蛋白电泳缓冲液（5×，1L）：15.1g Tris碱，94g甘氨酸，50mL 10％SDS(w/v)，加800mL蒸馏水，待全溶后定容到1L。
5．2×SDS上样缓冲液 20mL
1 mol/L Tris·Cl(pH6.8) 2 mL
10％SDS 8 mL
β-巯基乙醇 2 mL
溴酚蓝 0.04g
蒸馏水 4mL
6．考马斯亮蓝染色液 500mL
1.3 g 考马斯亮蓝 R-250
225mL 甲醇
225mL 蒸馏水
50 mL 冰醋酸
7．脱色液 1 L
100 mL 甲醇
100 mL 冰醋酸
800 mL 蒸馏水&Tris-HCl缓冲液(1mol/L,pH8.8)
Tris-HCl缓冲液(1mol/L,pH8.8)
点击图片查看原图
供货总量：
发货期限：
自买家付款之日起
3 天内发货
有效期至：
最后更新：
[VIP第1年] 指数:1
联系人李文龙(先生)&经理&
会员 [当前离线]
手机端打开
下载联系方式
　★为保障信息发布人权益，禁止将获得的发布人联系方式用于任何非法用途，一切法律后果自负；
　★发布人所发信息未经本网站进一步核实，使用前请必务核实信息的真实性，一切后果用户自行承担。
扫描左侧二维码快速打开该信息对应手机版网页
推荐使用 微信 我查查 等扫码工具
扫描左侧二维码快速下载该企业联系方式
扫描后可直接保存为手机联系人(推荐)
推荐使用 微信 我查查 等扫码工具
Tris-HCl缓冲液(1mol/L,pH8.8)
货号:R00229
规格:100ml
储存条件:室温,12个月&
用途:常规pH缓冲液,最常用于配制SDS-PAGE凝胶中的分离胶。
注意事项:主要由Tris、去离子水组成,调pH值至8.8。
Tris-HCl缓冲液(1mol/L,pH8.8)&我司产品质量和服务被全国多所院校科研机构认可，并指定为长期供应商。产品订购说明：
1、绝大部分产品备有现货，一般情况下都能订货当日发货。&
2、部分非常用产品，需提前1－2日预订，海外期货则需要提前3-6周预订。&
3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化，若有变动以订货当日最新价格为准。&
4、每日订单截止时间为16点整，部分城市可到17点整，因超过截止时间造成当日不能发货的将于次日安排发货。
5、请办理完货款后，将收据、底单等连同收货人的地址、姓名、电话等以传真、EMail、短信、电话等形式通知我们。
Tris-HCl缓冲液(1mol/L,pH8.8)公司在保证质量的同时，以价格优、到货快、服务周到，致力于产品的研发、销售。售前、售中、售后免费技术指导，质量保证，可放心购买！更多品质保证产品：
CAS:487-39-8,连翘脂素标准品/对照品
人脾脏酪氨酸激酶(Syk)ELISA检测试剂盒说明书
CAS:290-37-9,吡嗪价格
R21518/Bactidro 印度墨汁培养基厂家
大鼠抑制素结合蛋白(INHBP)ELISA检测试剂盒说明书
重组人 UBE2D4 蛋白(His 标签)/13204-H07E
bs-0370R-HRP,辣根过氧化物酶标记的兔抗羊IgM|Rabbit Anti-Goat IgM/HRP抗体价格
CAS:393-53-3,3-氟异烟酸价格
LP0031K/脱脂乳培养基厂家
前列地尔对照品/标准品
人免疫球蛋白G，IgG抗体
梓醇标准品/对照品
bs-2635R,整合素&2抗体|Integrin alpha 2/CD49b抗体价格
211727/不含葡萄糖或Eh，指示剂硫代(液体)培养基厂家
尿胆原定性检测试剂盒(改良Ehrlich法)
重组小鼠 SIGIRR/TIR8 蛋白(His & Fc 标签)/50122-M03H
CN0020C/小型微需氧产气袋培养基厂家
bs-0358D-Cy5.5,Cy5.5标记的驴抗豚鼠IgG|Donkey Anti-Guinea pig IgG/Cy5.5抗体价格
盐酸布替萘芬对照品/标准品
R24600/Xpect A型&B型流感检测试剂盒培养基厂家
人过敏毒素/补体片断4(C4a)ELISA检测试剂盒说明书
山风标准品/对照品
败酱草对照品/标准品
bs-11647R,跨膜蛋白59抗体|TMEM59抗体价格
CAS:589-68-4,1-肉豆蔻酸单甘油酯标准品/对照品
甲氧氯普胺对照品/标准品
bs-15331R,9号染色体开放阅读框50抗体|C9orf50抗体价格
CAS:474-25-9,鹅去氧胆酸现货供应
来那度胺 厂家|CAS号-6
沙棘油对照品/标准品
bs-0368G-PE-Cy7,PE-Cy7标记的羊抗小鼠IgM|Goat Anti-Mouse IgM/PE-Cy7抗体价格
bs-0813R,酪蛋白抗体|Casein抗体价格
闹洋花标准品/对照品
PO8031D???/胰蛋白胨大豆琼脂接触平板(三层无菌包装)真空包装培养基厂家
头孢甲肟标准品/对照品
重组人/恒河猴 HER4/ErbB4 蛋白(Fc 标签)/10363-H02H
CAS:,二氢石蒜碱标准品/对照品
bs-11164R,细胞粘附分子伴侣蛋白1抗体|Sidekick 1抗体价格
重组小鼠 CDCP1 蛋白(His 标签)/51110-M08H
拉米夫定中间体 CTS厂家|CAS号-8
大鼠抵抗素(Resistin)ELISA试剂盒,96T/48T
CAS:319-85-7,&-六六六标准品/对照品价格
5-甲基四唑|CAS号|5-Methyl-1H-tertazole
CAS:-6,卡泊三醇类现货供应
bs-2680R,NFAM1抗体|NFAM1抗体价格
bs-6662R,非受体酪氨酸蛋白激酶2抗体|TYK2抗体价格
苯甲酸乙酯对照品/标准品
重组小鼠 CD31/PECAM-1 蛋白(His 标签)/50408-M08H
氯铬酸吡啶盐|CAS号|Pyridinium chlorochromate
bs-1983R,微小染色体维持缺陷蛋白7抗体|MCM7抗体价格
Tris-HCl缓冲液(1mol/L,pH8.8)公司竭诚为广大科研用户提供最全面，最优质，价格最具优势的产品，免费为您提供全程技术指导，解决您的后顾之忧。公司供应各种高品质科研试剂及各种规格包装定制，请联系我们。
风险防范建议：合作之前请先核验对方身份，如：传真营业执照等；涉及资金往来，建议均使用对公账户。药品资讯网保留删除上述展示信息的权利；我们欢迎您举报不实信息，共同建立诚信网上环境。上海江莱生物科技有限公司
您的位置：
> 4XSDS-PAGE分离胶缓冲液（PH=6.8）
4XSDS-PAGE分离胶缓冲液（PH=6.8）
点击次数：127发布时间：
公司名称：上海江莱生物科技有限公司
更新日期：
所 在 地：中国大陆
产品型号：
简单介绍：4XSDS-PAGE分离胶缓冲液（PH=6.8）本公司致力于试剂，生物试剂，Elisa试剂盒，生化试剂，培养基等优秀产品的销售与服务。同等价格比质量、同等质量比价格。质量有保障，现货供应，发货及时。免费技术咨询欢迎来电询购。
相关标签：&&&
联系人：康小姐
国产,进口4XSDS-PAGE分离胶缓冲液（PH=6.8）
厂家直销4XSDS-PAGE分离胶缓冲液（PH=6.8）价格
4XSDS-PAGE分离胶缓冲液（PH=6.8）& &&质量保障，试剂规格：250ml公司倾力为各大科研单位及实验室提供优质产品：生物试剂、ELISA试剂盒、培养基、生物试剂、抗体、ELISA试剂盒等产品。购买【4XSDS-PAGE分离胶缓冲液（PH=6.8）&】本公司产品可享受免费技术服务。公司本着以人为本，服务到位，质量保障的目的赢得广大科研工作者的一致肯定和赞许。4XSDS-PAGE分离胶缓冲液（PH=6.8）&&&相关产品：P0400,察氏琼脂培养基/察氏培养基/Czapek Dox Agar,用于酵母菌的培养,250克,RTCAS:，3-甲氨基丙胺，英文名称：N-Methyl-1,3-diaminopropane|Cbz-Asp（OMe）-OH，产品名称：Cbz-Asp（OMe）-OH Cas No.： 分子式：C13H15NO6 分子量：281.26 含量：98%乙酰CAS:123-54-6,Acetylacetone,密封阴凉避光保存。有机合成，色层分析用试剂，过渡金属螯合剂。比色法测定铁和，在二硫化碳存在时测定,GCS,&99.6%（GC）甘氨酸价格,Glycine,产地:国产,规格:100gCAS:520-26-3，二氢黄酮甙，97%价格|现货,Hesperidin,0.97CAS:,4-（二氟甲氧基）苯甲基溴,纯度：97%,规格：1g96T/48T,小鼠可溶性白细胞分化抗原30ELISA试剂盒,（sCD30）Elisa试剂盒Mousesolubleclusterofdifferentiation30,sCD30ELISA试剂盒果胶酶Y-23,PectolyaseY-23,产地:YaKult.Co,规格:1g-3，三苯咪唑亚砜,标准品，Triclabendazolesulfoxide，冻存管,产地:Axygen,规格:1.8ml色谱四氯化碳价格,产地:Fisher,规格:500mlCAS:,3-甲基-2-吡啶酮,纯度：97%,规格：1g甲酸乙酯,规格型号:CP500mlCAS:，（S）-（-）-1,1-二苯基-1,2-丙二醇，英文名称：（S）-（-）-1,1-Diphenyl-1,2-propanediol肉桂酸50Cinnamic acid,检测方法/纯度:HPLC&98%,规格:20mg/支7-羟基-4-三氟甲基香豆素价格,&-Trifluoromethylumbelliferone[7-Hydroxy-4-trifluoromethylcoumarin],产地:,规格:100mg现货,人乙酰肝素酶Elisa试剂盒价格|保质量,Human Heparanase,HPA ELISA试剂盒,96T/48T,-1|（S）-3-N-Boc-4-（甲氧基-甲基-氨基甲酰胺基）-2,2-二甲基f唑烷，产品名称：（S）-3-N-Boc-4-（甲氧基-甲基-氨基甲酰胺基）-2,2-二甲基f唑烷 Cas No.：-1 含量：98%RecombinantHumanI-TACCXCL11价格,产地:Peprotech,规格:5ug|20ug脂肪酸甲酯试剂盒24标准品FAME Kit价格,英文名称:FAME Kit,规格:（kit）碱性蛋白酶（1：200000）价格,BR,CAS:95-13-6,茚,纯度：90%,规格：50mlCAS:615-54-3,1,2,4-三溴苯,纯度：95%,规格：5gCAS:-2,2-氯-6-（三氟甲基）烟酸,纯度：97%,规格：500mg（solutecarrierfamily4:sodiumbicarbonatecotransporterNBC1）CAS:-9,朝藿定B英文名:EpimedinB,纯度:&98%无醇三氯甲烷,规格及包装:AR,500ml素p450催化的代谢机制代谢为环二十碳三烯酸。AA和它的代谢物在各种生物进程中起主要作用，包括信号传导、平滑肌收缩、化学趋避性、细胞扩增、分化及凋亡。AA还被证实结合到G蛋白的&亚单元， CAS:，甲基丙基二硫，英文名称：MethylPropylDisulfide编号:bs-0734R,角质形成细胞生长因子受体/纤维母细胞生长因子-7抗体,Anti-KGF/FGF-7（Keratinocytegrowthfactorprecursor）,规格:0.1ml/0.2ml,1，8-二-9，10-二苯乙炔基蒽CAS:,Dichloro-9,10-bis（phenylethynyl）a,黄色荧光剂,9CAS:，聚苯乙烯（PS），英文名称：Polystyrene2.0ml离心管,产地:Axygen,规格:500支/盒现GMS10060.1,动物细胞&-半乳糖苷酶活性高质敏感比色法定量检测试剂盒,20次
会员类型：免费会员
工商认证： 【未认证】
最后认证时间：
注册号：****
企业类型：代理商
注册资金：人民币万
请告知该产品价格与相关资料，谢谢！ 上传我的文档
 下载
 收藏
毕业于医学院校，在医院工作，有相对丰富的护理经验
 下载此文档
正在努力加载中...
SDS缓冲液制备
下载积分：1500
内容提示：SDS缓冲液制备
文档格式：DOC|
浏览次数：0|
上传日期： 16:31:46|
文档星级：
该用户还上传了这些文档
SDS缓冲液制备
官方公共微信君，已阅读到文档的结尾了呢~~
常用缓冲液配制方法
扫扫二维码，随身浏览文档
手机或平板扫扫即可继续访问
常用缓冲液配制方法
举报该文档为侵权文档。
举报该文档含有违规或不良信息。
反馈该文档无法正常浏览。
举报该文档为重复文档。
推荐理由：
将文档分享至：
分享完整地址
文档地址：
粘贴到BBS或博客
flash地址：
支持嵌入FLASH地址的网站使用
html代码：
&embed src='/DocinViewer-4.swf' width='100%' height='600' type=application/x-shockwave-flash ALLOWFULLSCREEN='true' ALLOWSCRIPTACCESS='always'&&/embed&
450px*300px480px*400px650px*490px
支持嵌入HTML代码的网站使用
您的内容已经提交成功
您所提交的内容需要审核后才能发布，请您等待！
3秒自动关闭窗口