如何证明取下来病理学组织切片切片是自己的

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2016-07-19 01:06 标签： 病理切片制作过程
病理学切片诊断依据（一）
病理学切片诊断依据（一）
01class病理医生拿到切片后，首先就是肉眼观察，这一步很重要，往往可以作出比较明确的诊断，例如主动脉粥样硬化、淋巴结转移性癌、支气管鳞状上皮化生、胃消化性溃疡、急性蜂窝织炎性阑尾炎，即使不能作出诊断，也可以确定组织来源。镜下观察前，一定要调整好瞳间距、光亮度等，作好一切准备工作，然后从低倍镜开始，一步一步深入。往往可以在10倍镜时完全作出诊断，而40倍镜仅是作为补充诊断。诊断依据需要写出能够判断为该种病症的相关变化，不要求全部写出，但应当尽量全面。所有癌的诊断中都必须有对于肿瘤细胞异型性的详细描述。下面给大家汇总病理学切片诊断依据如下：急性蜂窝织炎性阑尾炎诊断依据：1.阑尾组织管壁增厚，管腔变窄；2.阑尾粘膜部分变性坏死并脱落形成溃疡，粘膜下层充血水肿；3.肌层平滑肌纤维仍然存在，浆膜下充血水肿，系膜充血；4.从粘膜到浆膜，各层均有大量中性粒细胞弥漫浸润。肝细胞癌诊断依据：1.癌细胞呈多角形、核大、核仁明显，排列成条索状或团状；2.癌细胞异型性大，核浆比例失常、核大浓染，染色质分布不均；3.有巨核或多核瘤巨细胞；4.病理性核分裂像：不对称性、多极性、顿挫型核分裂像；5.癌组织内有坏死、出血；6.癌细胞排列呈腺腔样，其中有胆汁形成；7.排列成条索状的癌细胞索间无间质，癌细胞直接与血窦相连。淋巴结转移性癌诊断依据：1.淋巴结的部分结构破坏消失，而为癌组织所取代；2.癌巢呈实体性或呈腺管样结构，异型性明显；3.输入淋巴管与皮质边缘窦内均有转移癌细胞团，尚可见正常淋巴滤泡。　　乳头状瘤诊断依据：1.肿瘤呈乳头状结构；2.间质为树枝状纤维血管组织，其表面覆盖鳞状上皮，上皮与间质结缔组织的界限清晰；3.向皮肤表面生长的乳头瘤细胞与正常表皮细胞极为相似。　　角化性鳞状细胞癌诊断依据：1.一侧粘膜破坏消失，癌组织向粘膜下层及肌层浸润性生长；2.癌巢大小、形状不一，癌巢中央为角化珠（癌珠）；3.间质中有淋巴细胞及浆细胞等炎性细胞浸润。　　大肠息肉状腺瘤诊断依据：1.肉眼观察切片上有一小圆形结节状物；2.息肉由多数密集的腺管构成，衬以单层柱状腺上皮，排列规则，内有大量杯状细胞；3.腺腔形状不规则，且肿瘤增生导致腺腔狭窄；4.间质为结缔组织，内有淋巴细胞及浆细胞浸润。　　直肠腺癌诊断依据：1.癌巢呈腺管样结构，管腔大小轮廓与排列都不规则；2.癌细胞排列层次紊乱，腺上皮呈单层或多层，细胞核大而深染，形态异型，核分裂像易见，未见杯状细胞；3.癌组织突破粘膜肌层，向下浸润到粘膜下层，甚至肌层，癌组织浸润处的原有组织尽被破坏。　　乳腺实体癌诊断依据：1.间质结缔组织内有实性团、索状癌细胞巢，个别癌巢呈腺管状；2.癌细胞大，多角形，边界较不清，多呈合浆状；3.间质结缔组织内有少许淋巴细胞及浆细胞浸润。
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TA的最新馆藏作者：彭谨（医学硕士，法医病理学博士研究生，神经生物学与组织胚胎学讲师）
恶性肿瘤严重的危害人类健康。对于大多数人来说，当自己被医生告知患上肿瘤的时候，各种忐忑和恐惧就会迅速涌向心头。这时医生也许会告诉你，别慌，事情可能还没有那么糟糕，因为活检结果还没有出来呢。
1. 什么是肿瘤组织学活检？
临床医学是一门同时结合了经验和科学的复杂科学，在对疾病进行诊断的过程中，很多时候医生并不能简单依靠观察患者的各种外在表现，询问病人各种病史来获得最终的准确诊断。很多时候，医生甚至会面临着简单的切下病人的肿瘤还是切下病人一条腿这样的艰难的临床决策。在这种情况下，医生需要的就是进一步的证据：用显微镜来对病变进行进一步检查。
很早以来，显微镜就被用到了对病人的肌体进行观察的临床实践当中。但是，当早期的病理学家把一小片从病人身上切割下来的组织（你可以理解为一小片肉）放到显微镜下的时候，他们会沮丧的发现，如果这片组织太厚，则医生无法观察到组织内部的各种结构。而如果这片组织太薄，那么医生看到的就是一层半透明的薄膜而已。
要想在显微镜下清晰地观察到组织和细胞的各种细微结构，最重要的是对活检的细胞进行切片和染色。现代病理学的组织切片往往需要将一片组织切到3-5微米（原文为6~8微米）的厚度，这个厚度相当于一根头发丝的1/10，而染色的方法则是利用各种千差万别的染料来对组织和细胞进行染色。
【医生正在对患者的脑组织做活检 图片出处：维基百科】
2.肿瘤活检需要多长时间？
无论是多么锋利的小刀，都无法直接把一小片从病人手里取下的组织切成只有一根头发丝1/10厚度的薄片。为了解决这一问题，一种合理的方法是在切片之前采用一些技术来把标本变得更硬。常见的把标本变得硬一些的技术包括冰冻和石蜡包埋固定。
冰冻是一种我们很容易想到的把标本变硬的技术，火锅店加工羊肉片的工人也会采用类似的方法来获得更薄的羊肉卷儿。但是，如果我们利用常规的冰箱冷冻的组织块，将其切片后放在显微镜下观察是，我们会发现显微镜视野下的组织块会迅速发生崩解，因为组织里面的水在结冰—解冻的过程中会破坏大部分我们想要观察到的细胞结构。因此，要利用冰冻的方法获得细胞结构完整的组织切片，必须利用液氮或者超低温冰箱来对标本进行迅速冷冻，而且整个切片过程也需要在温度很低的冷冻切片机上完成。另外，利用这种方法做好的切片无法长期保存，需要尽快进行分析研究或者拍下照片进行存档。现有的研究表明，冰冻切片的清晰度和对于细胞结构的可判别性也相对较差。由于以上的缺陷，冰冻切片技术只能用在某些必须进行快速病理诊断的场合。
另一种固定标本的方法就是让组织块中的液体水分被固体的石蜡所代替。由于水和石蜡之间并不能相互混溶，因此需要一系列的复杂方法来对标本进行脱水。同时要尽力保证标本的基本结构不会在脱水过程中遭到破坏。常见的脱水过程是把组织块放入浓度依次为50%-70%-83%-95%-99%-100%的酒精当中，一般来说，每个浓度等级的酒精都要放置两小时或者更长的时间。完成这一步骤之后，组织块里的水分基本上就可以认为被酒精代替了。
但是石蜡和酒精之间依然不能相互混溶，接下来需要用二甲苯来代替组织当中的酒精，类似上面的脱水过程，标本会被继续侵泡在逐渐增加浓度的二甲苯酒精溶液当中，这个步骤同样需要花好几小时到几十小时。
最后，当组织中的水分和酒精都被二甲苯代替之后，我们再重复类似的过程，把标本块依次浸泡在浓度逐渐提升的石蜡溶液中。制作石蜡块的步骤是如此繁琐，因此，病理科的医生和技师们往往在获得一批标本之后来统一制作石蜡块。
制作完成石蜡块之后并非万事大吉，接下来的石蜡块将会被放入切片机上由手工来进行切片。切片的过程也非常繁琐，薄薄的石蜡切片吹口气就可以飞走；各种难以防范的静电现象会随着气温和空气湿度的变化时隐时现；这些问题都会让切片的过程变成病理科的医生和技师的一场与各种说不清道不明的自然现象斗智斗勇的舞台。曾经有一次笔者在实验室工作到半夜两点也没有解决薄薄的蜡片卷起来的问题，结果第二天，实验室的老技师将一张在冰水中浸泡过的白纸贴在蜡块上，几分钟之后，卷片的现象神奇地消失了。这件事情花了我好几天的时间来解决。而且数周后当我再次进行类似的切片工作时，却再也没有遇到类似的情况。现在回想起来，实验室技师告诉我的这个小技巧可能和实验室里难以捉摸的温度与湿度变化有关。
完成切片之后的下一步骤是染色。最常见的染色方法是利用两种分别叫苏木素和伊红的染色剂来对细胞内酸性或者碱性的物质进行染色。一般情况下，细胞核会被苏木素染成蓝紫色，而伊红可以把细胞核染成红色，两种颜色作用之下，具有清晰的细胞核和细胞质的细胞就可以显现出来。
对于有经验的医生来说，利用一张由苏木素和伊红染色所获得的切片就可以对很多疾病进行诊断。但是随着医学科学的发展，医生往往不会只对显微镜下细胞的形状和结构感兴趣，还需要了解是否某种切片中分布了某种特定的蛋白质。已有多项研究证明，某些特定的蛋白质很可能和肿瘤的类型、发展阶段、以及潜在的治疗密切相关。蛋白质的种类千差万别，传统的化学染料不可能对每一种蛋白质都能够进行特征性的标记，要单独判断某种特定蛋白质是否存在于特定细胞之中，则需要利用抗原-抗体的反应来标记特定的蛋白质。
不同的蛋白质需要不同的抗体来进行标记。为了临床检测的准确计，这些抗体往往都是由专业的抗体生产商提供。由于抗体的保质期较短（冷冻的情况下只有几个月时间），医生会向抗体商订购一批抗体之后成批地对患者的标本进行免疫学检测。这也使得很多时候患者需要花费数周时间等待自己的免疫学病理报告检测结果。
总之，病理活检切片的制作是一个需要十几个甚至几十个步骤的繁琐过程，正常的石蜡制作切片会花费医生和技师数个工作日的时间才能获得可供病理科医生进行判读的普通染色切片。而如果要利用免疫学技术来检测特定蛋白质的表达，所需要的时间则会延长到数周。
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