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脐带间充质干细胞分化为胰岛样细胞及其与骨髓间充质干细胞的比较
【摘要】：间充质干细胞具有自我更新和多分化能力,在一定的培养条件下可分化为多种不同的细胞,是组织工程的理想细胞。
此论文将脐带来源的间充质干细胞(UC-MSCs)诱导分化为胰岛样细胞,并将其与骨髓来源的间充质干细胞(BM-MSCs)进行比较。与BM-MSCs相比,UC-MSCs具有明显更强的增殖能力。经过诱导培养后,UC-MSCs所形成的胰岛样细胞团块比BM-MSCs大,表明UC-MSCs可更有效地被诱导为胰岛样细胞。采用细胞免疫荧光法分析发现,胰岛细胞特异性转录因子PDX-1在分化的UC-MSCs内的表达水平明显高于分化的BM-MSCs。流式细胞分析结果表明另一个胰岛细胞特异性标志物C-peptide的表达细胞比例在分化的UC-MSCs内也高于分化的BM-MSCs,分别为53.3%和30.9%。放射免疫测定法发现,在诱导分化了3天后,分化的UC-MSCs分泌胰岛素的水平也高于分化的BM-MSCs,分别为33.7 mIU/L和25.5 mIU/L。另外,与BM-MSCs相比,UC-MSCs更容易获得,并且由于UC-MSCs来源于免疫系统尚未发育完善的新生儿脐带,不表达某些免疫膜蛋白,所以UC-MSCs作为组织工程种子细胞在移植后不容易被排斥掉,这对组织工程有非常重要的意义。
综上所述,与BM-MSCs相比,UC-MSCs有更强的增殖能力以及更强的胰岛细胞分化能力,并且具有更容易获得和不易引起免疫排斥的优势,所以UC-MSCs更适合于胰岛细胞的组织工程,此研究结果为治疗I型糖尿病有用的理论依据和较好的细胞来源。
【关键词】：
【学位授予单位】：汕头大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2008【分类号】：Q813【目录】：
摘要3-4Abstract4-8第一章 引言8-25 1.1 糖尿病的现状及其治疗方法概述8-9 1.2 人干细胞的来源9-17
1.2.1 骨髓来源的MSCs9-13
1.2.2 脂肪来源的间充质干细胞13-15
1.2.3 胎盘/脐带来源的MSCs15-16
1.2.4 其他来源的MSCs16-17 1.3 胰岛素分泌细胞分化概况17-24
1.3.1 参与调控分化的物质17-18
1.3.2 干细胞及其诱导分化18-24 1.4 实验目的和意义24-25第二章 实验材料与实验方法25-34 2.1 实验材料25-28
2.1.1 标本材料来源25-26
2.1.2 细胞培养试剂26-27
2.1.3 细胞检测及分子生物学试剂27-28
2.1.4 主要实验仪器与设备28 2.2 实验方法28-34
2.2.1 培养液以及消化液的配置28-29
2.2.2 人UC-MSCs 的体外分离培养29-30
2.2.3 人BM-MSCs 的体外分离培养30
2.2.4 流式细胞术鉴定细胞表面抗原及胞内蛋白表达30-31
2.2.5 体外诱导间充质干细胞向成骨细胞分化31
2.2.6 体外诱导间充质干细胞向胰岛样细胞分化31-32
2.2.7 von-Kossa 染色32
2.2.8 ALP（碱性磷酸酶）染色32
2.2.9 细胞免疫荧光检测32-33
2.2.10 放射免疫法（RIA）检测胰岛素分泌33
2.2.11 统计学分析数据33-34第三章 实验结果34-45 3.1 UC-MSCs 和BM-MSCs 的体外培养生长状况34-35 3.2 UC-MSCs 和BM-MSCs 的表型特征35-38
3.2.1 FACS 抗原表型分析35-36
3.2.2 成骨细胞分化潜能36-38 3.3 UC-MSCs 和 BM-MSCs 诱导成胰岛样细胞的形态变化38-39 3.4 UC-MSCs 和 BM-MSCs 被诱导分化后胰岛标志性蛋白的表达情况39-40 3.5 胰岛素分泌量的测定40-45第四章 讨论与小结45-50 4.1 讨论45-49 4.2 小结49-50参考文献50-59致谢59-60个人简历、在学期间发表的学术论文60
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京公网安备75号脐带间充质干细胞 -
脐带间充质干细胞（MSCs）具有较高的分化潜能，可向多个方向进行分化。它在骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、内皮和心肌等组织工程方面具有广阔的临床应用前景。有报道从人脐带中分离出MSCs，且细胞含量、增殖能力优于骨髓MSCs，免疫原性比骨髓MSCs低，并且具有取材方便，无伦理学争议等优点，因此越来越受到研究工作者们的关注。干细胞的培养体系主要应用含动物血清（如胎牛血清）的培养基，在此种环境下生长的干细胞，其内部结构会发生何种变化尚未可知，为避免含动物血清培养中病毒等病原体污染和异种血清所致的过敏反应，课题组进行了以人脐带血血清为主体的培养体系体外培养扩增脐带间充质干细胞的实验研究。以探讨人脐带血血清替代动物血清用于培养临床组织工程用干细胞的可行性。同时研究脐带间充质干细胞形态学、生长特性、细胞周期、免疫表型等特性，旨在建立脐带间充质干细胞的富集方法，为建立脐带间充质干细胞库和临床应用提供有力的理论依据。
脐带间充质干细胞 -
取新鲜健康脐带，用PBS冲洗干净后，用剪刀镊子剔去血管，剥出里面的华氏胶组织，将所得组织充分剪碎至1 mm大小，加入α-MEM培养液置于37℃，5%的CO培养箱培养，培养液中含10% FBS，100U/ml青霉素，100U/ml链霉素。脐带组织培养5-7天后，可见有部分细胞从组织块周围爬出，形态呈细小的梭形，一周后，细胞开始迅速增殖，形成大小不等的细胞集落，待细胞长满后，用0.25%胰蛋白酶消化传代。脐带间充质干细胞
脐带间充质干细胞 -
一、能具有较强的免疫调节作用，可用于治疗红斑狼疮和硬皮病等自身免疫性疾病，降低细胞或器官移植后的免疫排斥反应，提高细胞或器官移植的成功率；脐带间充质干细胞二、能促进造血恢复功能，与单一造血干细胞移植比较，间充质干细胞和造血干细胞共移植能显着提高白血病和难治性贫血等疾病的治疗效果；脐带间充质干细胞三、能修复损伤或病变的组织器官，用于治疗骨和肌肉衰退性疾病、心脑血管疾病、肝病、脑及脊髓神经损伤和老年痴呆等。
脐带间充质干细胞 -
干细胞研究
期刊简介脐带间充质干细胞《中国组织工程研究》杂志（原《中国组织工程研究与临床康复》）由中华人民共和国卫生部主管，中国康复医学会与《中国组织工程研究与临床康复》杂志社主办。杂志发表关于干细胞；组织构建；生物材料；骨关节植入物；组织器官细胞移植以及计算机辅助数字化技术的应用基础及临床研究，转化医学和偱证医学研究，发表中国组织工程研究领域一流水平的学术、技术创新成果。研究对象胚胎干细胞，脐带干细胞，软骨干细胞，脐血干细胞，羊膜干细胞，羊水干细胞，骨髓间充质干细胞，造血干细胞，肿瘤干细胞，精原干细胞，生殖干细胞，成骨干细胞，肌肉干细胞，神经干细胞，脂肪干细胞，心脏干细胞，气管干细胞，肝脏干细胞，胰腺干细胞，胃肠干细胞，内皮干细胞，角膜干细胞，皮肤干细胞，毛囊干细胞，乳腺干细胞，前列腺干细胞，涎腺干细胞等干细胞相关基础与临床研究成果，以及血液疾病的造血干细胞移植相关问题……研究内容干细胞研究的生物学特性、培养与分化、诱导技术、干细胞与微环境、干细胞与微小RNA调节、干细胞因子及相关因子、干细胞表型与鉴定、干细胞移植与免疫耐受、细胞移植与基因表达、细胞编程与表观遗传、干细胞保存与质量、干细胞实验动物模型等学术和技术的热点问题。研究成果及应用国内间充质干细胞的研究在2015年有了新的突破，北大未名研究及应用的脐带间充质干细胞全器官逆龄抗衰(第四代)，69800元不到市场价的1/10。国人可以享受低价高效的顶尖技术，达到全系抗衰、器官修复、器官减龄的目的。
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