【图文】红细胞微柱凝胶试_百度文库
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红细胞微柱凝胶试
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你可能喜欢微柱凝胶交叉配血不合原因分析--《中国血液流变学杂志》2005年03期
微柱凝胶交叉配血不合原因分析
【摘要】：
【作者单位】：
【关键词】：
【分类号】：R457【正文快照】：
输血前交叉配合试验是安全输血的重要手段。通过检测受、供者血液间有无不相配合的抗原、抗体成分,有效地预防溶血性输血反应的发生。交叉配血试验方法很多,有盐水介质法、酶法、凝聚胺法(MPT)、抗人球蛋白法(AGT)。近年来,微柱凝胶试验(MGT)由于其明显的优点已在国外成为常
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【参考文献】
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京公网安备75号微柱凝胶试验
微柱凝胶试验技术
微柱凝胶试验是红细胞膜抗原与相应抗体在凝胶介质中发生的凝集反应，是一种免疫学检测新技术。自1986 年Lappierre 发明以来，经过不断改进和临床的大量应用，目前已很完善，在一些先进国家，已成为常规的红细胞血型血清学检测新技术。
（一）微柱凝胶试验的原理
在微柱凝胶介质中，红细胞抗原与相应抗体结合，经低速离心凝集的红细胞悬浮在凝胶中，而未和抗体结合的红细胞则沉于凝胶底部（管底尖部）。
微柱胶分中性胶、特异性胶和抗球蛋白胶，分别用于不同的血型血清学实验。在中性凝胶实验中，凝胶不含抗体，可用于检测IgM 类抗体和红细胞抗原的反应，如ABO 血型正反定型等；在特异性凝胶试验中，凝胶中含特异性血型抗体，可用于血型抗原检测；在抗球蛋白凝胶试验中，凝胶中含有球蛋白抗体，可用于检测IgG 类不完全抗体与相应红细胞抗原的反应，如、不规则抗体检测和鉴定，以及应用人血清抗-D 检查D 血型等。
传统的抗球蛋白试验虽然是最可靠的、最确定的血型不完全抗体检测方法，但由于试验步骤复杂，需要时间长等特点，一直未能常规地应用于血型检测工作中。凝胶试验完全克服了传统抗球蛋白试验的缺点。
进口微柱凝胶试验试剂是在透明塑料卡上有6 个凝胶管，凝胶管可以是中性胶、特异性胶或抗球蛋白胶，试验时需使用专门的进口离心机和电子计算机，每套价格为几十万元人民币。
国产的微柱凝胶试验试剂由单一凝胶微管组成。试剂加入标本后，可放入一般试管中，37℃孵育15min，然后经800～1 000r／min 离心3min，肉眼观察结果。国产试剂质量已完全达到了进口试剂水平，而且不需进口离心机，只要国产低速水平转子离心机即可。推广应用凝胶技术，有利于统一标准，高质量、高效率、更安全地进行血型血清学常规工作。
（二）凝胶微柱抗球蛋白试剂的应用
每支凝胶微管分为反应腔和凝胶分离柱两部分。凝胶中含有抗球蛋白（单抗抗IgG），应用于IgG 类不完全抗体检测。注意反应腔内要先加红细胞，后加血清或抗体。
红细胞抗原在凝胶介质中反应，未凝集的红细胞通过离心后沉降于管底，为阴性反应。红细胞抗原与相应的不完全抗体结合后（致敏红细胞），与凝胶中的抗球蛋白形成凝集快，离心后仍滞留在胶上或胶中，为阳性反应。
抗球蛋白试验（The Antiglobulin Test）分为直接抗球蛋白试验（DAT）和（IAT）。
（1）试验：①取凝胶抗球蛋白微管2 支，标记1 号（主侧），2 号（次侧）。②将献血者红细胞（不洗）配成1%生理盐水悬液1 滴轻轻滴入1 号微管中，再加1 滴受血者血清。③将受血者红细胞（不洗）配成1%生理盐水悬液轻轻滴入2 号微管中，再加1 滴献血者血清。④将1号、2 号已加好反应物的凝胶管放入37℃水浴箱中孵育15min。⑤取出微管，立即用900r／min 水平离心3min 观察结果。
（2）不完全抗体筛检和鉴定：①将筛检红细胞或红细胞谱细胞（1%红细胞生理盐水悬液）分别加入标记好的微管反应腔中各1 滴。②然后分别立即加入被检血清1 滴。③将已加好反应物的凝胶管放37℃水浴箱孵育15min。④取出微管立即用900r／min 水平离心3min 观察结果。
（3）血型抗原检测：①将被检者红细胞（不洗）配成1%生理盐水悬液加1 滴到已标记好的微管反应腔。②再加已知抗体（不完全抗D 或抗C、抗E 等）1 滴滴于被检者红细胞上。③然后将已加好反应物的微管放37℃水浴箱中孵育15min。④取微管立即水平离心900r／min，3min 观察结果。
DAT 是直接检测被检者红细胞是否在体内被IgG 致敏，可将被检者红细胞洗1次，配成1%红细胞悬液，加1 滴入凝胶管中，即刻水平离心900r／min，3min 观察结果。该试验主要用于自身免疫性、药物引发的溶血、病和输血引起的同种异体免疫反应的检测，对临床和治疗有重要参考意义。
①若对照管细胞沉淀在管底，检测管凝集块在胶上或胶中判读为阳性。②若对照管和检测管的细胞沉淀均在管底判读为阴性。③若对照管细胞在胶上或胶中说明试验失败，应重新试验。一定要注意红细胞的浓度不能超过1%，否则会造成假阳性结果。
（三）离心机选择，孵育时间、离心时间及速度设定
1﹒离心机选择
水平转子离心机离心力和凝胶微柱中红细胞离心力是同一方向的（同轴线），这样阳性结果的凝集复合物不偏向凝胶表面一侧和胶中一侧；阴性结果的红细胞沉淀于凝胶微柱管尖底部。根据国内实际情况，只要是水平转子的国产离心机几乎都可进行凝胶试验。
2﹒孵育条件、离心时间、速度设定
为了选择不同离心半径的各种国产离心机（水平转子）进行凝胶试验，应通过实验设定每台离心机该试验的最佳离心时间和速度。
（1）阳性标本：通过常规试管凝集试验，选择凝集强度为4 ＋和3 ＋之间的抗-A、抗-B 单克隆抗体浓度为工作浓度（血凝效价一般为32～16）；阳性红细胞1%悬液。
（2）阴性标本：非相关的红细胞抗原和抗体。
（3）抗体和抗原：50μl 分别加入每支微柱凝胶试验管中。
（4）离心时间：分别为3min，5min 和10min。
（5）离心速度分别为900r／min 和1 500r／min，棋盘布置进行实验。
选择阳性结果和阴性结果最为明确的离心时间、速度为受试离心机进行凝胶试验的工作条件。
3﹒结果判定
Rh 血型D 抗原结果判定
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人民卫生出版社主办
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微柱凝胶卡标准操作程序
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