优秀研究生学位论文题录展示CYR61、CTGF和WISP-1在肺癌组织中的表达及莱菔硫烷对CYR61的影响专　业: 营养与食品卫生学关键词: 肺癌 CCN家族 莱菔硫烷 CYR61 CTGF WISP-1分类号: R734.2　
R730.2形　态: 共 87 页　约 56,985 个字　约 2.726 M内容阅　读: 内容摘要肺癌已成为世界上主要的肿瘤死因之一。而且多数证据显示：CCN蛋白参与肿瘤发生过程，在多种肿瘤中发现CCN蛋白上调或下调表达，提示CCN蛋白表达对肿瘤的发生起正向或负向的调节作用。人肺癌细胞株研究证实，CYR61和CTGF抑制肺癌细胞的转移和浸润，并视为肿瘤抑制因子。CYR61是非小细胞肺癌细胞的生长抑制因子，通过上调p53触发信号通路抑制非小细胞肺癌的生长。WISP-1和WISP-2在Wnt信号调节过程中起下调作用。莱菔硫烷SFN是十字花科植物中含有的一种异硫氰酸盐，在绿花椰菜中含量最多。SFN在肿瘤发生的多个阶段发挥抑制作用，而且还是潜在的肿瘤治疗药物。SFN与肿瘤的关系研究正成为肿瘤学和营养学研究的热点。本次实验，通过实时荧光定量PCR技术FQ-PCR和免疫组化方法分析CYR61、CTGF和WISP-1三种基因在肺癌原发灶及匹配正常肺组织中的表达和临床病理参数关系，通过MTT和FQ-PCR分析SFN干预对A549细胞株CYR61基因表达的影响，探讨SFN对A549细胞的作用。实验方法1.对象选择、组织样本的采集与病人相关病例的整理选取2002年至2005年在郑州大学第一附属医院就医的肺癌患者作为研究对象，采集手术后患者肺癌原发灶及其匹配的正常肺组织有效标本60对。大多数标本离体后不超过1h，均放在-70℃冰箱中冷冻保存。收集病人的性别、年龄、吸烟情况、结核病史、发病部位、病理类型、肿瘤大小、临床分型等方面的临床资料，便于统计分析和研究。2.采用Trizol试剂提取人体肺癌患者组织标本和A549细胞株RNA。通过1%的琼脂糖凝胶电泳及RNA的OD值评估RNA含量和纯度。3.使用Promega公司的AMV逆转录试剂盒进行cDNA的反转录。RT-PCR扩增β-actin检测逆转录效果。4.CYR61、CTGF和WISP-1三种基因在肺癌原发灶及匹配正常肺组织中表达量分析。FQ-PCR利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析；免疫组化方法分析CYR61、CTGF和WISP-1三种基因编码蛋白的表达情况。5.用MTT法检测SFN对A549细胞的抑制效应，计算不同浓度SFN对A549细胞的50%抑制率。摸索SFN对A549细胞的有效干预时间点和有效作用浓度区间。然后用SFN对体外培养的A549肺癌细胞株进行处理，最后用FQ-PCR技术检测SFN对体外培养的A549肺癌细胞株CYR61表达的影响。6.统计学分析对每个样本来说，用dCtCtβ-actin-CtcYR61值表示目的基因与内参基因β-actin间Ct的差值，ddCt值等于dCtexperimentalsample-dCtcalibratorvalue。对ddCt采用正态性检验。对肺癌样本每种基因的表达和家族史、转移、吸烟、肿瘤分级、肿瘤病理、肺结核、性别、肿瘤位置、肿瘤大小和患者年龄等单个临床参数间的关系采用t-检验和方差分析。采用Pearson相关分析，通过量化三种基因的表达结果估计相关程度，按0.05水准双侧概率确定结果有无统计学意义。采用多元线性回归分析，分析基因表达的影响因素。采用Mias2000图象分析系统对免疫组化结果进行半定量分析。用卡方检验分析肺癌患者原发灶及其配对正常肺组织的表达阳性率的差异。采用单因素方差分析，分析SFN干预前后A549肺癌细胞株CYR61基因表达量的差异。结果1.FQ-PCR结果显示：80%48/60的肺癌原发灶标本CYR61基因的表达低于其匹配的正常肺组织标本；65%39/60的原发灶标本CTGF基因的表达低于其匹配的正常肺组织标本；83%50/60的原发灶标本WISP-1基因的表达高于其匹配的正常肺组织标本。2.CYR61多元线性回归分析显示：CYR61基因表达主要受AC，SC和年龄的影响，其次受CTGF基因表达、吸烟、有无转移的影响，最后是左上位和家族史的影响。年龄和左上位起负调节作用，AC、SC、CTGF、吸烟、转移和家族史是正调节因子，这些自变量的联合作用促使肺癌组织CYR61基因的表达低于配对的正常肺组织。3.CTGF多元线性回归分析显示：右上位、CYR61的表达水平、左上位、左下位、性别、吸烟、SC以及WISP-1的表达水平以逐步递减的方式影响CTGF基因的表达，CYR61基因的表达水平、性别、吸烟和SC是危险因素，WISP-1基因的表达水平、左上位、左下位、右上位是保护因素。4.WISP-1多元线性回归分析显示：WISP-1基因表达主要受ASC的影响，其次受年龄和家族史的影响，很少受转移、腺癌、性别、CTGF基因表达量的影响，危险因素来自腺鳞癌、家族史和腺癌，保护因素有年龄、转移、性别及CTGF基因表达水平。5.MTT结果显示：SFN从40μM的浓度起开始出现细胞抑制效应，随着浓度的升高呈现剂量依赖效应，浓度越高抑制率越大；且40μM、80μM、100μM和160μMSFN等较大剂量不同浓度干预组在8h、16h、24h和32h等不同作用时间点具有时间效应关系，干预时间越长，抑制率越大。6.光镜下细胞形态：A549细胞培养32h后，溶剂对照、阴性对照及12.5μM的SFN处理组细胞形态学变化不明显；25μM的SFN处理组部分细胞皱缩、变圆，折光性上升；50μM的SFN处理组皱缩细胞数目增多；75μM的SFN处理组细胞皱缩数目增多，部分细胞漂浮，并可见细胞碎片。7.25μM和50μM浓度SFN干预组的CYR61基因表达量较高，按α=0.05检验水准双侧概率，25μMSFN组与50μMSFN组之间差异没有统计学意义，25μMSFN组和50μMSFN组与其它各组相比，差异有统计学意义。75μM浓度SFN干预组的CYR61基因表达低于50μM浓度SFN干预组。结论1.本研究通过对肺癌患者原发灶标本及其匹配的肺正常组织标本基因表达分析认为，CYR61和CTGF抑制肺癌细胞的转移和浸润，为抑癌基因，WISP-1为癌基因。2.CYR61、CTGF和WISP-1基因的表达与临床病理参数相关。CYR61基因的表达主要受AC、SC和年龄的影响，CTGF基因的表达主要受右上位、CYR61基因的表达水平、左上位的的影响，WISP-1基因表达主要受ASC的影响。3.SFN在一定浓度下对A549细胞株起抑制作用，在观察的时间浓度范围内，存在明显的时间效应关系和剂量效应关系，干预时间越长抑制率越大，干预浓度越大抑制率越大。4.SFN在25μM和50μM浓度组对A549细胞株CYR61基因的表达起促进作用..……全文目录论文说明：英文缩略词中文摘要英文摘要引言第一部分 CYR61、CTGF和WISP-1在肺癌组织中的表达第二部分 莱菔硫烷对A549肺癌细胞株CYR61的影响结论参考文献CCN家族与肿瘤关系的研究进展相似论文,58页,R734.2,99页,R734.2 R459.3,60页,R734.2 Q563.1,68页,R734.2,86页,R730.23 R737.25,52页,R730.21,137页,R730.2,52页,R730.231 R735.1,65页,R730.4 O657.31,84页,R730.5 R151.3,79页,R730.1 R151.3,59页,R730.55,50页,R730.5,37页,R730.3 R151.41 S646,72页,R730.53,81页,R730.1,100页,R730.54 R329.26,57页,R734,32页,R734,52页,R734中图分类:
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& 2012 book.请问免疫组化半定量中，阳性细胞百分率的分母是什么？是指整张切片所有细...
请问免疫组化半定量中，阳性细胞百分率的分...
看了很多半定量文献，提到阳性细胞率，但阳性细胞率是指阳性细胞数/整张切片中的细胞数，还是指阳性细胞数/肿瘤细胞数，很困惑，也找不到相关的资料证明？如果可以请提供相关参考文献，谢谢！
医院出诊医生
擅长：肝癌、乳腺癌、胃癌、食道癌、肺癌、宫颈癌
擅长：治疗中晚期等恶性肿瘤、癌症
共1条医生回复
因不能面诊，医生的建议及药品推荐仅供参考
职称：医生会员
专长：全科
&&已帮助用户：27925
病情分析：肿瘤细胞实质就是肿瘤。肿瘤组织由实质和间质两部分构成，肿瘤实质是肿瘤细胞，是肿瘤的主要成分，具有组织来源特异性。它决定肿瘤的生物学特点以及每种肿瘤的特殊性。通常根据肿瘤的实质形态来识别各种肿瘤的组织来源，进行肿瘤的分类、命名和组织学诊断，并根据其分化成熟程度和异型性大小来确定肿瘤的良恶性和肿瘤的恶性程度。肿瘤细胞有三个显著的基本特征即：不死性，迁移性和失去接触抑制。除此之外，肿瘤细胞还有许多不同于正常细胞的生理、生化和形态特征。
意见建议：
问肿瘤细胞数正常细胞数的比值低于5100,不排除假阴性?
职称：医师
专长：胃出血,胆囊息肉,阑尾炎
&&已帮助用户：125320
指导意见：你好，是的，应定期进行全面的体检，各种常规检验及具有一定特异性的化验，如甲胎蛋白、癌胚抗原等。　
问中性细胞数为1.48对于一个卵
职称：主治医师
专长：内科,尤其擅长上呼吸道感染
&&已帮助用户：72863
问题分析：你好，中性粒细胞数是血常规的一个项目，不是单独拿出来看的，需要结合其他项目一起看，意见建议：如果你的白细胞红细胞血红蛋白血小板都是正常的，那么完全不必理会这个项目不正常，不能说明任何问题的，手术前没有什么需要注意护理的，
问圆形细胞恶性肿瘤
职称：医师
专长：妇产科
&&已帮助用户：280630
你好 这样的情况确实是恶性病变了。需要遵医嘱继续的治疗
问您好,胡老师,我看到您在其它病人的回答中有提到:萎缩肿...
职称：医师
专长：脂肪瘤，痔疮，疝气，阑尾炎等，
&&已帮助用户：406342
指导意见：一般是需要积极配合医生进行治疗的， 建议 配合采用中医治疗。中医中药有扶正祛邪，补气养血的功效，能提高机体免疫力，
问体检为血清肿瘤相关物质可疑阳性且近一年来尿红细胞+++
职称：医师
专长：社区医师、妇科
&&已帮助用户：120017
这种情况建议最好是进一步细查确诊一下再考虑治疗
问我的血夜一直阳性没发现过葡萄胎和肿瘤做过化疗现在直...
职称：医生会员
专长：宫颈糜烂
&&已帮助用户：52547
病情分析： 您好，根据你的这些以上内容的描述，你的情况应该是葡萄胎的情况意见建议：葡萄胎随访：你好，葡萄胎患者应定期随访，HCG定量测定，葡萄胎清宫后每周一次，直至降低到正常水平，随后3个月内仍每周一次，此后3个月内每2周一次
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如何正确地对免疫组化结果进行半定量评分
【幻葬】254&5-22 14:58
详细问题描述及疑问：期待您的答案，不知道说什么,送你一朵小红花吧
！
问题补充&&
本页链接：
能用于WB的未必能用于IHC中，买抗体的时候咨询一下。只表示**的话，WB没意义了。
浩忠华兰秋 &5-27 19:24
&#8226;&#8226;&#8226;&#8226;&#8226;
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血红素结合蛋白对脑出血后自由基生成和脑水肿形成的影响
&&&&&&&&&　　近期，四川省泸州市人民医院神经内科研究人员发表论文，旨在探讨血红素结合蛋白（Hx）对脑出血（ICH）后自由基生成和脑水肿形成的影响。研究指出，血红素结合蛋白对脑出血后血肿周围组织自由基生成和脑水肿的形成具有抑制作用。该文发表在2015年第05期《四川大学学报(医学版)》杂志上。 　　100只SD大鼠随机分为假手术组、ICH对照组、Hx去除组、Hx干预组，每组25只，分为术后1d、3d、7d、
　　近期，四川省泸州市人民医院神经内科研究人员发表论文，旨在探讨（Hx）对（ICH）后自由基生成和形成的影响。研究指出，血红素结合蛋白对脑出血后血肿周围组织自由基生成和脑水肿的形成具有抑制作用。&该文发表在2015年第05期《四川大学学报(医学版)》杂志上。
　　100只SD大鼠随机分为假手术组、ICH对照组、Hx去除组、Hx干预组，每组25只，分为术后1d、3d、7d、14d、21d等5个观察点，每个时间点均为5只大鼠；采用立体定向注射技术，向大鼠右侧尾状核注射去除或外加Hx后的自体全血制作ICH模型。ICH对照组注入自体全血50&L；Hx去除组注入采用亲和层析法去除Hx后的自体全血50&L；Hx干预组注入外加0.25mg（5&g/&L）Hx后的自体全血50&L；假手术组注入等量生理盐水。按照Bederson评定方法进行模型成功评价，并对造模失败的模型以备用大鼠补充；采用Garcia法进行神经功能障碍评分；采用干湿法测定血肿周围脑组织含水量；采用黄嘌呤氧化酶法测定（SOD）活力；采用硫代巴比妥酸法测定（MDA）含量；光镜观察各时间点ICH后血肿周围脑组织Hx免疫组织化学染色结果，采用双评半定量法进行免疫组化评分，观察其表达情况。
　　术后3～21d，与假手术组相比，ICH对照组、Hx去除组及Hx干预组神经功能障碍评分、脑组织含水量、Hx蛋白免疫组化评分差异均有统计学意义（P&0.05）。术后1～21d，与假手术组相比，ICH对照组、Hx去除组和Hx干预组SOD活力、MDA含量差异均有统计学意义（P&0.05）。Hx去除组上述指标均差于ICH对照组（P&0.05），Hx干预组均优于ICH对照组（P&0.05）。
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17β-雌二醇作为扩充液对大隐静脉保护作用的研究
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