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为什么再做WESTEN-BLOT时跑电泳时没有条带,而在用BCA法测蛋白浓度时却有数值呢?本人是刚刚从事这方面的工作,忘有经验的学者,前辈们多多指教.
westernblot检测是用特定抗体检测特定蛋白,BCA法是检测蛋白浓度,即使BCA法检测蛋白浓度高,但也不一定有你检测的蛋白啊?还有你要保证你westernblot操作没问题哦,最好做个内参.
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跑完电泳后可以用考马斯亮蓝染胶看看有没有条带，如果蛋白提取过程是严格的，同时可以测到蛋白浓度，一般在染色1小时左右就可看到清晰的不同分子量的条带。考马斯亮蓝看到蛋白后，下一次转好膜后可以用立春红染膜，同样看到蛋白条带证明已经转膜成功。希望我的解答对你有所帮助。...
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大家来讨论下都是用什么方法测定蛋白质的浓度的，我用国产碧云天的BCA盒测蛋白浓度，样品是已经过了柱子超滤脱盐的蛋白样品，为什么加2微升和5微升样品测定，计算出来蛋白的浓度差别会很大呢？标准曲线还正常的，相关系数能达到2个9.
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双缩脲，是不是很糙啊。。。。
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我也不是很清楚，帮你顶一下吧。
签到天数: 1 天[LV.1]初来乍到
生物秀举人
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我们试过碧云天和takara的，结果发现大致差不多，但是takara的显色时间要比碧云天的要快~！
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BCA（博彩生物）和HPLC结果比较误差很小（在10%以内）。除此之外，如果知道目的蛋白的消光系数的话可以用280测，快速准确。
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生物秀进士
Bradford Protein Assay Kit
Bradford 蛋白质定量检测试剂盒& & & &
产品说明：Bradford试剂蛋白定量是一种快速，即用型的总量蛋白光学定量方法，在酸性条件下，考马斯亮兰G-250染料与蛋白质疏水区结合，导致最大吸收峰由465 nm 变为595 nm，同时颜色也由棕色变为蓝色,该蓝色化合物颜色的深浅与蛋白质浓度的高低成正比关系。将蛋白质样品或稀释的BSA 与Bradford试剂混合，测量在595 nm处的吸收值，在建立由一系列稀释的BSA建立的标准曲线的情况下，蛋白质的浓度可以根据标准曲线而确定。
产品特点：
1、 检测速度快，10-20个样品只需不足10分钟即可完成；
2、 灵敏度高，最小检测蛋白量达到0.2微克，待测样品体积为1-20ul；
3、 在10-150微克/毫升浓度范围内有较好的线性关系；
4、与还原性糖和还原性巯基试剂兼容；
5、可以采用分光光度法或酶标板法对蛋白进行定量。
编号& & & & 包装& & & & 价格& & & & 产地
SK3031& & & & 1000 Assays& & & & 150& & & & 生工
SK3033& & & & 1000Assays +10Microplates& & & & 230& & & & 生工
Modified Bradford Protein Assay Kit
改良型Bradford蛋白浓度测定试剂盒& & & &
产品说明：在使用常规Bradford试剂进行蛋白定量时，考马斯亮兰G-250染料分子之间，以及G-250与蛋白质复合物之间会发生聚集，随着时间的延长，产生可见的易沉降的颗粒，使得在595nm处测定的吸光度值A595时，蛋白质浓度的定量偏低。针对此种情况，本试剂盒通过添加特殊的试剂，使得考马斯亮兰G-250染料分子之间，以及G-250与蛋白质复合物在30分钟内不容易发生沉降，从而提高了测量结果的准确性。使得大量样品的定量变的从容不迫。
产品特点：
1.在30分钟内，G-250染料分子和G-250与蛋白质复合物不容易发生沉淀；
2.无论是分光光度法或酶标板法都有大小两种定量范围的操作方法；
3.还能够适应疏水的膜或粘蛋白的定量；
4.比较合适于从容不迫地进行大量样品的定量；
5.与常规的Bradford法相比，线形关系更佳，保证了结果的准确性。
编号& & & & 包装& & & & 价格& & & & 产地
SK3041& & & & 1000 Assays& & & & 360& & & & 生工
BCA Protein Assay Kit
BCA蛋白质定量检测试剂盒& & & &
产品说明：BCA法是理想的蛋白质定量方法，在碱性环境下蛋白质分子中肽键结构与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+。BCA特异地与Cu1结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562 nM处有最大的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，颜色的深浅与蛋白质的含量成正比，可以根据吸收值测定蛋白质浓度。该测定方法灵敏度高，操作简单，试剂及其形成的颜色复合物稳定性俱佳，并且受干扰物质去垢剂等影响小。
产品特点：
1.准确灵敏，线性范围广，BCA试剂的蛋白质测定范围是25－500μg/
2.快速：45分钟内完成测定，比经典的Lowry法快4倍而且更加方便;
3.不受样品中离子型和非离子型去污剂影响;
4.检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马氏亮蓝,可以酶标板法或分光光度计法测定蛋白质浓度。
编号& & & & 包装& & & & 价格& & & & 产地
SK3021& & & & 500 Assays& & & & 450& & & & 生工
Modified BCA Protein Assay Kit
改良型BCA蛋白浓度测定试剂盒& & & &
产品说明：在碱性环境中，蛋白质和Cu2+离子结合并将其还原成Cu+离子。BCA与Cu+离子结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562nm处有最大光吸收并与蛋白质浓度成线性关系，据此可测定蛋白质的浓度。与Lowery法相比，BCA法最大的优点就是不受去垢剂的影响。但样品中若存在还原剂，同样可以将Cu2+离子还原成Cu+离子，从而提高光吸收值。本试剂盒中的试剂C可以有效地降低蛋白质抽提样品中残留的还原剂对蛋白质浓度检测的干扰。当样品中的DTT浓度≤5mM或β-巯基乙醇浓度≤10mM时，蛋白质浓度的测定不会受影响。
产品特点：
1.在样品中的DTT浓度≤5mM或β-巯基乙醇浓度≤10mM时，光吸收值不受影响；
2.可以采用酶标板法或分光光度法进行蛋白质定量，定量范围为25-1000ug/ml；
3.需要的样品体积5-25ul；
4.不受样品中低浓度的离子型和非离子型去污剂影响。
编号& & & & 包装& & & & 价格& & & & 产地
SK3051& & & & 500 Assays& & & & 500& & & & 生工
Micro BCA Protein Assay Kit
BCA法微量蛋白质浓度测定试剂盒& & & &
产品说明:BCA法是理想的蛋白质定量方法，在碱性环境下蛋白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+。BCA与Cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562 nM处有最大的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，据此可测定蛋白质浓度。该测定方法灵敏度高，操作简单，试剂及其形成的颜色复合物稳定性俱佳，并且受干扰物质去垢剂等影响小。本试剂盒适用于微量蛋白质浓度的测定。
产品特点：
1.适用于浓度比较稀的蛋白质样品的定量；
2.定量范围：分光光度法0.5-20μg/ml；酶标板法2-40μg/ml；
3.与离子型或非离子型去污试剂兼容；
4.检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马氏亮蓝。
编号& & & & 包装& & & & 价格& & & & 产地
SK3061& & & & 1250 Assays& & & & 360& & & & 生工
Lowry Protein Assay Kit
福林酚蛋白浓度测定试剂盒& & & &
产品说明: 在碱性条件下，蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜络合物。此络合物将磷钼酸-磷钨酸试剂（Folin 试剂）还原，产生深蓝色（磷钼蓝和磷钨蓝混合物），这种深蓝色的复合物在745-750nm处有最大吸收峰，颜色深浅与蛋白质含量成正比。此法操作简便，灵敏度比双缩脲法高100 倍。
1．不同蛋白质分子之间的变异系数教小;
2．在40分钟内可以完成蛋白质定量过程;
3．有酶标板法和分光光度法两种定量程序
4．定量范围为5-100ul/ML蛋白质。
编号& & & & 包装& & & & 价格& & & & 产地
SK4031& & & & 1000 Assays& & & & 150& & & & 生工
SK4033& & & & 1000 Assays&&+10Microplates& & & & 230& & & & 生工
Stable Lowry Protein Assay Kit& &
稳定型Lowry法蛋白浓度测定试剂盒& & & &
产品说明: 碱性条件下，蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜络合物。此络合物将磷钼酸-磷钨酸试剂（Folin 试剂）还原，产生深蓝色（磷钼蓝和磷钨蓝混合物），颜色深浅与蛋白质含量成正比。此法灵敏度比双缩脲法高100 倍，定量范围为5-100μg/ml蛋白质。经典的Lowry法的主要缺点是由Reagent A和B按照一定比例配置成的碱性铜试剂（Reagent C）不稳定,需要当天配制，经典的Lowry法产生的颜色稳定性也不高，在反应20-120min内变化9.2%。本试剂盒采用一种改进的即用型稳定的碱性铜试剂代替经典Lowry法的Reagent A；B；C，使得实验操作更加的简单便捷，反应产生的蓝色复合物能够稳定存在至少2小时。而且该稳定型碱性铜试剂在4度，避光的条件下可稳定保存至少6个月以上，实验制得的标准曲线与经典方法基本吻合。用酶标板使用1000次或分光光度法100次。
产品特点：
1．即用型而且稳定的碱性铜试剂，使用更加方便；
2．有离心管法和酶标板法两种定量方法；
3．蛋白质浓度的线性范围在5-100μg/ml；
4．高的灵敏性保证了低蛋白质浓度样品的精确定量。
编号& & & & 包装& & & & 价格& & & & 产地
SK4051& & & & 1000 Assays& & & & 260& & & & 生工
Modified Lowry Protein Assay Kit& &
改良型Lowry法蛋白浓度测定试剂盒& & & &
产品说明: 在碱性条件下，蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜络合物。此络合物将磷钼酸-磷钨酸试剂（Folin 试剂）还原，产生深蓝色（磷钼蓝和磷钨蓝混合物），颜色深浅与蛋白质含量成正比。此法操作简便，灵敏度比双缩脲法高100 倍，定量范围为5-100μg/ml蛋白质。通过特殊的沉淀试剂可以完全去除蛋白质样品中的大部分干扰物质,而蛋白质的损失几乎为零.保证了结果的准确性和提高了定量的灵敏度。
1．特殊的沉淀试剂去除蛋白质样品中干扰物质，比常规lowry有更好的线性关系，结果更准确;
2．不同蛋白质分子之间的变异系数教小;
3．有酶标板法和分光光度法两种定量程序;
4．定量范围为5-100μg/ml蛋白质。
编号& & & & 包装& & & & 价格& & & & 产地
SK4041& & & & 1000 Assays& & & & 180& & & & 生工
Folin-Phenol Reagent&&
福林酚蛋白浓度测定试剂& & & &
产品说明:在碱性条件下，蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜络合物。此络合物将磷钼酸-磷钨酸试剂（Folin 试剂）还原，产生深蓝色（磷钼蓝和磷钨蓝混合物），这种深蓝色的复合物在745-750nm处有最大吸收峰，颜色深浅与蛋白质含量成正比。此法操作简便，灵敏度比双缩脲法高100 倍。
1．不同蛋白质分子之间的变异系数教小;
2．在40分钟内可以完成蛋白质定量过程;
3．有酶标板法和分光光度法两种定量程序;
4．定量范围为5-100μg/ml蛋白质。
编号& & & & 包装& & & & 价格& & & & 产地
SK5031& & & & 1000 Assays& & & & 160& & & & 生工
非干扰型蛋白浓度测定试剂盒& &
Non-Interference Protein Assay Kit& & & &
产品说明: 非干扰型蛋白质定量试剂盒是排除决大多数实验室常规试剂的干扰的光学定量方法，它可以去除离子，非离子，两性去污试剂，还原试剂，螯合试剂，载体两性电解质，Tris ，糖，尿素，硫尿，盐酸胍等变性试剂，对于在Laemmeli buffer等蛋白质上样缓冲液，2D sample extraction buffer,高浓度的β-mercaptoethanol (&15%) ,脂质体中的蛋白质也可以定量,蛋白质量在0.5-50&g 之间有良好的线性关系,需要的样品体积在1-50&l ,特殊的沉淀试剂可以去除掉绝大多数干扰物质,被沉淀的蛋白质与含有铜的碱性物质相混合,未与蛋白质相结合铜在被还原为一价后与特定的生色试剂反应,产生特定的480nm吸收波长,所以随着蛋白质的浓度增加,,未与蛋白质结合铜相应减少,这样特定的吸收波长的吸收值与溶液中的蛋白质浓度成反比,这种蛋白质定量方法不受氨基酸副链和蛋白质的种类的影响，本试剂盒可以做250次微量定量。
产品特点：
1．整个实验过程大约只需要40分钟左右;
2．定量过程不受到非蛋白的去污试剂，还原试剂，螯合试剂，Tris ，糖，尿素，硫尿等变性试剂，载体两性电解质，化学药品，抗生素等的影响;
3．定量范围在0.5-50&g，只需要1-50ul的样品;
4．比较适合于对2D电泳用的细胞或组织裂解液所提取的蛋白样品直接进行定量。
编号& & & & 包装& & & & 价格& & & & 产地
SK3071& & & & 250 Assays& & & & 500& & & & 生工
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生物秀探花
蛋白质自动分析仪。
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本帖最后由 lucly 于
20:22 编辑
BCA法, 常用的Kit . Bio-Rad or Pierce的Kit 比较稳定，而且可以用96-well microplate 测定～　
更新你的简历，加入生物秀人才库，高薪工作基因编辑峰会支持人类胚胎研究(胚胎、基因细胞治疗：生物医药产业下一个风口(细胞治生物秀论坛手机版全新改版,更快速度,更好体聚焦“基因剪刀”奠基人的科研历程
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murongxiaoxiao大叔级摄影爱好者，喜欢分享绝对零度积极有责任心，热心公益事业yiii红米达人，爱拍照的北京女孩蛋白浓度测定_百度文库
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共10个文档脊髓组织测定蛋白浓度短暂离心时上清很浑浊，请问是否有改进的方法 - 实验交流 - 生物秀
标题: 脊髓组织测定蛋白浓度短暂离心时上清很浑浊，请问是否有改进的方法
摘要: [脊髓组织测定蛋白浓度短暂离心时上清很浑浊，请问是否有改进的方法] 我的操作步骤如下：取脊髓组织于EP管中充分剪碎，后加入少量生理盐水超声裂解，然后3000转离心4min×3次，每次弃上清后用生理盐水冲洗沉淀，后按照2：200的比例加入裂解液，20000rpm离心30min后取上清测定蛋白浓度。在短暂离心3000rpm时上清很浑浊，感觉里面有蛋白，测出来的浓度很低，大约在0 5-1 5之间，特此请教上述提蛋白过程有没有更好的改进方法，谢谢各位大侠！ 关键词:[上清 生理盐水 裂解液 生理盐水冲洗]……
我的操作步骤如下：取脊髓组织于EP管中充分剪碎，后加入少量生理盐水超声裂解，然后3000转离心4min×3次，每次弃上清后用生理盐水冲洗沉淀，后按照2：200的比例加入裂解液，20000rpm离心30min后取上清测定蛋白浓度。在短暂离心3000rpm时上清很浑浊，感觉里面有蛋白，测出来的浓度很低，大约在0.5-1.5之间，特此请教上述提蛋白过程有没有更好的改进方法，谢谢各位大侠！
你短暂离心后不是要弃上清吗，沉淀裂解后获得蛋白样品吗？那为什么还要关注短暂离心后的上清是不是浑浊？从你的提取过程的描述来看，没任何必要关注短暂离心后的上清（反正是你要丢弃的），只要你获得的蛋白样品浓度还可以就好了。
少量生理盐水超声裂解，然后3000转离心4min×3次，每次弃上清后用生理盐水冲洗沉淀 ，后大部分可溶解性蛋白已经丢失
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即送15丁当
【求助】做ELISA时，为什么要测抗原的最佳包被浓度
页码直达：
这个帖子发布于7年零141天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
如上标题所述，为什么要先测定抗原的最佳包被浓度和二抗的最佳稀释倍数，这样做有什么好处？？请各位先知指教一下，多谢多谢
不知道邀请谁？试试他们
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由于第一抗体包板后加入含有靶抗原的样本与之结合，当第一抗体被抗原饱和后抗原浓度增加不会提高被捕获靶抗原的量，所以样本中靶抗原浓度在一定范围内是线性相关，曲线的高峰部位是抗原与抗体结合比例最合适。
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既然是最佳，就必然有一个判定最佳的标准。当你知道这个标准是什么时，也就知道有什么好处了。这个标准根据用途的不同而异。通常实验室做做不用很细致，标准也比较宽。但是如果做商品化的检测试剂盒，可就不是一件容易的事了。不仅要考虑灵敏度、特异性，还有大量标本的本底值等等多重因素。
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二楼的朋友做得是夹心ELISA吧，有没有用不同浓度的第一抗体包被板子？？？测定的数值是不是一样呢
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skykiller 既然是最佳，就必然有一个判定最佳的标准。当你知道这个标准是什么时，也就知道有什么好处了。这个标准根据用途的不同而异。通常实验室做做不用很细致，标准也比较宽。但是如果做商品化的检测试剂盒，可就不是一件容易的事了。不仅要考虑灵敏度、特异性，还有大量标本的本底值等等多重因素。可是最佳有时候仅仅是为了节约样品，而同处在同一线性范围内的两个不同浓度测出的数值是不一样的，你又如何选择？？有没有更有实质性标准来参考而不仅仅是为了节省样品，如果那样的话，最佳就可能是欠佳
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symbel 可是最佳有时候仅仅是为了节约样品，而同处在同一线性范围内的两个不同浓度测出的数值是不一样的，你又如何选择？？有没有更有实质性标准来参考而不仅仅是为了节省样品，如果那样的话，最佳就可能是欠佳我的经验，如果都是处在线性范围内，标准曲线都好，不同的包板浓度或不同的抗体酶浓度所测定的样品浓度值应该都很接近，属于正常的误差范围内。你所测定的数值不一样是指OD值不一样还是换算成浓度后不一样？OD值不一样是理所当然的，根据标准曲线换算成浓度后应该查不多。---------------------------skykiller申请蛋白质技术讨论版版主助理，请大家支持，谢谢。
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symbel 二楼的朋友做得是夹心ELISA吧，有没有用不同浓度的第一抗体包被板子？？？测定的数值是不是一样呢我做过的ELISA，一个是双抗体夹心法，另一种就是竞争法。没有用过 不同浓度的一抗包被板子的试剂盒。
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