相似度只差一个碱基，是不是酶切位点保护碱基得不到所P的目的基

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-05-14 12:52 标签： age1酶切位点保护碱基
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【Help】所p片段内含有与引物高度相似的片段该如何设计引物PCR我要P一个基因,Forward要带入一段酶切位点（XbaI）,但是基因的头二十多bp的碱基和序列内500多和800多的地方分别有两个高度相似的区域,这种PCR该如何做……急求,
玉雷佳觉26
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又不一定非要从那个基因的头开始P,只要把那个基因整个包含进去就行了,如果你非要刚好从头开始那就只能分段P然后再连啦,其实高度相似不是完全相同吧 还是可以的 毕竟大小差别貌似挺大的 跑胶还是可以分开的
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引物的设计可以有很多种选择，例如你要特异性高可以设计长一点，引物上每多一个碱基可以增加几倍的特异性（多少倍忘了，看书），不过也有可能导致引物分数过低。也可以设计低特异性的，差几百个bp胶上完全看得出来，一切就完事了。不过你带酶切位点，那下一步肯定是酶切克隆，那直接跑完切胶回收就完了~。。怎么设计不可以？...
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（16分）回答下列有关遗传信息传递与表达的问题。pIJ702是一种常用质粒，其中tsr为硫链丝菌素（一种抗生素）抗性基因，mel是黑色素合成基因，其表达能使白色的链霉菌菌落变成黑色菌落；而限制酶CLaⅠ、BglⅡ、PstⅠ、SacⅠ、SphⅠ在pIJ702上分别只有一处识别序列。（1）质粒DNA分子中的两条链靠&键维系成双链结构。（2）以SacⅠ和SphⅠ切取的目的基因置换pIJ702上0.4kb（1kb=1000对碱基）的SacⅠ/SphⅠ片段，构成重组质粒pZHZ8。上述两种质粒的限制酶酶切片段长度列在表4中。由此判断目的基因内部是否含有BglⅡ切割位点，并说明判断依据　&（3）已知pIJ702上含mel基因的ClaⅠ/PstⅠ区域长度为2.5kb，若用ClaⅠ和PstⅠ联合酶切pZHZ8，则参照表4数据可断定酶切产物中最小片段的长度为　&kb。（4）不含质粒的链霉菌在含硫链丝菌素固体培养基上的生长状况如表5所示。若要筛选接纳了pIJ702或pZHZ8的链霉菌细胞，所需的硫链丝菌素最小浓度应为　&μg／mL （填写表格中给定浓度）；含有重组质粒pZHZ8的菌落呈　&色。（5）上述目的基因来源于原核生物，其蛋白质编码序列（即编码从起始密码子到终止密码子之间的序列）经测定为1256对碱基，试判断对这段序列的测定是否存在错误：　&，并说明依据　&。&
本题难度：较难
题型：解答题&|&来源：2014-江西省九江外国语学校高三8月测试生物试卷
分析与解答
习题“（16分）回答下列有关遗传信息传递与表达的问题。pIJ702是一种常用质粒，其中tsr为硫链丝菌素（一种抗生素）抗性基因，mel是黑色素合成基因，其表达能使白色的链霉菌菌落变成黑色菌落；而限制酶CLaⅠ、Bgl...”的分析与解答如下所示：
（1）质粒是环状双链DNA分子，两条单链之间以氢键维系双链结构。（2）据题意，pIJ702上原有的BglⅡ位点位于SacⅠ/SphⅠ片段内，被目的基因置换后，表4中显示pZHZ8仍被BglⅡ切为线状，故目的基因中必然含有一个BglⅡ位点。（3）根据表中数据：重组质粒pZHZ8中含有两个ClaⅠ和PstⅠ的酶切位点，因pIJ702上含mel基因的ClaⅠ/PstⅠ区域长度为2.5kb，只用ClaⅠ切割得到的片段为2.2kb和4.5kb，只用PstⅠ切割得到的片段为1.6kb和5.1kb，故两者联合使用时，得到的最短片段为2.5－2.2=0.3（kb）（4）从表5数据可知，培养基中硫链丝菌素浓度低于5μg／mL时，链霉菌能够生长，故筛选目的菌种所需的硫链丝菌素最小浓度应为5μg／mL。据题意mel是黑色素合成基因，其表达能使白色的链霉菌菌落变成黑色菌落；mel基因被替换后，链霉菌落不能合成黑色素而呈白色。（5）原核生物基因的编码区是连续的，由于决定每个氨基酸的碱基序列为三个相连的碱基，故基因的编码碱基序列为3的整数倍，而加基因中1265个碱基对转录成的mRNA（包括起始密码和终止密码），共含有碱基1265个，不是3的整数倍，故测序是错误的。
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（16分）回答下列有关遗传信息传递与表达的问题。pIJ702是一种常用质粒，其中tsr为硫链丝菌素（一种抗生素）抗性基因，mel是黑色素合成基因，其表达能使白色的链霉菌菌落变成黑色菌落；而限制酶CLa...
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