你的首选资源互助社；成果糖，从反应柱的下端流出；2．固定化酶和固定化细胞是利用物理或化学方法将酶；3.固化技术的优点：固定化微生物细胞利用微生物来；将微生物细胞限制或定位于特定空间位置，即将微生物；(二)实验步骤1；称取lg干酵母，放入50mL的小烧杯中，加人蒸馏；【注】活化：让处于休眠状态的微生物重新恢复正常的；称取无水CaC
你的首选资源互助社区 成果糖，从反应柱的下端流出。反应柱能连续使用半年，大大降低了生产成本，提高了果糖的产量和质量。 2．固定化酶和固定化细胞是利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术，包括包埋法、化学结合法和物理吸附法。一般来说，酶更适合采用化学结合法和物理吸附法固定，而细胞多采用包埋法固定化。这是因为细胞个大，而酶分子很小；个大的难以被吸附或结合，而个小的酶容易从包埋材料中漏出。 3.固化技术的优点：固定化微生物细胞利用微生物来生产酶具有生产成本低、周期短、产量大等优点。微生物产生的酶，可以分为分泌在细胞外的胞外酶和包含在细胞内的胞内酶。利用胞内酶时，需要采用手段将细胞破碎后，将酶进行分离纯化，提取后酶的活性和稳定性往往都受到很大的影响。
将微生物细胞限制或定位于特定空间位置，即将微生物制成固定化细胞后，既能避免复杂的细胞破碎、酶的提取和纯化过程，又能使酶的活性和稳定性得到较大提高。固定后的微生物细胞可以作为固体催化剂在多步酶促反应中发挥连续催化作用，同时，催化反应结束后又能被回收和重复利用。例如，人们将含有青霉素酰化酶的大肠杆菌细胞进行固定化，用于大规模地生产青霉素母核（青霉素的主体化学结构部分，即6-氨基青霉烷酸），然后再对青霉素母核的侧链进行化学修饰，可以生产半合成青霉素，如氨苄青霉素。 (二)实验步骤 1。细胞的活化 称取lg干酵母，放入50 mL的小烧杯中，加人蒸馏水10 mL，用玻璃棒搅拌，使酵母细胞混合均匀，成糊状，放置1h左右，使其活化。
【注】活化：让处于休眠状态的微生物重新恢复正常的生活状态 2。配制物质的量浓度为0.05mo1/L的CaCl2溶液
称取无水CaCl2 0.83g。放人200mL的烧杯中，加入150mL的蒸馏水，使其充分溶解，待用。
3。配制海藻酸钠溶液
称取0.7g海藻酸钠，放入50mL小烧杯中。加人10mL水，用酒精灯加热，边加热边搅拌，将海藻酸钠调成糊状，直至完全溶化，用蒸馏水定容至10 mL。注意，加热时要用小火，或者间断加热，反复几次，直到海藻酸钠溶化为止。
4。海藻酸钠溶液与酵母细胞混合
将溶化好的海藻酸钠溶液冷却至室温，加人已活化的醉母细胞，进行充分搅拌，使其混合均匀，再转移至注射器中。
【注】冷却至室温的目的：防止杀死酵母菌 5。固定化酵母细胞 以恒定的速度缓慢地将注射器中的溶液滴加到配制好的CaCl2溶液中，观察液滴在CaCl2溶液中形成凝胶珠的情形。将这些凝胶珠在CaCl2溶液中浸泡30 min左右。
【注】CaCl2溶液的作用：使胶体聚沉
你的首选资源互助社区 6 使用固定化酵母细胞发酵
a）将固定好的酵母细胞(凝胶珠)用蒸馏水冲洗2-3次。
b) 将150mL质量分数为10%的葡萄糖溶液转移到200mL的锥形瓶中，再加入固定好的酵母细胞，置于25℃下发酵24h。
一、“探究不同种类的加酶洗衣粉洗涤的效果”注意事项 1．变量的分析和控制 影响加酶洗衣粉洗涤效果的因素有水温、水量、水质、洗衣粉的用量，衣物的质料、大小及浸泡时间和洗涤的时间等。在这些因素中，水温是我们要研究的对象，而其他因素应在实验中保持不变。选择什么样的水温进行实验需要实验者根据当地一年中的实际气温变化来确定水温，通常情况下，冬季、春季、秋季和夏季可分别选取5 ℃、15 ℃、25 ℃和35 ℃的水温，因为这4个水温是比较符合实际情况的，对现实也有指导意义。 2．洗涤方式和材料的选择。 在洗涤方式中有机洗和手洗两种方式，应考虑其中哪一种比较科学？哪一种更有利于控制变量？再有，洗衣机又可以分为半自动和全自动两种，相比之下，采用全自动洗衣机比较好，并且应该尽量使用同一型号小容量的洗衣机，其机械搅拌作用相同。关于洗涤材料的选择也有一些讲究。用衣物作实验材料并不理想，这是因为作为实验材料的衣物，其大小、颜色、洁净程度等应该完全一致，而这并不容易做到；此外，人为地在衣物上增加污物，如血渍、油渍等，也令人难以接受。因此，选用布料作为实验材料比较可行。在作对照实验时，可以控制布料的大小、颜色以及污物的量，使其相同；同时，也便于洗涤效果的比较。 3．水量、水质和洗衣粉用量的问题。 水的用量和布料的大小是成正比的。做实验用的布料不易过大，水量不易过多，但应该让布料充分浸泡在水中。水量和洗衣粉的用量可以参考下表。实验时可根据表中的数据换算出实际用量。如果在实验中使用手洗的方法，如课本中图4-4所示，使用1 000 mL的烧杯作为容器，可以用500 mL的水，洗衣粉的用量可以用1 g或1.5 g。 洗涤方式 水量 机洗 0.5 L 手洗 0.5 L 0.5 g 洗衣粉量 1 g或1.5 g 其他相关问题简述如下。实验中可以用滴管控制污物的量，待污物干燥后再进行实验；布料应放在洗衣粉溶液中浸泡相同的时间；采用玻璃棒或筷子搅拌的方式模拟洗衣过程；模拟搅 二、酵母细胞固化的注意事项 1.配制海藻酸钠溶液：小火、间断加热、定容，如果加热太快，海藻酸钠会发生焦糊。 2.海藻酸钠溶液与酶母细胞混合：冷却后再混合，注意混合均匀，不要进入气泡
你的首选资源互助社区 3.制备固定化酵母细胞：高度适宜，并匀速滴入 4．刚形成的凝胶珠应在CaCL2溶液中浸泡一段时间，以便Ca2+与Na+充分交换，形成的凝胶珠稳定。检验凝胶珠是否形成，可用下列方法：用镊子夹起一个凝胶珠放在实验桌上用手挤压，如果不容易破裂，没有液体流出就表明成功地制成了凝胶珠，还可以用手将凝胶珠在实验桌上用力摔打，如果凝胶珠很容易弹起，也表明制备的凝胶珠是成功的。 5．凝胶珠的颜色和形状 如果制作的凝胶珠颜色过浅、呈白色，说明海藻酸钠的浓度偏低，固定的酵母细胞数目较少；如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形，则说明海藻酸钠的浓度偏高，制作失败，需要再作尝试。 拌的时间、次数和力量应基本相同。 条件不变。只有这样才能保证只有温度一个变量对果胶酶的活性产生影响。
1．普通洗衣粉中包含哪些化学成分？ 提示：普通洗衣粉中通常包含有：表面活性剂、水软化剂、碱剂、漂白剂等成分，有的洗衣粉中还含有增白剂、香精和色素，以及填充剂等。 2．在本课题中你打算使用什么方法和标准判断洗涤效果？ 提示：可在洗涤后比较污物的残留状况，如：已消失、颜色变浅、面积缩小等， 3．细胞的活化。 提示：在缺水的状态下，微生物会处于休眠状态。活化就是让处于休眠状态的微生物重新恢复正常的生活状态。酵母细胞所需要的活化时间较短，一般需要0.5～1小时。 4．如何检验凝胶珠的质量是否合格。 提示：检验凝胶珠的质量是否合格，可以采用以下方法。一是用镊子夹起一个凝胶珠放在实验桌上用手挤压，如果凝胶珠不破裂，没有液体流出，就表明凝胶珠的制作成功。二是在实验桌上用力摔打凝胶珠，如果凝胶珠很容易弹起，也表明制备的凝胶珠是成功的。
疑点点拨 名师点睛
1．下列不属于酶制剂的是 A．蛋白酶
D．麦芽糖酶 答案：D 解析：目前常用的酶制剂有四大类：蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶。其中，应用最广泛、效果最明显的是碱性蛋白酶和碱性脂肪酶。碱性蛋白酶能将血渍、奶渍等含有的大分子蛋白质水解成可溶性的氨基酸或小分子的肽，使污迹从衣物上脱落。脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶也能分别将大分子的脂肪、淀粉
你的首选资源互助社区 和纤维素水解为小分子物质，使洗衣粉具有更强的去污能力。 2．水果罐头盖上印有“如发现盖子鼓起，请勿选购”的字样，引起盖子鼓起的最可能原因是 A、好氧型细菌呼吸，产生CO2和H2O
B、酵母菌呼吸，产生CO2和C2H5OH C、乳酸菌呼吸，产生 CO2和 C3H6O3
D、酵母菌呼吸，产生CO2和 H2O 答案：B 解析： 罐头是密封、杀菌的，但不排除有微生物的孢子等存活下来，只有进行无氧呼吸的微生物可以生存；罐头鼓胀是过期后微生物生活产气的结果，乳酸菌无氧呼吸产生乳酸，无气体产生；酵母菌既可以在有氧条件下生活，也可以在无氧条件下发酵产生酒精和二氧化碳。 3．有人测定了A、B、C、D四种植物体内多种酶的活性与温度的关系，结果如下图所示。根据图中的信息，你认为在25摄氏度条件下，竞争能力最强的生物和对温度适应范围最广的生物分别是 A
40 答案：A 解析：酶活性具有一定的温度范围和适宜温度，温度过高酶会失活，低温对酶活性抑制；在一定温度下，最适宜该温度的酶活性最强，该生物生活的也最好，竞争力就强；酶有活性的范围最大，生物的生存温度范围就越广。 4．下图是人体内某个化学反应的示意图，图中代表酶的英文字母是
解析：酶是起催化作用的，它在反应前后的性质保持不变，据图可以解释A 所代表的物质是酶。所以在特定条件和一定的时间内，酶的催化作用可以一直保持。 5.下图横坐标均表示酶的反应条件，纵坐标为酶的反应速度，能正确反映温度和PH与酶反应速度关系的是
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D.丙和丙 答案 ：D 解析:酶活性受温度和PH影响,在一定温度或PH内,随温度或PH的升高而升高:当超过某一温度或PH后,随温度或PH升高而下降,即呈倒钟型 6．实验研究pH对酶活性的影响，准备5支含有等量胃蛋白酶溶液但pH各不相同的试管，每支试管加1块1 cm3的正方体凝固蛋白块，试管均置于25 ℃室温条件下，将各试管蛋白块消失的时间记录于下表： 酶溶液的pH 1 2 3 4 5 （1）酶活性最强时的pH是_________。 （2）蛋白块消失的时间与酶活性强弱的关系是_________。 （3）请以2种方法改进实验，使实验在更短的时间内完成。 （4）在人体消化道中，能分泌本实验中酶的部位是_________。 （5）为确认蛋白块的消失是由于酶的作用，还应对实验进行什么设计 答案：（1）2 （2）酶活性越大，蛋白质分解越快，蛋白块消失的时间越短 （3）方法Ⅰ：将题给温度由25℃提高至大约37℃。方法Ⅱ：将原题中正方体蛋白块处理得更小（如切成0.5×0.5×0.5=0.125 cm3)，这相当于消化道内进行的物理性消化 （4）胃（答小肠不给分，因pH与题意不符） （5）另增加一个试管，放入等量的蛋白块并将pH调得适当，但不加酶溶液 解析： 在其他条件相同情况下，利用酶的特性知识和有关生物学知识，设计一定的浓度梯度进行对照，观察酶分解蛋白块的时间，判断蛋白酶的适宜pH值。既考查了基本知识，又能提高实验探究的能力 蛋白块消失的时间（min） 13 9 11 45 >60
4、单元测试题目 一．选择题 三亿文库包含各类专业文献、各类资格考试、中学教育、幼儿教育、小学教育、生活休闲娱乐、高等教育、专业论文、专题二十
酶的研究与应用25等内容。　
　专题4 酶的研究与应用知识点课题 1 果胶酶在果汁生产中的作用由水果制作果汁要解决两个主要问题:一是果肉的出汁率低,耗时长;二是榨取的果汁浑浊、 由水果制作... 　专题4 酶的研究与应用一、选择题 1.活细胞内合成酶的原料是( ) A.脂肪酸 B.氨基酸 C.核苷酸 D.氨基酸和核苷酸 2. 有人测定了 A、B、C、D 四种植物体... 　昆明市实验中学高二生物知识点检测 选修 1 专题四 酶的研究与应用班级 1、 ...15、在酵母细胞固定化时:CaCl2 溶液所起的作用是: 影响整个实验成败的关键步骤... 　专题四 酶的研究与应用_理化生_高中教育_教育专区。第一课件网 www.1kejian....课题难点:果胶酶的最适用量。 【知识要点】1.果胶酶的作用;2.酶的活性的定义... 　导学案专题四 酶的研究与应用_高三理化生_理化生_高中教育_教育专区。导学案专题四 酶的研究与应用 专题四考纲要求 酶的研究与应用 1.酶在洗涤等方面的应用。2... 　专题四酶的研究与应用 【学习导航】 酶是生物催化剂, 具有高效、 专一和所需...10。 方法二:将试管中的果胶酶溶液和烧杯中的苹果泥的 pH 分别调至 4、5、... 　(人教版)选修1专题4《酶的研究与应用》_高三理化生_理化生_高中教育_教育专区...在二苯胺试剂中沸水浴加热过程中变蓝,不需要冷却,B 错;匀 浆中含有多种酶,... 　高三生物复习,专题复习,单元测试,好东东!隐藏&& 单元测试二十三 酶的研究与应用 (满分:100 分 时间:90 分钟) 一、选择题(每小题 2 分,共 50 分) 1. ...5.4mL．（2）下面是某学生的操作过程：a．检查容量瓶是否漏水；b．用100mL的量筒量取浓硫酸；c．将浓硫酸倒入另一个盛有适量蒸馏水的量筒中稀释，并冷却到室温；d．用玻璃棒引流，将稀释后的硫酸倒入500mL的容量瓶；e．轻轻摇动容量瓶，使瓶内液体混合均匀，再向容量瓶中加水至离刻度线1cm～2cm；f．用胶头滴管加水至凹液面底部与刻度线相切，摇匀；g．在容量瓶上贴上标签待用．按照通常的配制要求，指出其中缺少或操作的错误，并补充或改正（有几项填几项，若空格不够可以补加）．①缺少洗涤烧杯和玻璃棒的操作；②量筒的规格错，应该用10mL的量筒量取浓H2SO4；③不应该在量筒中稀释浓H2SO4，应用烧杯；④不应该用容量瓶保存溶液，应用细口瓶；⑤无．（3）任何实验都有误差，在你改正后的操作中，产生误差的原因还有量筒的精确度不够高、读数误差、溶质仍有少量残留在烧杯内、室温未必是20℃等．（4）本实验最浪费时间的步骤是将稀释后的硫酸冷却到室温，为了节约时间，简便易行的加快稀硫酸冷却的方法是充分搅拌或给盛有稀H2SO4的烧杯敷冰块．
科目：高中化学
某学生的实验报告中有下列数据：①用托盘天平称取11.7g氯化钠；②用100mL的量筒量取21.48mL盐酸；③用容量瓶配制216mL、1mol/L的氯化钠溶液；④用酸式滴定管量取25.00mL硫酸溶液；⑤用广泛pH试纸测定H2SO4溶液的pH为3.2．其中合理的是（　　）A．只有①④B．只有②④C．只有①③D．只有②⑤
科目：高中化学
下列实验操作中，所用仪器合理的是（　　）A．在蒸发皿中放入NaCl溶液，加热蒸干制取NaCl晶体B．用100mL的量筒量取5.2mL的盐酸C．用托盘天平称取25.2gNaClD．用100mL容量瓶配制50mL0.1mol/L的盐酸
科目：高中化学
下列有关操作或判断正确的是（　　）
A、配制一定物质的量浓度的溶液时，定容时仰视刻度线会导致所配溶液浓度偏高B、用托盘天平称取25.20gNaClC、用100mL的量筒量取5.2mL的盐酸D、用浓盐酸配制一定物质的量浓度的稀盐酸，量取浓盐酸时仰视量筒的刻度线会导致所配溶液浓度偏高
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解:,该装置的保温效果并不如量热计那样好,肯定存在热量的散失,故错误;,根据量热计的结构可知实验装置缺少环形玻璃搅拌棒,故正确;,烧杯间填满碎纸条的作用是保温,减少热量的散失,故错误;,的盐酸的溶液反应会生成的水,改用盐酸跟的溶液进行反应还是只会生成的水,从理论上说所求中和热相等,故错误.故选.
本题考查学生有关中和热的测定知识,可以根据所学知识进行回答,难度不大.
1687@@3@@@@中和热的测定@@@@@@141@@Chemistry@@Senior@@$141@@2@@@@定量实验与探究实验@@@@@@25@@Chemistry@@Senior@@$25@@1@@@@化学实验@@@@@@3@@Chemistry@@Senior@@$3@@0@@@@高中化学@@@@@@-1@@Chemistry@@Senior@@
第一大题，第13小题
第一大题，第4小题
第一大题，第20小题
第一大题，第7小题
第一大题，第15小题
第一大题，第2小题
求解答 学习搜索引擎 | 某实验小组学生按照课本实验要求,用50mL0.5mol/L的盐酸50mL0.5mol/L的NaOH溶液在如图所示的装置中进行中和反应,通过测定反应过程中所放出的热量计算中和热.下列说法正确是(
)A、实验过程中没有热量损失B、图中实验装置缺少环形玻璃搅拌棒C、烧杯间填满碎纸条的作用是固定小烧杯D、若改用60mL0.50mol/L盐酸跟50mL0.5mol/L的NaOH溶液进行反应,从理论上说所求中和热不相等导读：【注】活化：让处于休眠状态的微生物重新恢复正常的生活状态2，提取生物大分子的基本思路是选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生，凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但是使用DNA含量相对较高的生物组织，测定生物大分子分子量，用玻璃棒搅拌。③将3个烧杯分别放入50摄氏度的热水、沸水和冰块中，保温5分钟。④称取5克加酶洗衣粉3份，分别放入3个烧杯中，用玻璃棒均匀搅拌。保温10分钟。⑤用玻璃棒搅拌。
③将3个烧杯分别放入50摄氏度的热水、沸水和冰块中，保温5分钟。
④称取5克加酶洗衣粉3份，分别放入3个烧杯中，用玻璃棒均匀搅拌。保温10分钟。
⑤观察并记录3个烧杯中的洗涤效果。
3探究不同种类的加酶洗衣粉洗涤的效果 污染物 油渍 汗渍 血渍 蛋白酶洗衣粉
脂肪酶洗衣粉
复合酶洗衣粉
普通洗衣粉
观察并记录四种洗衣粉分别洗涤三种污染的洗涤效果。
三、注意事项 1．变量的分析和控制 影响加酶洗衣粉洗涤效果的因素有水温、水量、水质、洗衣粉的用量，衣物的质料、大小及浸泡时间和洗涤的时间等。在这些因素中，水温是我们要研究的对象，而其他因素应在实验中保持不变。选择什么样的水温进行实验需要实验者根据当地一年中的实际气温变化来确定水温，通常情况下，冬季、春季、秋季和夏季可分别选取5 ℃、15 ℃、25 ℃和35 ℃的水温，因为这4个水温是比较符合实际情况的，对现实也有指导意义。 2．洗涤方式和材料的选择。 在洗涤方式中有机洗和手洗两种方式，应考虑其中哪一种比较科学？哪一种更有利于控制变量？再有，洗衣机又可以分为半自动和全自动两种，相比之下，采用全自动洗衣机比较好，并且应该尽量使用同一型号小容量的洗衣机，其机械搅拌作用相同。关于洗涤材料的选择也有一些讲究。用衣物作实验材料并不理想，这是因为作为实验材料的衣物，其大小、颜色、洁净程度等应该完全一致，而这并不容易做到；此外，人为地在衣物上增加污物，如血渍、油渍等，也令人难以接受。因此，选用布料作为实验材料比较可行。在作对照实验时，可以控制布料的大小、颜色以及污物的量，使其相同；同时，也便于洗涤效果的比较。 3．水量、水质和洗衣粉用量的问题。 水的用量和布料的大小是成正比的。做实验用的布料不易过大，水量不易过多，但应该让布料充分浸泡在水中。水量和洗衣粉的用量可以参考下表。实验时可根据表中的数据换算出实际用量。如果在实验中使用手洗的方法，如课本中图4-4所示，使用1 000 mL的烧杯作为容器，可以用500 mL的水，洗衣粉的用量可以用1 g或1.5 g。 洗涤方式 机洗 手洗 水量 0.5 L 0.5 L 洗衣粉量 0.5 g 1 g或1.5 g 其他相关问题简述如下。实验中可以用滴管控制污物的量，待污物干燥后再进行实验；布料应放在洗衣粉溶液中浸泡相同的时间；采用玻璃棒或筷子搅拌的方式模拟洗衣过程；模拟搅拌的时间、次数和力量应基本相同。 课题4 酵母细胞的固定化 一、实验原理 1．使用固定化酶技术，将这种酶固定在一种颗粒状的载体上，再将这些酶颗粒装到一个反应柱内，柱子底端装上分布着许多小孔的筛板。酶颗粒无法通过筛板的小孔，而反应溶液却可以自由出入。生产过程中，将葡萄糖溶液从反应柱的上端注入，使葡萄糖溶液流过反应柱，与固定化葡萄糖异构酶接触，转化成果糖，从反应柱的下端流出。反应柱能连续使用半年，大大降低了生产成本，提高了果糖的产量和质量。 2．固定化酶和固定化细胞是利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术，包括包埋法、化学结合法和物理吸附法。一般来说，酶更适合采用化学结合法和物理吸附法固定，而细胞多采用包埋法固定化。这是因为细胞个大，而酶分子很小；个大的难以被吸附或结合，而个小的酶容易从包埋材料中漏出。
25 固定化酶优点：使酶既能与反应物接触，又能与产物分离，还可以被反复利用。 固定化细胞优点：成本更低，操作更容易，可以催化一系列的化学反应。 二、实验步骤 1。细胞的活化 称取lg干酵母，放入50 mL的小烧杯中，加人蒸馏水10 mL，用玻璃棒搅拌，使酵母细胞混合均匀，成糊状，放置1h左右，使其活化。
【注】活化：让处于休眠状态的微生物重新恢复正常的生活状态 2。配制物质的量浓度为0.05mo1/L的CaCl2溶液
称取无水CaCl2 0.83g。放人200mL的烧杯中，加入150mL的蒸馏水，使其充分溶解，待用。
3。配制海藻酸钠溶液
称取0.7g海藻酸钠，放入50mL小烧杯中。加人10mL水，用酒精灯加热，边加热边搅拌，将海藻酸钠调成糊状，直至完全溶化，用蒸馏水定容至10 mL。注意，加热时要用小火，或者间断加热，反复几次，直到海藻酸钠溶化为止。
4。海藻酸钠溶液与酵母细胞混合
将溶化好的海藻酸钠溶液冷却至室温，加人已活化的醉母细胞，进行充分搅拌，使其混合均匀，再转移至注射器中。
【注】冷却至室温的目的：防止杀死酵母菌 5。固定化酵母细胞 以恒定的速度缓慢地将注射器中的溶液滴加到配制好的CaCl2溶液中，观察液滴在CaCl2溶液中形成凝胶珠的情形。将这些凝胶珠在CaCl2溶液中浸泡30 min左右。
【注】CaCl2溶液的作用：使胶体聚沉 6 使用固定化酵母细胞发酵
a) 将固定好的酵母细胞(凝胶珠)用蒸馏水冲洗2-3次。
b) 将150mL质量分数为10%的葡萄糖溶液转移到200mL的锥形瓶中，再加入固定好的 酵母细胞，置于25℃下发酵24h。 三、注意事项 1.配制海藻酸钠溶液：小火、间断加热、定容，如果加热太快，海藻酸钠会发生焦糊。 2.海藻酸钠溶液与酶母细胞混合：冷却后再混合，注意混合均匀，不要进入气泡 3.制备固定化酵母细胞：高度适宜，并匀速滴入 4．刚形成的凝胶珠应在CaCL2溶液中浸泡一段时间，以便Ca2+与Na+充分交换，形成的凝胶珠稳定。检验凝胶珠是否形成，可用下列方法：用镊子夹起一个凝胶珠放在实验桌上用手挤压，如果不容易破裂，没有液体流出就表明成功地制成了凝胶珠，还可以用手将凝胶珠在实验桌上用力摔打，如果凝胶珠很容易弹起，也表明制备的凝胶珠是成功的。 5．凝胶珠的颜色和形状 如果制作的凝胶珠颜色过浅、呈白色，说明海藻酸钠的浓度偏低，固定的酵母细胞数目较少；如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形，则说明海藻酸钠的浓度偏高，制作失败，需要再作尝试。 课题5
DNA的粗提取与鉴定 一、实验原理 提取生物大分子的基本思路是选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。对于DNA的粗提取而言，就是要利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。 1．DNA的溶解性
DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。 此外，DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步的分离。 2．DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性
蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响。大多数蛋白质不能忍受60―80oC的高温，而DNA在80oC以上才会变性。洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。
26 3．DNA的鉴定
在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色，因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 二、实验设计 1． 实验材料的选取
凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但是使用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大。 2． 破碎细胞，获取含DNA的滤液
动物细胞的破碎比较容易，以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。如果实验材料是植物细胞，需要先用洗涤剂溶解细胞膜。例如，提取洋葱的DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。 注意： ①为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ 蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA。 ②加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ 洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。 ③如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响? 研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。 ④此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？ 可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质。 3． 去除滤液中的杂质
方案一的原理是DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；方案二的原理是蛋白酶分解蛋白质，不分解DNA；方案三的原理是蛋白质和DNA的变性温度不同。 注意： ①为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？ 用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。 ②方案二与方案三的原理有什么不同？ 方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开；方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离。 4． DNA的析出与鉴定
将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等、冷却的酒精溶液，静置2～3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分。 取两支20ml的试管，各加入物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液5ml，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4ml的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变蓝。 三、实验步骤―以洋葱为实验材料 1．称取30克已切碎的洋葱，放入研钵中，加入少量石英砂助研，倒入10mL 2mol/L的氯化钠溶液，充分研磨。 洋葱含有挥发性刺激物，有效减少刺激，才能使实验顺利进行。上课前，教师可先将洋葱放入冰箱冷冻一会儿，使其凉透但又不能结冰；或将洋葱切成几大块，放入清水泡一会儿，让其挥发性刺激物溶于水，可以减轻刺激。然后将洋葱切碎备用。研磨的目的主要是使洋葱细胞破裂，使DNA溶于2mol/L的氯化钠溶液，没必要将洋葱研成粥糊状，后者既浪费时间又影响实验效果。研磨时，切忌使用搅拌器（榨汁机）。使用搅拌器虽可以提高研磨效率，但搅拌器将洋葱切成极细小的颗粒，无法通过过滤将洋葱颗粒剔除。只能将酒精直接倒入滤液中，许多洋葱小颗粒因为轻会漂浮起来，DNA藏在其中，无法分辨。学生看不到白色纤维状粘稠物的DNA。 2．研磨后，用漏斗和纱布将汁液过滤到小烧杯中，得到滤液。 3．向滤液中加入95%的酒精溶液20mL，沿烧杯壁缓缓倒入，不要震动或搅拌。 此时，烧杯中的液体分为上、下两层，下层较浑浊，上层澄清，很快上层溶液中就会有白色纤维状粘 27 稠物析出，用玻璃棒可将其轻轻卷起。这就是记录生命遗传信息的重要物质――DNA。DNA析出的过程中，切忌震动和搅拌（不震动易于分层，我们就能很容易观察到上清液中的丝状物；搅拌会使非常柔软的DNA断裂成小段，不易取出）。如果用玻璃棒DNA不易卷起，可改用表面打毛的牙签，DNA提取物就缠绕在牙签上了。 4．鉴定：取两支试管，编为1、2号，各加入2mol/L的氯化钠溶液2mL，向1号试管中加入一些白色纤维状物，振荡使其溶解，然后向两支试管中各加入2mL二苯胺试剂，沸水浴加热5分钟。 四、注意事项 1．以血液为实验材料时，每100ml血液中需要加入3g柠檬酸钠防止血液凝固。 2．加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔和，否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤地操作。加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。 3．二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果。 4．DNA的溶解度与NaCl溶液浓度的关系： 当NaCl溶液浓度低于0.14mol/L时，随浓度的升高，DNA的溶解度降低；当NaCl溶液浓度高于0.14mol/L时，随浓度升高，DNA的溶解度升高。 5．盛放鸡血细胞液的容器，最好是塑料容器。 鸡血细胞破碎以后释放出的DNA，容易被玻璃容器吸附，由于细胞内DNA的含量本来就比较少，再被玻璃容器吸附去一部分，提取到的DNA就会更少。因此，实验过程中最好使用塑料的烧杯和试管，这样可以减少提取过程的DNA的损失。 课题6
血红蛋白的提取和分离 一、实验原理 蛋白质的物化理性质：形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别，由此提取和分离各种蛋白质。 1．凝胶色谱法（分配色谱法）： （1）原理：分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。 （2）凝胶材料：多孔性，多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。
（3）分离过程：
混合物上柱→洗脱→大分子流动快、小分子流动慢→收集大分子→收集小分子 ＊ 洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。 （4）作用： 分离蛋白质，测定生物大分子分子量，蛋白质的脱盐等。 2．缓冲溶液 （1）原理：由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成（如H2CO3－NaHCO3， NaH2PO4/Na2HPO4等），调节酸和盐的用量，可配制不同pH的缓冲液。 （2）缓冲液作用：抵制外界酸、碱对溶液pH的干扰而保持pH稳定。 3．凝胶电泳法： （1）原理：不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。 （2）分离方法：琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。
28 （3）分离过程：在一定pH下，使蛋白质基团带上正电或负电；加入带负电荷多的SDS，形成“蛋白质－SDS复合物”，使蛋白质迁移速率仅取决于分子大小。 二、实验步骤 1．样品处理 ① 红细胞的洗涤 洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白，采集的血样要及时采用低速短时间离心分离红细胞，然后用胶头吸管吸出上层透明的黄色血浆，将下层暗红色的红细胞液体倒入烧杯，再加入五倍体积的生理盐水，缓慢搅拌10min，低速短时间离心，如此重复洗涤三次，直至上清液中没有黄色，表明红细胞已洗涤干净。 ②血红蛋白的释放
在蒸馏水和甲苯作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白。 注：加入蒸馏水后红细胞液体积与原血液体积要相同。加入甲苯的目的是溶解细胞膜，有利于血红蛋白的释放和分离。 2．粗分离 ①分离血红蛋白溶液
将搅拌好的混合溶液离心后，试管中的溶液分为4层。第一层为无色透明的甲苯层，第2层为白色薄层固体，是脂溶性物质的沉淀层，第3层是红色透明液体，这是血红蛋白的水溶液，第4层是其他杂质的暗红色沉淀物。将试管中的液体用滤纸过滤，除去之溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。 ②透析
取1mL的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有300mL的物质的量的浓度为20mmol/L的磷酸缓冲液中，透析12h。透析可以去除样品中分子量较小的杂质，或用于更换样品的缓冲液。 3．纯化 调节缓冲液面：打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到与凝 ↓
胶面平齐，关闭出口。 加入蛋白质样品：用吸管将透析后的样品沿管壁环绕移动加到色谱柱的顶端。加样后， O
打开下端出口，使样品渗入凝胶床内，等样品完全渗入凝胶层后， ↓
关闭出口。 调节缓冲液面：加入20mmol/L的磷酸缓冲液到适当高度 ↓ 洗脱：连接缓冲液洗脱瓶，打开下端出口，进行洗脱。 ↓ 收集分装蛋白质：待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集。 4.纯度鉴定------SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（选做） 三、注意事项 1. 电泳技术 电泳技术就是在电场的作用下，利用待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而达到对样品进行分离、鉴定或提纯的目的。 2.
红细胞的洗涤 如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。 3．如何检测凝胶色谱柱的装填是否成功 由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝胶是否装填得均匀。 此外，还可以加入大分子的有色物质，观察色带移动的情况。如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱的性能良好。如果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重新装柱。
29 包含总结汇报、IT计算机、人文社科、外语学习、行业论文、考试资料、文档下载以及高中生物知识点汇总(必修1、2、3选修1、3)等内容。本文共8页
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