细胞爬片中玻片的处理方法
　　细胞爬片是让玻片浸在细胞培养基内，细胞在玻片上生长，主要用于组织学，免疫组织化学，，细胞涂片，原位杂交等。
　　良好的细胞爬片是进行免疫组织细胞的基础，在实验过程中要首先要注意的是细胞爬片中玻片的处理。主要有以下几种爬片处理方法：
　　1、新玻片先用自来水冲洗，然后放到烤箱中烤干，再泡酸24小时，然后用自来水冲洗20遍，直到无酸残留为止，最后用双蒸水荡三遍，放在饭盒或者玻璃培养皿中烘干后高压消毒。高压消毒后取出放入烘箱中烘干，烘干后可放入超净台中备用。
　　2、先用无水乙醇脱脂，再用多聚赖氨酸处理，以使细胞与爬片结合更牢固。1mg/ml的多聚赖氨酸用0.22um的滤器过滤除菌后分装于经过无菌处理的1ml管内保存在4℃里，三个月内仍然可以使用。用时将高压灭菌过的爬片放到0.1mg/ml的多聚赖氨酸溶液内浸泡5min，无菌晾干即可（放入培养板孔内注意爬片的正反面）。或将爬片铺于培养皿中，将多聚赖氨酸溶液滴于爬片上，室温10分钟后，吸除玻片上的溶液，在超静台内晾干后使用。储存、稀释和吸取多聚赖氨酸要使用塑料制品。
　　3、简单的方法就是和一般玻璃器皿的洗涤一样，浸洗液，然后冲洗，蒸馏水冲洗后干燥，然后高压灭菌。
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扫一扫下载91360客户端细胞爬片怎么做啊?(细胞爬片) - 细胞实验 - 生物秀
标题: 细胞爬片怎么做啊?(细胞爬片)
摘要: [细胞爬片怎么做啊?(细胞爬片)] 各位大哥大姐,我是新手,我想问下细胞爬片怎么做啊?能告诉我具体的步骤吗?在你们看来这么简单的事情在我看来很复杂,真的希望有人能帮帮我 关键词:[细胞爬片]……
各位大哥大姐,我是新手,我想问下细胞爬片怎么做啊?能告诉我具体的步骤吗?在你们看来这么简单的事情在我看来很复杂,真的希望有人能帮帮我
回复1.爬片买来后，首先用重铬酸钾或浓硫酸浸泡24小时，去除表面杂质和氧化物；2.爬片取出，先用自来水洗，清洁后，以水清洗数次，晾干，保存于密封的95％乙醇中；3.使用时，用镊子将爬片取出，水洗净，一定要非常干净，否则拍照片时候影响效果。在玻璃培养皿里铺纱布，清洗后爬片排列于纱布上，并用纱布盖好，玻璃培养皿包裹好，高压消毒，备用；4.使用时，超净台内打开消毒后的玻璃培养皿，无菌镊子夹取爬片，至六孔板内，每孔一片，如果是对贴壁有特殊要求的，可用纤维连接蛋白或胶原铺垫（蛋白或胶原溶液浸润爬片，然后将六孔板至于四度冰箱过夜或37度培养箱1小时，洗干溶液，超净台内晾干爬片，备用）；5.细胞悬液均匀后，以吸取细胞悬液，小心滴加到爬片上，每个爬片约可容纳0.6ml液体，靠表面张力而不使之流失，每张爬片容纳1万个细胞比较合适，如果细胞生长过快，可减少接种数量，否则拍照效果不佳，细胞镜下都成团了。6.送培养箱，注意要平稳，过夜后，六孔板每个孔再缓缓加入2ml培养液，然后该培养或者诱导就随便你了，就等拍照或固定了，注意不要让细胞长得过密。回复谢谢这个帮助我的园友,谢谢,真的非常感谢,谢谢.祝你新年快乐
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【求助】请问各位前辈：细胞爬片的步骤是怎样的？
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这个帖子发布于12年零11天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
请问各位前辈：1。什么是细胞爬片？其用途是什么？2。细胞爬片的步骤是怎样的？3。细胞爬片需要哪些实验材料和仪器？谢谢各位前辈的殷切细致的回答！谢谢！
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我也补充一个小窍门吧!做细胞爬片时,比如在六孔板中放入盖玻片,但是六孔板的孔底面积往往会比玻片面积多出一部分,加细胞悬液时常常就是细胞铺满整个孔底,有时细胞生长边集现象,就是靠近壁边缘密度要高些,这样处于中央玻片上爬的细胞数量就可能相对较少比较好的做法是将玻片放入孔板的孔内后,加细胞悬液时只滴到玻片上,一直滴到液体布满整个玻片又不会溢出玻片边缘(因为液体表面张力作用可以很容易做到这一点!),放在培养箱里,等细胞贴壁后,取出,再滴加培养基布满整个孔底,继续培养,这样玻片上的细胞生长的密度就很集中合意了!个人的经验!效果不错!有兴趣的可以试试
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我的理解是细胞爬片就是让细胞（贴壁细胞）在片子（盖玻片）上生长。主要用来做免疫细胞化学啊，原位杂交等吧。在做这些实验时，制作标本有两种，一是离心做细胞涂片，二是细胞爬片。利用贴壁细胞在玻璃等物质上贴壁生长的特点，让它在盖玻片上生长，可以使制作的细胞片子更牢固，在后面的洗涤过程中，不易脱落。特别是在用粘附剂如多聚赖安酸处理过的片子上，细胞贴得更牢固。细胞爬片：将片子放在细胞培养板（均已经消毒）中，加入一定数量的细胞悬液，让它生长24小时。待它贴壁后，细胞爬片就制作好了。需要的器材：多聚赖安酸、合适大小的盖玻片（根据细胞培养板孔大小而定）、细胞培养板、培养基。
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我的经验是：1.将玻璃盖玻片用小砂轮划成均匀的小方块，然后泡酸至少24小时。2.将玻片从酸液中捞出，用小眼科镊夹持每一片玻片，在流动的清水下冲洗5min，再泡蒸馏水两次，取出，摊开，干燥。3.装入小饭盒或培养皿中，高温高压灭菌，再烘干。4.将玻片放入孔板的孔内后,加细胞悬液时只滴到玻片上,一直滴到液体布满整个玻片又不会溢出玻片边缘(因为液体表面张力作用可以很容易做到这一点!),放在培养箱里,等细胞贴壁后,取出,再滴加培养基布满整个孔底,继续培养,这样玻片上的细胞生长的密度就很集中合意了!鼓励原创，请勿随意copy其他战友回复:)
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xiaoba_008 编辑于
我的理解是细胞爬片就是让细胞（贴壁细胞）在片子（盖玻片）上生长。主要用来做免疫细胞化学啊，原位杂交等吧。在做这些实验时，制作标本有两种，一是离心做细胞涂片，二是细胞爬片。利用贴壁细胞在玻璃等物质上贴壁生长的特点，让它在盖玻片上生长，可以使制作的细胞片子更牢固，在后面的洗涤过程中，不易脱落。特别是在用粘附剂如多聚赖安酸处理过的片子上，细胞贴得更牢固。细胞爬片：将片子放在细胞培养板（均已经消毒）中，加入一定数量的细胞悬液，让它生长24小时。待它贴壁后，细胞爬片就制作好了。需要的器材：多聚赖安酸、合适大小的盖玻片（根据细胞培养板孔大小而定）、细胞培养板、培养基。
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我的理解是细胞爬片就是让细胞（贴壁细胞）在片子（盖玻片）上生长。主要用来做免疫细胞化学啊，原位杂交等吧。在做这些实验时，制作标本有两种，一是离心做细胞涂片，二是细胞爬片。利用贴壁细胞在玻璃等物质上贴壁生长的特点，让它在盖玻片上生长，可以使制作的细胞片子更牢固，在后面的洗涤过程中，不易脱落。特别是在用粘附剂如多聚赖安酸处理过的片子上，细胞贴得更牢固。细胞爬片：将片子放在细胞培养板（均已经消毒）中，加入一定数量的细胞悬液，让它生长24小时。待它贴壁后，细胞爬片就制作好了。需要的器材：多聚赖安酸、合适大小的盖玻片（根据细胞培养板孔大小而定）、细胞培养板、培养基。
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我也没看懂，也想问一下：A.有些实验室用的是塑料的一次性培养皿，有的实验室用的是玻璃培养皿，请问这两种材料都需要加多聚赖氨酸以使细胞贴壁生长吗？听说塑料的壁上已经在产品生产过程种涂了贴壁材料，请问就是多聚赖氨酸吗？B.细胞培养板就是指96孔板，24孔板这样的板子吗？若不是，能贴张图片看看吗？C.细胞涂片和细胞爬片有什么区别哟？看您的意思是细胞爬片：就是把盖玻片放在培养板中的细胞混悬液中培养一段时间，等细胞贴壁生长了，爬片就算制作完毕（制作完毕后要保存吗？怎样保存？还是只是照照片留下资料？）细胞涂片：离心完了以后怎么涂到片子上？步骤怎样，恕我愚笨，没看懂，还望各位高手详细解释一下！不胜感激！
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thanks for your answer and enthusiastic support!
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xjwyh wrote:我也没看懂，也想问一下：A.有些实验室用的是塑料的一次性培养皿，有的实验室用的是玻璃培养皿，请问这两种材料都需要加多聚赖氨酸以使细胞贴壁生长吗？听说塑料的壁上已经在产品生产过程种涂了贴壁材料，请问就是多聚赖氨酸吗？B.细胞培养板就是指96孔板，24孔板这样的板子吗？若不是，能贴张图片看看吗？C.细胞涂片和细胞爬片有什么区别哟？看您的意思是细胞爬片：就是把盖玻片放在培养板中的细胞混悬液中培养一段时间，等细胞贴壁生长了，爬片就算制作完毕（制作完毕后要保存吗？怎样保存？还是只是照照片留下资料？）细胞涂片：离心完了以后怎么涂到片子上？步骤怎样，恕我愚笨，没看懂，还望各位高手详细解释一下！不胜感激！让我也来为细胞版作贡献吧！A.多聚赖氨酸可以防止脱片，利于贴壁。B.用的就是细胞培养版，如6孔板、12孔板、24孔板。孔内需放置消毒好的盖玻片，使细胞在盖玻片上贴壁生长。C.爬片和涂片都是用于染色或行免疫组化等检查。对于贴壁细胞多用于爬片，对于悬浮细胞用于涂片。D.制作完毕后需固定后进行或保存。
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首先谢谢lixiangjin，但我还想问问您：A.您对于我说的塑料的壁上已经在产品生产过程种涂了贴壁材料，请问就是多聚赖氨酸吗？还是没有作答。我还是不懂。C.细胞爬片我算是大致明白意思了。那么悬浮细胞的离心完了以后怎么涂到片子上？步骤怎样问题还是没有搞明白。继续请教。
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xjwyh wrote:首先谢谢lixiangjin，但我还想问问您：A.您对于我说的还是没有作答。我还是不懂。C.细胞爬片我算是大致明白意思了。那么悬浮细胞的问题还是没有搞明白。继续请教。
塑料培养皿我没用过，具体材料我不清楚。
至于如何涂片？曾经问过别人，告诉我用针头涂。我觉得不妥。记得学微生物的时候，有一种涂片用具（材料为细铁丝，前头为圆形或椭圆形，直径约2mm，后头为杆部，长约10cm。），手持杆部，用圆头挑悬液，在圆头处成液膜，然后涂在载玻片上。虽然我没作过，但我认为可行。
希望对你有帮助！
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jessie2003 编辑于
我也补充一个小窍门吧!做细胞爬片时,比如在六孔板中放入盖玻片,但是六孔板的孔底面积往往会比玻片面积多出一部分,加细胞悬液时常常就是细胞铺满整个孔底,有时细胞生长边集现象,就是靠近壁边缘密度要高些,这样处于中央玻片上爬的细胞数量就可能相对较少比较好的做法是将玻片放入孔板的孔内后,加细胞悬液时只滴到玻片上,一直滴到液体布满整个玻片又不会溢出玻片边缘(因为液体表面张力作用可以很容易做到这一点!),放在培养箱里,等细胞贴壁后,取出,再滴加培养基布满整个孔底,继续培养,这样玻片上的细胞生长的密度就很集中合意了!个人的经验!效果不错!有兴趣的可以试试
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相信你的问题已经懂了。我就谈谈细胞涂片吧。对于悬浮细胞一般采用离心涂片的。过程：将合适细胞浓度的悬浮液取100ul－200ul左右，加入离心涂片机的加样孔中，离心转速为3000转左右。瞬间离心，则细胞悬浮液就会打在玻片上，而液体就会被紧贴在玻片上的滤纸所吸掉。这需要专用的细胞离心机，若你有，看看就明白了。
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楼上站友的建议很好 ,甩片效果是不错,但是好多单位可能设备不允许.涂片应该更实用一些.
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xiaoba_008 编辑于
细胞爬片就是让玻片浸在细胞培养基内，细胞在玻片上生长，主要用于组织学，免疫组织化学，冰冻切片，细胞涂片，原位杂交等.
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上海晶安生物一步法细胞爬片采用高端的玻片制作，厚度为0.17mm，有圆形和方形。已处理，已灭菌，拆开即用。
最先进的玻片表面处理技术（TC处理→超强吸附）可促进细胞在玻片上贴壁生长，细胞贴壁牢固。
即使在后期免疫组化、免疫荧光、原位杂交处理过程中也不易脱片，避免传统方法中从培养瓶转移到载玻片上的损伤。使用一步法细胞爬片不用预处理，避免在后期处理中细胞容易脱片等种种问题。
? 爬片常用的规格：圆形（φ24mm、φ20mm、φ14mm、φ8mm）方形（φ24*24mm、φ15*15mm、φ10*10mm）.
? 双面经过TC处理，双面均可使用，避免了实验误差。
? 爬片高强度耐酸碱，特殊实验浸泡一个星期均不会碎片。
? 一步法细胞爬片只需打开包装即可使用，节省成本，节省实验员的试验时间。
? 经过伽马射线灭菌，无DNA酶、无RNA酶、无热源。
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最后用显微镜检查的时候需要把爬片从六孔板里拿出来吗
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zyh7808我也补充一个小窍门吧!做细胞爬片时,比如在六孔板中放入盖玻片,但是六孔板的孔底面积往往会比玻片面积多出一部分,加细胞悬液时常常就是细胞铺满整个孔底,有时细胞生长边集现象,就是靠近壁边缘密度要高些,这样处于中央玻片上爬的细胞数量就可能相对较少 比较好的做法是将玻片放入孔板的孔内后,加细胞悬液时只滴到玻片上,一直滴到液体布满整个玻片又不会溢出玻片边缘(因为液体表面张力作用可以很容易做到这一点!),放在培养箱里,等细胞贴壁后,取出,再滴加培养基布满整个孔底,继续培养,这样玻片上的细胞生长的密度就很集中合意了!
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其实我们具体操作时，会根据情况选择爬片的操作方式，有时比较灵活。但如果做高密度分化实验就需要注意严格操作了
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请问这免疫荧光直接在6孔板中镜检不可以吗？一定要爬片让细胞长在盖玻片吗？
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lixiangjin xjwyh 首先谢谢lixiangjin，但我还想问问您：A.您对于我说的还是没有作答。我还是不懂。C.细胞爬片我算是大致明白意思了。那么悬浮细胞的问题还是没有搞明白。继续请教。
塑料培养皿我没用过，具体材料我不清楚。
至于如何涂片？曾经问过别人，告诉我用针头涂。我觉得不妥。记得学微生物的时候，有一种涂片用具（材料为细铁丝，前头为圆形或椭圆形，直径约2mm，后头为杆部，长约10cm。），手持杆部，用圆头挑悬液，在圆头处成液膜，然后涂在载玻片上。虽然我没作过，但我认为可行。
希望对你有帮助！那个是涂细菌的吧
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细胞爬片染色步骤
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&&[求助]细胞爬片盖玻片处理方法
[求助]细胞爬片盖玻片处理方法
想请教下各位虫友：
做细胞爬片的盖玻片提前应做哪些处理？
个人查了一下基本包括：自来水冲洗-泡酸过夜-纯水洗涤-酒精浸泡过夜-晾干
1.这个步骤是否可行呢
2.请问其中泡酸处理的酸是什么酸
3.有些资料又显示需加多聚赖氨酸增强粘附性，这是否有必要，如果有，添在哪一步比较适合
4.最后一步晾干大多采取烘干法，但是这样烘干的盖玻片不可避免会有水印，表面就模糊了，而晾干在类似搪瓷盘的容器上又会因粘壁而污染，请问哪位有更好的办法呢？
谢谢大家~~
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