07理学模拟试题题库
本试题来自：（2014年07理学模拟试题，）一、选择题在已知序列信息的情况下，获取目的基因的最方便方法是(
A．化学合成法
B．基因组文库法
C．cDNA文库法
D．聚合酶链反应
E．差异显示法正确答案：有， 或者
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07理学模拟试题热门试卷相关知识点：
在已知某小片段基因碱基序列的情况下，获得该基因的最佳方法是（ ）A.用mRNA为模板反转录合成DNA B.用4中脱氧核苷酸为原料人工合成C.用PCR技术制备D.有蛋白质的氨基酸序列推测mRNA [基因、人工合成、目的基因、脱氧核苷酸、反转录、氨基酸序列、模板、碱基序列]
在已知某小片段基因碱基序列的情况下，获得该基因的最佳方法是（ ） A.用mRNA为模板反转录合成DNA
B.用4中脱氧核苷酸为原料人工合成 C.用PCR技术制备 D.有蛋白质的序列推测mRNA
答案:B【解析】试题分析：基因工程中获取目的基因的方法有：从自然界已有的物种中分离，人工方法合成。对于基因比较小，序列又已知，可以通过合成仪用化学方法人工合成。B正确。考点：本题考查获取目的基因的方法的有关知识，意在考查考生理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。
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[在已知某小片段基因碱基序列的情况下，获得该基因的最佳方法是（ ）A.用mRNA为模板反转录合成DNA B.用4中脱氧核苷酸为原料人工合成C.用PCR技术制备D.有蛋白质的氨基酸序列推测mRNA [基因、人工合成、目的基因、脱氧核苷酸、反转录、氨基酸序列、模板、碱基序列]]相关内容：
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请问用Vector NTI如何实现在pET28a中加入目的基因片段的谱图绘制。
本人选用上游Nde I，下游Xho I酶切位点。
绘制谱图时发现pET28a的谱图中启动子和终止子的顺序刚好与实际的方向相反，请问这种情况下，如何把目的基因片段添加进去？
自己顶一下，沉下去就没戏了 如果按照vector软件操作说明上一步一步来，先将片段酶切，再将载体酶切，再连接，这样软件会识别酶切位点处的粘性末端，方向软件会自动识别。（当然这样画图谱我觉得挺麻烦的）
我一般直接将载体两酶切位点间其他酶切位点序列删掉，然后将目的片段当序列插入到载体两酶切位点中（估计你也想这么干），然后将插入的序列add feature。遇到你这种启动子和终止子方向相反的情况，我先将目的基因reverse一下，然后同上面操作。这时候add feature时，在complementary前面打上勾，这样基因就和启动子方向保持一致了。 : Originally posted by susizheng at
如果按照vector软件操作说明上一步一步来，先将片段酶切，再将载体酶切，再连接，这样软件会识别酶切位点处的粘性末端，方向软件会自动识别。（当然这样画图谱我觉得挺麻烦的）
我一般直接将载体两酶切位点间其 ... 谢谢你的回复，不过按照你的这个操作了之后，片段的顺序仍旧是反的 : Originally posted by njyang2006 at
谢谢你的回复，不过按照你的这个操作了之后，片段的顺序仍旧是反的 你确定下，到底是基因箭头反了，还是基因序列反了。 我一般用别的软件例如dnastar之类把插入序列先做成反向互补的，然后跟3楼说的一样，在vectornti中直接插入就行了 : Originally posted by susizheng at
你确定下，到底是基因箭头反了，还是基因序列反了。 是pET28a的载体序列方向与基因的序列方向相反 : Originally posted by njyang2006 at
是pET28a的载体序列方向与基因的序列方向相反 插入之前先将目的基因reverse一下，
怎么会还相反呢？请问你确定你的基因reverse过了？ 先将pET28a reverse,然后再插入基因序列:victory:
var cpro_id = 'u1216994';
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17:51:53&&&来源：&&&评论：&&
[如何获取已知基因序列的目的片段(基因序列,抗体,单链,融合蛋白)] 大家好！请教一个问题：我想要表达一种单链抗体的融合蛋白，可查到其基因序列（741bp），是抗体重链可变区与轻链可变区通过一连接肽连接而成。这种情况下可以通过什么方法得到该单链抗体的目的片段？如果用PCR方法的话，模板如何确定？ 关键词:[基因序列 抗体 单链 融合蛋白 模板 轻链可变区 重链可变区]…
大家好！请教一个问题：我想要表达一种单链抗体的融合蛋白，可查到其基因序列（741bp），是抗体重链可变区与轻链可变区通过一连接肽连接而成。这种情况下可以通过什么方法得到该单链抗体的目的片段？如果用PCR方法的话，模板如何确定？
回复你完全可以用全合成的方法获得。片段不是特别长，分段合成后用ＰＣＲ的方法拼接，效果很好。成本也不会很高，应该1Ｋ多就够了。现在一个碱基都1块多钱了。回复谢谢九条虫 的答复！请问是全合成得到完整目的基因吗？好像成本很高啊：8.5～14元/对碱基。请问哪里有价钱较便宜的？先谢谢大家了！回复不用这样啊,你可以设计成长为50-60的单链分子,就和设计引物一样,然后互为引物进行PCR,进一步拼接,这样就便宜很多了.合成双链分子当然很贵了,而且也没有必要.以比较小的片段为例大概过程如图:-----------
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===========＾＾＾＾================＾＾＾＾＾＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝===================================共合成六个片段,每相邻 两个反向互补,第一轮经过三个PCR,合成3段双链DNA分子，再把这三段混合作为引物模板进行第二轮ＰＣＲ，就得到了全长。（＾是为了让图显示正确，没有意义）我以前做过18个片段的，最后得到500多bp长的基因，用这样的方法花了1Ｋ多，现在估计再做还会便宜。需要有话pm我，我给你我当时的设计方案。回复基因序列在基因bank上查是什么物种的基因，提取该物种的DNA，设计引物PCR扩增即可得到该目的基因，化学合成太贵了，而且上面朋友的方法比较繁琐。回复不用这样啊,你可以设计成长为50-60的单链分子,就和设计引物一样,然后互为引物进行PCR,进一步拼接,这样就便宜很多了.合成双链分子当然很贵了,而且也没有必要.以比较小的片段为例大概过程如图:-----------
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===========＾＾＾＾================＾＾＾＾＾＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝===================================共合成六个片段,每相邻 两个反向互补,第一轮经过三个PCR,合成3段双链DNA分子，再把这三段混合作为引物模板进行第二轮ＰＣＲ，就得到了全长。（＾是为了让图显示正确，没有意义）我以前做过18个片段的，最后得到500多bp长的基因，用这样的方法花了1Ｋ多，现在估计再做还会便宜。需要有话pm我，我给你我当时的设计方案。九条虫：我已经pm您了。等待您的答复，谢谢！回复基因序列在基因bank上查是什么物种的基因，提取该物种的DNA，设计引物PCR扩增即可得到该目的基因，化学合成太贵了，而且上面朋友的方法比较繁琐。单链抗体是抗体重链可变区与轻链可变区通过一连接肽连接而成。这种情况下好像是不能以提取的该物种的DNA为模板的，所以以PCR扩增方法得到该目的基因不太可行。回复不用这样啊,你可以设计成长为50-60的单链分子,就和设计引物一样,然后互为引物进行PCR,进一步拼接,这样就便宜很多了.合成双链分子当然很贵了,而且也没有必要.以比较小的片段为例大概过程如图:-----------
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===========＾＾＾＾================＾＾＾＾＾＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝===================================共合成六个片段,每相邻 两个反向互补,第一轮经过三个PCR,合成3段双链DNA分子，再把这三段混合作为引物模板进行第二轮ＰＣＲ，就得到了全长。（＾是为了让图显示正确，没有意义）我以前做过18个片段的，最后得到500多bp长的基因，用这样的方法花了1Ｋ多，现在估计再做还会便宜。需要有话pm我，我给你我当时的设计方案。九条虫，您好！请教两个问题：1、第一次PCR的引物在反应体系中的终浓度是多少？反应的条件是如何？循环数是多少？2、第一轮PCR的产物用作为第二次PCR的引物模板，用前是否需要稀释，要稀释的话稀释的倍数是多少？3、您用的是那个公司的PCR盒？
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第六节__目的基因的分离
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