T4 DNA聚合酶 -
T4&DNA&Polymerase，即T4&DNA聚合酶，是一种模板依赖的，可以在结合有引物的单链DNA&模板上，从5'→3'方向催化DNA合成反应。T4&DNA&Polymerase具有3'→5'外切性，但不具有5'→3'外切酶活性。&&特点：T4&DNA&Polymerase由于同时具有5'→3'DNA聚合酶活性和3'→5'DNA外切酶活性，可以用于将5'端突出末端补平或3'端突出末端削平。T4&DNA&Polymerase的3'→5'DNA外切酶活性对于单链DNA要比双链DNA活性更高，即单链DNA要比双链DNA中的非配对链部分更容易被T4&DNA&Polymerase所消化。T4&DNA&Polymerase的3'→5'外切酶活性比Klenow&Fragment要高约200倍。&
用途：T4&DNA&Polymerase可用于催化以下反应：DNA&5'或3'突出末端的平滑化；通过置换反应进行标记DNA探针合成；定点突变过程中第二链的合成；不依赖于连接反应的PCR产物克隆。&来源：本T4&DNA&Ligase由大肠杆菌表达，表达基因的来源为。&&活性定义：37℃30分钟时间内，催化10nmol脱氧核糖核苷酸(dNTPs)摻入到中所需的酶量定义为1个活性单位。&&活性检测条件：67mM&Tris-HCl(pH8.8)，6.7mM&MgCl2，1mM&DTT，16.7mM(NH4)2SO4，0.2mg/ml&BSA，0.033mM&of&each&dNTP，0.4MBq/ml[3H]-，0.2mM&热变性且经DNA酶部分消化过的小牛胸腺DNA。&纯度：不含DNA内切酶，不含RNase。&酶储存溶液：20mM&potassium&phosphate(pH7.5)，200mM&KCl，2mM&DTT，and&50%&glycerol。 Reaction&Buffer(5X)：335mM&Tris-HCl(pH8.8&at&25℃)，33mM&MgCl2，5mM&DTT，84mM (NH4)2SO4。 缓冲液兼容性：在碧云天的内切酶反应缓冲液1X&O、1X&R、1X&Y、2X&Y中的活性为100%，在1X&B、1X&G中的活性为75-100%。 失活或抑制：70℃加热10分钟可使T4&DNA&Polymerase失活。金属离子螯合剂可以抑制T4&DNA&Polymerase的活性。
T4 DNA聚合酶 -
利用大肠杆菌Klenow大片段聚合酶5'→3'聚合酶活性和T4DNA聚合酶3'→5'外切酶特性构建植物pBLT35Svp4-ST.用pUC18-435S中的T35S启动子取代植物表达载体pBLG-VP4-ST中的双35S启动子,通过Klenow大片段的聚合酶活性对植物表达载体pBLG-VP4-ST中的HindⅢ3'凹端补平,再利用T4DNA聚合酶外切酶活性将质粒pUC18-435S的四倍35S启动子即T35S中的SacⅠ3'凸端削平.在T4DNA连接酶作用下将一端为平端,另一端为BamHⅠ的粘性末端的四倍35S启动子定向连接到植物表达载体PBLG-VP4-ST中取代原有的双35S启动子,转化并筛选阳性克隆.结果经PCR和酶切鉴定证实,四倍35S启动子成功连接到植物表达载体PBLG-VP4-ST中。
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保存二维码可印刷到宣传品关于T4RNA连接酶的用法(连接酶,引物,单链,末端) - PCR实验 - 生物秀
标题: 关于T4RNA连接酶的用法(连接酶,引物,单链,末端)
摘要: [关于T4RNA连接酶的用法(连接酶,引物,单链,末端)] 本人由于PCR需要，现在要用T4RNA连接酶把一个引物和一段单链DNA连接。问题是：引物和单链DNA的末端还需要进行修饰吗？还是直接用T4RNA连接酶就能将二者连接？希望那位高人指点一下。 关键词:[连接酶 引物 单链 末端]……
本人由于PCR需要，现在要用T4RNA连接酶把一个引物和一段单链DNA连接。问题是：引物和单链DNA的末端还需要进行修饰吗？还是直接用T4RNA连接酶就能将二者连接？希望那位高人指点一下。
回复PCR Primer是合成的寡核
苷酸，在合成
时其5‘端缺少一个磷酸基因此T4 连接时要使寡核苷酸磷酸化。使用
T4多核苷酸。(polynucleotide kinase) 属于DNA及RNA的修饰酶。是由T4噬菌体的pseT基因编码的一种蛋白质，最初也是从T4噬菌体感染的大
细胞中分离出来的。本酶具有以下活性：
5"-OH末端寡核苷酸的磷酸化：5"-OH +NTP→5"-P+NDP
，T4多核苷酸催化γ-
磷酸从ATP分子转移给或RNA分子的
5′-OH末端。我曾经用过 New England BioLabs 的
T4 Polynucleotide Kinase将 oligo 探针5‘和3 ’连成环。
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电话：021-DNA 连接酶能链接单链DNA 吗_百度知道
DNA 连接酶能链接单链DNA 吗
1：结论：DNA连接酶主要用于基因工程,将由限制性核酸内切酶“剪”出的粘性末端重新组合,故也称“基因针线”.只要是DNA就可以连接,无论单链双链.2 : 延伸：DNA连接酶也称DNA黏合酶，在分子生物学中扮演一个既特殊又关键的角色，那就是把两条DNA黏合成一条。无论是双股或是单股DNA的黏合，DNA黏合酶都可以借由形成磷酸双脂键将DNA在3'端的尾端与5'端的前端连在一起。
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T4核酸内切酶V(T4N5)重组表达、纯化及脂质体包被.pdf68页
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Category Number： Level of Secrecy ： Serial Number
： Student Number：座机电话号码511 Master's Dissertation of Chongqing University of Technology Purification and liposome-coation of Recombinant T4 endonuclease V
T4N5 Postgraduate: Zhang Weitao Supervisor： Prof. Fan kai Specialty: Microbiology and Biochemistry Pharmacy Research Direction: Genetic engineering drugs Training Unit: College of Pharmaceutical and Biological Engineering Thesis Deadline: April
8, 2012 Oral Defense Date: May
万方数据 重庆理工大学 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究所取 得的成果。除文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体 已经发表或撰写的成果、作品。对本文的研究做出重要贡献的集体和个人，均已在 文中以明确方式标明。 本人承担本声明的法律后果。 作者签名： 日期： 年
日 学位论文使用授权声明 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留 并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本 人授权重庆理工大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检 索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 本学位论文属于（请在以下相应方框内打“√”）： 1.保密□，在 年解密后适用本授权书。 2.不保密□。 作者签名： 日期： 年
日 导师签名： 日期： 年
万方数据 中文摘要 中文摘要 目的：采用融合表达方式获得 T4N5 蛋白，并对该蛋白进行脂质体包被。 方法：通过全基因合成技术获得含有凝血酶识别位点的基因序列，构建重组表达载 体 pET-32a-thrombin-T4N5 。转化表达菌Origami DE3 并筛选得到重
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标题: T4 DNA 连接酶连接双链DNA和单链DNA(双链,单链,连接酶,末端)
摘要: [T4 DNA 连接酶连接双链DNA和单链DNA(双链,单链,连接酶,末端)] 现有一实验，需将一单链DNA（约）30bp连接到双链DNA的末端，双链DNA是平末端的，单链DNA的5‘端经过磷酸化的，不知道这样是否可以将单链DNA连接到双链DNA的末端？求助多谢 关键词:[双链 单链 连接酶 末端 磷酸化 平末端]……
现有一实验，需将一单链（约）30bp连接到双链的末端，双链DNA是平末端的，单链DNA的5‘端经过磷酸化的，不知道这样是否可以将单链DNA连接到双链DNA的末端？求助多谢
怎么没有人知道这个问题，正头疼呢回复应该可以吧?没有做过单链,做过双链的可以回复我觉得这个可以借助ssh的一个原理，就是分别合成单链互补的序列，当作街头，然后退火，再用t4dna ligase连！这里面注意单链不可以磷酸化，就是合成的时候不要做任何修饰，然后就能保证一条单链和你的片断连接了回复理论上可以，但是连单链的活性很低，失败的可能性很大。
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