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干细胞医疗：为何走不出最后一步？
来源：中国科学报
近年来干细胞从实验室走向临床应用的“最后一公里”走得并不顺畅。这其中，既包括脐带血存储频遭质疑，也包括被科学家寄予厚望的“围产期干细胞”无可施展的困局。
在搜索引擎键入“干细胞”“脐带血”“胎盘储存”这样的关键词，返回的结果全是问号：干细胞治疗可靠吗？脐带血有必要保存吗？小孩儿的胎盘有用吗？诸如此类，莫衷一是。今天，越来越多的人认识“干细胞”这个名词，也越来越多的人开始关注“干细胞”的临床应用。究其原因，人们隐隐约约感觉到，干细胞“能救命”。干细胞的确能救命。国家干细胞工程技术研究中心主任、中国医学科学院血液学研究所教授韩忠朝在中国科学报社举办的首期“干细胞媒体沙龙”上分享了一个小故事：2011年日本福岛核电站核泄漏事故发生后，核电站所有工作人员都被要求提前抽取一些自己的干细胞储存起来，万一再次发生核泄漏，就用自己的干细胞救命。然而，尽管干细胞技术在临床上的应用代表着医学发展的一大方向，也蕴含着治愈多种疑难杂症的希望，但是近年来干细胞从实验室走向临床应用的“最后一公里”走得并不顺畅。这其中，既包括脐带血存储频遭质疑，也包括被科学家寄予厚望的“围产期干细胞”无可施展的困局。脐带血存储的短板今年4月份，《上海商报》报道了一位8个月大的白血病宝宝不能使用自体脐带血的案例，给自体脐带血存储蒙上一层阴影。专家解释称，1岁以内幼儿患白血病，“一般会推测是先天性的”，在这种情况下，一般不主张使用自体脐带血干细胞。这一说法得到了中国医学科学院血液学研究所儿科学教授、儿童血液病诊疗中心主任竺晓凡的证实。她指出，自体脐带血造血干细胞移植确有自救作用，但与其他治疗方法一样具有一定的适应症，并非适合任何疾病的治疗，如果“脐带血本身就有问题”，那么对于这种先天性疾病，脐带血就“不能用”。著名血液病专家、中国医学科学院血液学研究所教授钱林生曾表示，在小儿血液病领域，自体脐带血储存作为一种治疗方法虽然可用，但临床上应用并不广泛，“利用率可能不到十万分之一”。韩忠朝给出了具体数字：目前我国脐带血存储接近50万份，但真正用于自体疾病治疗的不超过10例。脐带血自体利用率如此之低，先天性遗传原因（脐血库在用户存储脐带血时需征询家族遗传病史）只是很小的一个方面，造成脐带血不能广泛使用更重要的原因在于，脐带血中干细胞数量太少，仅能满足体重在30千克以下的孩童使用，超过这个范围，“治疗效果会很差”。国际公认的标准是，脐带血有核干细胞数量至少达到2.0×107才能对应用于1公斤左右体重的人，而一次性脐带血存储的有核细胞数量一般在3.0×108左右甚至更低。这对于成人而言，数量显然是远远不够的。“一般这时候大夫不会采用脐带血作为首选，而是采用外周血、父母骨髓来源的干细胞（做移植治疗）。”韩忠朝说，脐带血中造血干细胞的数量“限制了它不可能用于很多病的治疗”。在理论上，脐带血造血干细胞的数量能够通过人工技术实现扩增，不过，人为扩增既要保证干细胞数量增加又不分化成功能细胞，难度较大，目前尚未见报道有成熟的、用于人体干细胞的扩增技术。间充质干细胞点燃新希望竺晓凡介绍说，造血干细胞移植疗法对一些白血病、再生障碍性贫血等疾病方面的确有较好的治疗效果。并且，由于造血干细胞是国人“认识”最早的干细胞，故其在人们心目中地位很高。随着人们脐带血中也含有造血干细胞，世界上首家脐血造血干细胞库很快建成。到2000年，国内也建起了几个脐血造血干细胞库。存储脐带血的价值，在于它是造血干细胞的一个来源。不过，人们很快发现了脐带血中的造血干细胞的数量短板。直到在对造血干细胞的发育过程与调控机制的研究中，国内学者率先发现原来胎盘组织中也含有大量的造血干细胞，并一致认为胎盘是临床移植用造血干细胞的一个新的来源。作为人类发现最早且使用历史最长的干细胞（从1956年Thomas开展了第一例骨髓移植并获得成功算起，造血干细胞至今已有近60年的历史），造血干细胞一直以来是成体干细胞中最负盛名的代表。不过，近年来在坊间流传能够“包治百病”的干细胞却不是造血干细胞。“谁”有本事抢去造血干细胞的“风头”呢？它叫间充质干细胞。“现在所说的干细胞乱象，‘这也能治那也能治’，主要说的就是这种干细胞。”韩忠朝介绍说，上世纪90年代科学家最早在人的骨髓中发现间充质干细胞，现在的研究显示这一类干细胞几乎存在于人类身上所有的组织、器官，“尤其小孩出生的时候，胎儿的附属组织（胎盘、羊膜、脐带等，又称围产期组织）中间充质干细胞含量非常丰富，免疫原性很低，是有希望变废为宝的东西”。“间充质干细胞是继造血干细胞之后，另一类在世界范围内广泛应用的干细胞。”军事医学科学院细胞与基因治疗中心主任、全军造血干细胞研究所所长陈虎在“干细胞媒体沙龙”上介绍说，由于间充质干细胞具有多向分化的能力，在体外可以诱导成脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞、心肌细胞、神经细胞等等，如果组织器官需要修复，就可以用间充质干细胞分化来的组织细胞来替代。陈虎解释说，间充质干细胞组织修复的作用主要体现在三个方面，除替代作用外，它还有“旁分泌效应”，即分泌很多的细胞因子（主要包括抗凋芯片亡分子、免疫调节分子、抗疤痕分子、支持作用分子、血管生成分子、趋化作用分子6大类），这些因子可以参与组织的修复；另外，间充质干细胞还可以抑制排斥反应，起到免疫调节的作用。“我们最近对174种细胞因子进行了蛋白质检测，用脐带间充质干细胞和骨髓间充质干细胞比较，发现其中101种细胞因子是高分泌的、有变化的，其中22种脐带间充质分泌的量远远高于骨髓。”陈虎说。了解干细胞移植的人都清楚，在异体移植过程中会出现一种叫作“移植物抗宿主病”（GVHD），即排斥反应。如果排斥反应属于“重度”，病人很可能会在30日内死亡。“我们发现间充质干细胞能够诱导免疫耐受，即可以减轻排斥反应。”陈虎分享说，“我们在全世界范围内第一个用供者的脐带间充质干细胞来做联合移植，发现急性GVHD可以从53.3%降到11.1%，慢性GVHD可以从28.6%降到14.3%。”陈虎等人这一研究成果的论文发表后，总后卫生部对该技术的临床试验进行了批复：“同意你院第307医院开展人脐带间充质干细胞治疗移植物抗宿主病（GVHD）的临床实验研究。”该论文也获得了“中国百篇最具影响国际学术论文”。韩忠朝将间充质干细胞免疫调控的功能形象地比喻作“细胞社会的居委会”，“利用这个特性可以用其治疗很多免疫异常的疾病、炎症反应等”。陈虎则指出，间充质干细胞目前所涉及的适应症已达到130种。“也就是说，130种既往药物治疗无效或者效果很差的疾病，有望通过间充质干细胞进行治疗。”间充质干细胞在儿童疾病应用领域也蕴含着巨大的潜力。“2011年国际上一篇脐带（血）间充质干细胞用于儿童疾病的总结称，在儿科多种疾病，包括炎症、肿瘤、自身免疫性疾病中，间充质干细胞都发挥着重要作用。加拿大已经批准了使用其作为抗GVHD新药的研发。”竺晓凡补充说，不过作为疾病的常规治疗，还需要规范化的、大样本的临床试验来支持上述理论。围产期干细胞技术之困“新生儿围产组织中，无论间充质干细胞还是造血干细胞含量都非常丰富，而且围产期干细胞增殖分化能力远强于人出生后骨髓、血液中的干细胞，并且免疫原性也比较低。”韩忠朝在与媒体互动时一口气数出围产期干细胞3个显著的优点：临床用围产期干细胞符合伦理、移植后成瘤性低、能做到变废为宝，可以说是既安全又实用。“围产期干细胞技术必将带来新的应用。”韩忠朝举例说，“我们在世界上第一个利用胎盘来源的干细胞有效治疗Ⅱ型糖尿病（成人发病型糖尿病），该临床试验结果已发表；间充质干细胞与其他细胞共移植治疗21例重症再障患者也取得了良好的效果（已发表）。”另外，在组织工程领域，胎盘来源的干细胞还特别适用于3D生物打印技术。“用可以消化的生物材料，再加上干细胞，在特定的环境下培育，就可以形成不同的组织，比如肝脏、肾脏。Science曾有文章显示已有一些组织能够培育出来了。”韩忠朝说。目前，中国在干细胞技术领域的研究仅次于美国，而在骨髓、脐带、胎盘间充质干细胞等的研究方面处于世界领先的地位，并在世界范围内首创了脐带库、胎盘库。然而遗憾的是，由于我国在这一领域的政策、法规不明朗，国家还没有一款干细胞新药在临床上获批，韩国则由于政策支持力度大，已批准上市的干细胞新药数达到3款，与美国数量相等；加拿大（新西兰同）、澳大利亚也各有一款准予上市的干细胞药物。法律专家、共和律师事务所高级顾问张建中非常关注干细胞领域的法律风险和立法规范问题。他在“干细胞媒体沙龙”上介绍说，全球范围内，不同国家对干细胞技术临床应用的立法分为三类，欧洲的一些天主教国家如奥地利、爱尔兰、波兰、挪威等仅对干细胞研究就采取严格禁止的态度；德、美、意等国则对干细胞研究和应用采取谨慎限制的态度，比较有代表性的是美国总统奥巴马甫一上台就“解禁”了干细胞的研究并给予支持；再就是以韩国为代表的采取灵活的支持态度的国家，包括中国在内。“但是中国在立法规范层面上仍显滞后，这也是法律本身特性决定的。”张建中认为，政策是制定法律的依据，然而我国在干细胞医疗的政策上还没有上升到人大立法的层次，这与是否支持和鼓励无关，而是关乎“混乱的市场”“要求一部高质量的法规”和“公众的认知”等因素。“我们用干细胞做许多疾病的临床试验，并不是都能十分清楚（疗效），但是我们看到在治疗这些威胁人类的疾病时干细胞技术有帮助，这就是文明的进步，就应该支持。”陈虎讲到这些时态度很认真，“排斥反应很严重，与眼睁睁在30天内看着患者死亡相比，间充质干细胞能够将70%的病人救活，最长的有4年（存活），我认为就应该批准临床应用。”“我们不要去炒作干细胞技术，能够治疗什么病、是否有这个基础、是否有理论依据、是否有实践证明，这样去评价比较好。”陈虎说。同时他也表示，由于干细胞制品有“人种”区分的特殊性，能够限制欧美的干细胞产品进入中国，“可以等着我们，否则中国干细胞的研究局面决不会是今天这样，可能指导原则早就出来了”。（原文标题：干细胞医疗：为何走不出最后一步？）
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外周血造血干细胞单采
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外周血造血干细胞单采有自身PBSC 即取自患者自身，单采后保存待自身PBSC移植时使用；同种异体 取自正常成人或与患者有血缘关系的健康亲属。单采后可用于同种异体PBSC移植两种。
外周血造血干细胞单采外周血造血干细胞分类
1．自身PBSC 即取自患者自身，单采后保存待自身PBSC移植时使用。
2．同种异体 取自正常成人或与患者有血缘关系的健康亲属。单采后可用于同种异体PBSC移植。
外周血造血干细胞单采外周血造血干细胞的动员
外周血造血干细胞单采动员方法分类
(1)化学药物动员：造血干细胞动员剂应具备以下几个条件：①动员效果好，提高外周血中造血干细胞倍数高，动员的造血干细胞有重建造血功能；②不良反应小；③动员作用应持续时间长，便于用血细胞分离器分离外周血造血干细胞。
造血干细胞动员剂一般分为3种类型：①肿瘤化疗药物，如环磷酰胺、马利兰、柔红霉素、阿糖胞苷等。这些药物只适用于恶性病人。②正常人和病人都可采用的药物，如硫酸葡聚糖等聚阴离子制剂属于这种造血干细胞动员剂，其效果好，动员作用持续时间长。③各种重组的人造血细胞刺激因子(重组细胞集落刺激因子)，如G-CSF、M-CSF、GM-CSF、IL-3、IL-6和SCF等，其不良反应小，动员效果好。
(2)辐射动员。放射线既能直接杀灭肿瘤细胞，同时也使正常造血细胞受到伤害，引起反馈性的造血增生，外周血中造血干细胞数量随着增加。这种动员方法适用于血液病、某些恶性肿瘤转移患者。
外周血造血干细胞单采动员方法
(1)正常人的动员：
①这类人员主要有作为同种异体PBSC移植的供体，或作为以后有可能需要进行自体PBSC移植的正常人，如从事辐射工作人员、宗教信仰(拒绝异体外周血造血干细胞移埴)。这类人员以用药物动员为佳，动员剂主要为重组细胞集落刺激因子。
②方法：于PBSC单采前5d，皮下注射重组细胞集落刺激因子，如G-CSF 2.5～5.0μg/(kg·d)，1/d，采集当天皮下注射较高剂量重组细胞集落刺激因子(如G-CSF 5μg/kg)，并静脉推注地塞米松10mg。一般情况下，单采前(使用地塞米松前)须计数外周血中白细胞总数及分类，若白细胞总数未达到20×109/L，则应延长动员时间，并适当增加动员剂的剂量，直至白细胞总数达20×109/L。第1次单采后计数单个核细胞数及测定CD+34细胞百分率计算是否达到移植剂量，若低于移植剂量，须进行第2、第3次单采，此时亦要继续使用动员剂，总采集数必须超过移植剂量，若能达到2倍移植剂量更佳。
(2)患者的动员：①对象：拟行自身PB-SC移植的患者。②方法：动员的方案有：化疗药物+重组细胞集落刺激因子、全身照射+重组细胞集落刺激因子和化疗药物+全身照射+重组细胞集落刺激因子。患者动员4d后监测白细胞数，若白细胞计数达1×109/L和血小板达20×109/L后，开始单采外周血造血干细胞，单采当天仍需使用重组细胞集落刺激因子和静脉推注地塞米松10mg。一般需单采5-7次，每次均须计数单个核细胞总数和测定CD+34细胞百分率，当达到移植剂量时停止单采。
外周血造血干细胞单采单采操作
1．前提 经过PBSC的动员，供体或患者的白细胞总数和血小板计数达到要求后，可在静脉推注地塞米松10mg后1～2h开始单采。
2．单采器材准备 同血小板单采。
3．单采操作 (1)同血小板单采。 (2)全血处理量一般为8-15L。
外周血造血干细胞单采注意事项
1．单采过程中严密监测献血员/患者生命体征。
2．单采过程中严密注意献血员/患者对抗凝剂的反应，若出现异常反应，应迅速处理。
3．严格无菌操作，预防感染及单采成分被污染。
4．单采前应向献血员/患者或家属说明单采的目的、过程及可能出现的不良反应及意外，并要求其签字。
5．每次单采应有详细的记录，并注意保存。
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The requested URL /subject_article.jsp was not found on this server.姐姐昨日捐献外周血造血干细胞
　　A03版　　新闻回放：
在榆树市五棵树镇爱国村，住着相依为命的母女三人。今年7月，7岁的媛媛被查出患有极重型再生障碍性贫血，只有通过骨髓移植手术才能治。幸运的是，17岁的姐姐婷婷与妹妹骨髓配型成功。现在是动手术的最佳时间，可20万元的手术费让一家人犯了难。为救妹妹，姐姐打算捐骨髓，弃读大学打工挣钱。在好心人的帮助下，手术费差不多凑齐了。
本报讯 （记者 姜彦艳）
看着婷婷猫着腰，被人搀着走到自己的面前，妈妈刘文丽泪如雨下，“看着孩子，我心疼啊！”陪着小女儿媛媛在隔离舱里11天，她也惦记着婷婷。9月11日16时许，当骨髓输到媛媛体内，脸色苍白的婷婷咬着牙走去隔离舱。隔着玻璃墙，母女都忍不住掉了眼泪。近在咫尺的亲人，却只能通过电话听到对方的声音。刘文丽让婷婷好好休息，婷婷说自己没事儿，就盼着妹妹快点儿好起来。
昨日8时，婷婷又躺在病床上，双臂扎着两根粗针管—这次要进行外周血造血干细胞的采集。
抽骨髓 姐姐疼得直不起腰
妹妹生病后，婷婷成了一家的顶梁柱。陪妹妹看病的两个多月，她的体重从98斤掉到了85斤。看着孩子越来越瘦，二姨刘文萍心疼得不行。“这孩子太要强了，手术前她感冒发烧，还领着妹妹各个楼层做检查，这个家全靠她顶着。”
10日晚，婷婷通过了血液检测，因为第二天就要抽取骨髓，所以那天晚上开始禁食。二姨和舅妈在病房里陪她，像往常一样，婷婷早早地洗漱，过了21时就上了床。二姨说，她觉得孩子睡得很安稳，之前她问婷婷害不害怕，婷婷笑着说：“不害怕！”
11日早上，婷婷早早起了床。舅妈说，婷婷自己收拾好了床，又按照医生的要求趴在了床上。因为抽骨髓手术要求趴着，这个动作婷婷练了好久。8时，换好了衣服，婷婷在家人的陪伴下，进了手术室。
陪小女儿住了11天隔离舱的刘文丽，不停地给刘文萍打电话：“出来没有？咋样了？”
11时，婷婷被推进苏醒室。刘文萍说，婷婷特别坚强，出来时问她疼不，她摇摇头，脸上还挤出笑容。
手术结束后，提取的240毫升骨髓输入到了媛媛体内。刘文丽说，输入骨髓，媛媛不太适应，还伴有呕吐和腹疼。但医生说是正常反应，需要一定的适应期。
到了下午，婷婷恢复了一点儿体力，就着急去看妹妹。因为太疼了，她只能猫着腰，被刘文萍搀到隔离舱的玻璃墙外。
见到了妈妈，婷婷还是没忍住，掉了眼泪。看着大女儿的样子，刘文丽也哭了，她叮嘱婷婷，要多吃东西，好好调理。可刘文萍说，婷婷术后不愿意进食。
昨天分离造血干细胞
抽取骨髓后的疼痛，让婷婷一夜没睡。医生给婷婷贴了“冰贴”镇痛，因为要做外周血造血干细胞的采集。
根据医院的要求，婷婷8时30分到了3楼的细胞治疗中心，被安排在最里边靠窗口的病床上。细细的胳膊上扎着两根管子。一根抽出她的血液，送入分离机，将其中的造血干细胞进行分离；另一根再将余下的血液输回体内。
表姐在床边陪她，姐妹俩偶尔交流两句。姐姐让婷婷多吃点儿东西，可婷婷还是摇摇头，吃不进去。看着窗外，婷婷说：“等身体恢复了，好想去上学。”
11时，刘文萍进去看她，兴奋地说：“已经分离出大半袋儿了，这回孩子遭的罪总算快到头儿了。”
13时30分，造血干细胞采集顺利完成。婷婷回到了病房，可她心里还是放心不下妹妹。这次从外周血分离出来的造血干细胞，在16时许再次输到妹妹体内。
两次手术后，备用的600毫升血液都输回婷婷身体里。医生说，这样能更快地帮助婷婷恢复。而给媛媛输入造血干细胞后，就要靠她自己来适应，大约观察两到三周，看造血干细胞的生长情况。如果一切顺利，媛媛康复的机会在八成以上。
骨髓移植和外周血造血干细胞移植，都是为了采集和移植造血干细胞，种植到患者体内，维持其造血及免疫功能。但骨髓移植需要在麻醉的状态下采集骨髓，目前多数的移植都采用外周血造血干细胞移植的方法。与骨髓移植相比，它具有造血恢复快、采集方便、供者痛苦少的优点，供者易于接受，对供者的健康无任何影响。
“为救妹妹她愿捐骨髓弃读大学”续（来源：新文化报）
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【求助】外周血CD34+细胞（造血干细胞）计数的问题
页码直达：
这个帖子发布于4年零334天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
小弟最近在摸索外周血CD34+细胞计数，用ISHAGE单平台法，CD34 PE 和CD45 FITC 双染，裂解红细胞后免洗，+荧光微球，然后上样。调试电压逐级设门后，几乎找不到CD34+细胞。总事件80万+，在CD34+门的细胞才20多，计算后为200个/ml。我想请问，外周血是必须经过给药动员后，造血干细胞才能增加到能被ISHAGE法检测的程度吗，未经动员的外周血中CD34+细胞能有多少？一会再发下图，谢谢各位
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这是未经动员的外周血 CD34+计数的结果，没有成群的CD34+细胞，所以我很疑惑做得对不对，P2门 里没有成群的，P4,P7门里也没有....外周血EDTA 抗凝，室温放置，1小时内处理检测，采血后用全血自动计数仪计数WBC，均为1*E6/100ul左右，不稀释，按20ul PE CD34 和20ul FITC CD45的量配染色液染色，100ul全血+40ul染色混合液，室温避光30分钟孵育。BD 红细胞裂解液1:9比例稀释，2ml1*裂解液避光室温裂解十分钟，不洗，直接加荧光微球，混匀上机。请问有做过的道友么，急切的盼望斧正啊~~
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外周血中CD34阳性细胞应该是比较少，但是细胞应该还是能够成群的。建议：用percoll密度梯度离心法得到PBMC后再加抗体，然后上样分析。
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我用楼上的方法测过2个，细胞数很少。其中一个比较漂亮，但是要显示100000个以上的events才可以看出明显的群。另一个基本看不到，和背景没什么区别。这张就是显示了100000个events，供参考。
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active 我用楼上的方法测过2个，细胞数很少。其中一个比较漂亮，但是要显示100000个以上的events才可以看出明显的群。另一个基本看不到，和背景没什么区别。这张就是显示了100000个events，供参考。我这图总事件40W+, CD45+事件也由20W+左右，但是还是不成群....，今天测了据说是经过动员的外周血，跟我这图结果区别不大， 我再考虑是不是CD34抗体有问题......请问您的操作步骤是怎么样的呢，谢谢
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按kern6549说的，外周血经Ficoll密度梯度离心分离出PBMC，然后染色，没什么特殊的。
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