细胞库/细胞培养
ELISA试剂盒
实验室仪器/设备
原辅料包材
体外检测试剂
实验方法原理
噬菌粒巧妙地组合了质粒和丝状噬菌体的特征。除了基本特征外，这些质粒通常是高拷贝数的，并带有一个修饰后的丝状噬菌体的主要基因间区。这个区域 ( 野生型为 508 bp)不表达蛋白，但含有全部的顺式作用序列，该作用是病毒 DNA 合成起始和结束及噬菌体颗粒的形态发生必不可少的。
试剂、试剂盒
仪器、耗材
一、材料1. 缓冲液和溶液卡那霉素（10 mg/ml)SDS 溶液（2%，m/V）蔗糖凝胶加样缓冲液2. 凝胶琼脂糖凝胶（0.7%) 悬于 0.5 X TBE, 含 0.5 μg/ml 溴化乙锭3. 培养基加富的 M9 基本培养基平板含 60 μg/ml 氨苄青霉素的 YT 琼脂平板2 X YT 培养基含 60 μg/ml 氨芐青霉素的 2 X YT 培养基含 25 μg/ml 卡那霉素的 2 X YT 培养基4. 专用设备水浴，调至 65℃5. 载体和菌株噬菌体 M13K07 ( 辅助）大肠杆菌 F' 菌株大肠杆菌 DH11S大肠杆菌 DH11S，用 M13 噬菌体的噬菌粒载体转化大肠杆菌 DH11S，用带有外源 DNA 的 M13 噬菌体的重组噬菌粒载体转化二、方法高滴度辅助噬菌体原种的制备成功使用噬菌粒的关键是制备已知精确滴度的辅助噬菌体原种。1. 从加富的基本琼脂平板上挑取一个大肠杆菌 DH11S 的新鲜单菌落，接种 20 ml 2 X YT 培养基，温和揺动，37℃ 培养至 OD600 达 0.8。2. 用 2 X YT 培养基制备一系列 10 倍稀释的 M13K07 噬菌体，将稀释的噬菌体铺板，以获得在 DH11S 细胞层中良好分离的噬菌斑。3. 挑取分离良好的单个噬菌斑接种于装有 2~3 ml 含 25 μg/ml 卡那霉素的 2 X YT 培养基的 15 ml 培养管中。温和摇动（250 r/min), 37℃ 培养 12~16 h。重要：以下步骤使用从单个新鲜挑取的噬菌斑获得的 M13K07 原种。4. 将感染上清转移至 1.5 ml 无菌微量离心管，在微量离心机上，以最大转速，4℃ 离心 2 min。上清转移至新管中 4℃ 保存。5. 采用在一株支持 M13 噬菌体生长的大肠杆菌 F' 菌株（TGI、DH11S、NM522 或 XLl-Bkie) 中形成噬菌斑的方法，测定每个噬菌体原种的滴度。原种的感染噬菌体颗粒滴度应为 1010 pfu/ml。弃去所有低滴度的原种。用辅助噬菌体增殖重组噬菌粒6. 在两块含有 60 μg/ml 氨苄青霉素的 YT 琼脂平板上，取重组噬菌粒转化的和空噬菌粒转化的 DH11S 菌划线，37℃ 培养 16 h。7. 挑取数个重组噬菌粒转化克隆和 1~2 个其亲本载体转化的克隆，接种至装有 2~3 ml 含 60 μg/ml 氨苄青霉素的 2 X YT 培养基的 15 ml 培养管中。由于影响单链 DNA 得率的因素难以确定，应从每个噬菌粒重组体中挑取多个克隆，难以提高成功率。8. 在每个培养管中加入 M13K07 辅助噬菌体至浓度为 2 X 107 pfu/ml。剧烈振荡 ( 300 r/min) 37℃ 培养 1.0~1.5 h。在这种短时间培养后，细菌培养液应只是略浑，如果生长过旺，用预热的 2 X YT 培养基稀释培养物，直至浑浊恰能看见。9. 在培养物中加入卡那霉素至终浓度为 25 μg/ml，37℃ 14~18 h。由于噬菌体 M13K07 含有一个卡那霉素抗性基因，因而在这一步加入抗生素后，只有那些被感染了的细菌才能存活。其他辅助噬菌体（如 R408 ) 不带抗生素抗性标记。在加入抗生素前应检査辅助噬菌体的基因型。10. 将菌悬液转移至微量离心管，在微量离心机上，以最大转速，室温离心 5 min, 分离菌体和培养基，将上清转移至新管中 4℃ 保存。用凝胶电泳估计噬菌粒单链 DNA 的得率11. 在 0.5 ml 微量离心管中分别加入 40 μl 上清与 2 μl 2% SDS, 轻拍管壁混合内容物，65℃ 温育 5 min。估计含噬菌粒单链拷贝的病毒颗粒的得率。先将上清稀释后感染大肠杆菌 DH11S，然后铺于含氨芐青霉素（60 μg/ml）的 YT 琼脂平板。根据 37℃ 培养 24 h 后产生的氨芐青霉素抗性克隆数，计算上清中含噬菌粒单链 DNA 的病毒颗粒数，含 2 X 1011~ 5 X 1011 pfu/ml 的上清可以获得满意的纯化噬菌粒单链 DNA 得率。12. 在每个噬菌粒 DNA 样品中加入 5 μl 加样缓冲液，混合后加至 0.7% 琼脂糖凝胶的加样孔。13. 6 V/cm 电泳数小时，至溴酚蓝迁移至胶的大约一半。在紫外线下检査和照相。得率随噬菌粒上外源 DNA 的大小和持性的不同而不同。但通常为约 1 μg/ml 培养物。14. 从含大置单链 DNA 的上清中分离噬菌粒单链 DNA。按方案“M13 噬菌体单链 DNA 的制备”的步骤进行，将体积放大 2~3 倍。噬菌粒和 M13 噬菌体载体一样，随外源 DNA 的大小和特性不同，其单链 DNA 的得率可以差五至十倍。 通常片段越大，得率越低。而且，即使外源 DNA 大小相同，其单链 DNA 的得率也可以有很大变化，如，大多数酵母 DNA 片段对噬菌粒的增殖，似乎没有问题，然而同样大小的人基因组 DNA 可能使单链 DNA 的得率令人失望。噬菌粒上外源 DNA 的插入方向和噬菌体 DNA 复制起点的方向也会对得率产生重要影响。因此，用相反方向重新克隆片段或换用噬菌体 DNA 复制起点方向相反的载体有时可以解决得率低的问题。
(共0个问题)
当前暂时没有任何关于
用噬菌粒载体制备单链DNA 的问题，快来添加第一个问题吧！
相关实验Protocol
谁能提供实验帮助？
谁做这个实验？
谁关注这个实验？
丁香通采购热线：400-
Copyright (C)
DXY All Rights Reserved.声明：本文由入驻搜狐公众平台的作者撰写，除搜狐官方账号外，观点仅代表作者本人，不代表搜狐立场。
　　顾建文，解放军306医院，整理
　　载体（vector） ，指在基因工程重组DNA技术中将DNA片段（目的基因）转移至受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。三种最常用的载体是细菌质粒、噬菌体和动植物病毒。
　　①在宿主细胞中能保存下来并能大量复制，且对受体细胞无害，不影响受体细胞正常的生命活动。
　　②有多个限制酶切点，而且每种酶的切点最好只有一个，如大肠杆菌pBR322就有多种限制酶的单一识别位点，可适于多种限制酶切割的DNA插入。
　　③含有复制起始位点，能够独立复制；通过复制进行基因扩增，否则可能会使重组DNA丢失。
　　④有一定的标记基因，便于进行筛选。如大肠杆菌的pBR322质粒携带氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因，就可以作为筛选的标记基因。一般来说，天然运载体往往不能满足上述要求，因此需要根据不同的目的和需要，对运载体进行人工改建。现在所使用的质粒载体几乎都是经过改建的。
　　⑤载体DNA分子大小应合适，以便操作。
　　基因克隆的载体类型：质粒载体，噬菌体载体，柯斯质粒载体，M13噬菌体载体，噬菌粒载体。
　　载体分类
　　质粒载体
　　质粒载体是一种相对分子质量较小、独立于染色体DNA之外的环状DNA(一般有1～200 kb左右，kb为千碱基对)，有的一个细菌中有一个，有的一个细菌中有多个。质粒能通过细菌间的接合由一个细菌向另一个细菌转移，可以独立复制，也可整合到细菌染色体DNA中，随着染色体DNA的复制而复制。
　　噬菌体载体
　　利用噬菌体作载体，主要是将外来目的DNA替代或插入中段序列，使其随左右臂一起包装成噬菌体，去感染大肠杆菌，并随噬菌体的溶菌繁殖而繁殖。
　　病毒载体
　　质粒和噬菌体载体只能在细菌中繁殖，不能满足真核DNA重组需要。感染动物的病毒可改造用作动物细胞的载体。由于动物细胞的培养和操作较复杂、花费也较多，因而病毒载体构建时一般都把细菌质粒复制起始序列放置其中。使载体及其携带的外来序列能方便地在细菌中繁殖和克隆，然后再引入真核细胞。现在人们还在不断寻找新的运载体，如叶绿体或线粒体DNA也有可能成为运载体。
　　载体构建
　　一、原理
　　依赖于限制性核酸内切酶，DNA连接酶和其他修饰酶的作用，分别对目的基因和载体DNA进行适当切割和修饰后，将二者连接在一起，再导入宿主细胞，实现目的基因在宿主细胞内的正确表达。
　　二、操作步骤
　　1、摇菌（制作感受态细胞备用）
　　取装有液体培养基的3ml试管两支（依情况而定），每管加40-100μl菌种，过夜摇。
　　2、提质粒（也就是载体）
　　依照提质粒试剂盒中的说明书操作（根据情况最后一步洗脱时可以多洗1-2次）。
　　3、酶切（双酶切产生粘性末端）
　　反应所需试剂 体积（单位：ul）
　　质粒 10
　　所需内切酶反应缓冲液 2
　　所需限制性内切核酸酶 1
　　将加好的EP管置于37℃保温1-2h。（依照提酶切的具体步骤操作；为了达到最佳酶切的效果，最好根据所选用的酶确定所需要的反应温度）
　　4、电泳检测
　　将酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳，检测酶切是否成功。
　　回收胶：琼脂糖与缓冲液一比一制胶，经过切胶回收目的产物，也有目的产物纯化的功能；
　　检测胶：琼脂糖与缓冲液一比二制胶，为了检测目的条带与预期是否相符。
　　切胶回收与产物纯化是差不多的过程，所达到的目的是一样的：切胶回收也是一种纯化过程，它能去除非目的片段，然后用回收试剂盒进行纯化，能将很不纯的DNA溶液纯化；产物纯化是将较纯的DNA溶液进一步除去多余的杂质，用纯化试剂盒，你会发现纯化试剂盒和回收试剂盒的步骤几乎一样。
　　5、载体与目的基因连接
　　如果电泳检测酶切成功的话，则仔细将所需的片段切割下来，将胶体回收（依照胶回收试剂盒说明书操作）；之后将回收的片段和载体连接。置于温箱，12-16℃，保温8-16h
　　6、转化（连接产物转化到感受态细胞中）
　　依照转化具体操作步骤做感受态，将上述连接产物进行转化实验，涂板培养，37℃，
　　12-16h。
　　7、单克隆检测
　　（1）挑单克隆
　　先将AMP从冰箱中取出，待融化后，在3ml装有LB液体培养基的试管中加入3μL的
　　AMP，用枪头混匀；取1.5 mlEP管5支（依情况可以多挑几管），给每支管中加500μL上述培养液，然后用接种环（或黄枪头）挑单克隆，挑完后用枪吹打；之后，将挑好的菌摇4-5小时，至混浊即可。
　　（2）单克隆检测
　　以每管摇好的菌液为模板，以原有的引物进行PCR，然后将PCR产物跑电泳，观察电泳图像中那几管的条带正确，将正确条带相对应管的菌液再抽取100μL，加到3ml（有LB液体培养液，AMP+）试管中，过夜摇；第二天重摇，将摇好的菌取1ml于1.5mlEP管中送测序，并保种。
　　注：①挑单克隆时，一定要挑单一圆润的菌落，有卫星斑的不挑。
　　②别忘记往培养基中加AMP。
　　③ 用接种环挑菌后，要在酒精灯上反复灼烧，然后再进行下一次挑菌。
　　三、注意事项
　　1． 连接产物可短时间在-20℃保存，使用时可以取出进行后续实验；
　　2． 在细胞转化时，冰浴和热激要严格控制好时间；
　　3． 连接反应是DNA重组过程中的关键步骤，其成败的重要参数之一就是温度，因此要控
　　制好连接温度。
　　4．进行黏末端连接时，会产生一定数量的载体自身环化分子，导致转化菌中过高的假阳性克隆背景。针对这一问题，常采用牛小肠碱性磷酸酶（CIP）去掉载体的5’-磷酸以抑制DNA片段的自身环化。
欢迎举报抄袭、转载、暴力色情及含有欺诈和虚假信息的不良文章。
请先登录再操作
请先登录再操作
微信扫一扫分享至朋友圈
宣传健康科普致知识，传播医院服务理念。
1431文章数以大肠杆菌为宿主的载体_菌种吧_百度贴吧
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&签到排名：今日本吧第个签到，本吧因你更精彩，明天继续来努力！
本吧签到人数：0可签7级以上的吧50个
本月漏签0次！成为超级会员，赠送8张补签卡连续签到：天&&累计签到：天超级会员单次开通12个月以上，赠送连续签到卡3张
关注：318贴子：
以大肠杆菌为宿主的载体
一、载体的构建外源基因往往不能独立复制，需要与一个复制子相连接，使它能被引入宿主内并能在其细胞内复制。在重组DNA技术中担负基因转移任务的复制子叫载体(vector)。一个理想的载体通常应具备下列特征。①能在宿主细胞中独立复制，或者能有效地协助外源基因整合到宿主染色体上，使外源基因可以随宿主染色体一起复制。②容易进入宿主细胞。③有一定的选择性标记，易于识别和筛选。④可插入一段较大的外源DNA，而不影响其本身的复制。⑤有合适的限制酶位点便于进行克隆。另外，还应具有较好的安全性、易制备、多拷贝、易于表达等特点。重组DNA技术中所用的载体主要是质粒和(见转导)两类。为了实现目标基因的复制和表达，宿主和载体缺一不可，而且不同的宿主需要不同的载体，两者相辅相成，构成完整的宿主一载体系统。这里主要以和酵母菌宿主为例介绍常用载体。1. 以为宿主的载体以为宿主的体系，常用的载体有质粒载体、以及由它们组合而成的复合型载体(柯斯质粒、噬菌粒)等。(1)质粒载体质粒载体是在天然质粒的基础上为适应实验室操作人工构建而成的。与天然质粒相比．质粒载体通常具有以下特点。①带有一个或几个选择性(如抗生素抗性基因)。②带有一个人工合成的含有多个限制性内切酶识别位点的序列。③去掉了大部分非必要序列，使分子量尽可能减少。④往往还带有一些多用途的辅助序列。常用的质粒载体大小一般在1～10kb，如pBR322、pUC系列、pGEM系列和pBluescrjpt(简称pBS)系列等。以pUCl9为例，它的大小为2686bp．带有一个复制起始位点、一个抗性基因、一个操纵子β一半乳糖苷酶基因(lacZ)的启动子及其编码n一的DNA序列组成的lacZˊ基因、一个调节缸lacZˊ的阻遏蛋白(repressor)基因如lacI，以及位于lacZˊ基因中靠近5ˊ端的一段，在该多克隆位点插入外源基因后，将破坏lacZˊ基因，使其不能正常表达(图6．5)。筛选含pUCl9质粒细胞的过程比较简单：如果细胞含有未插入目的DNA的pUCl9质粒，在同时含有诱导物IPTG和X—gal底物的培养基上培养时将会形成；如果细胞中含有已经插入目的DNA的pUCl9质粒，在同样的培养基上培养将会形成白色菌落。因此，可以根据培养基上的颜色反应十分方便地筛选出重组子。一个与pUCl9质粒十分类似的质粒是pUCl8，两者的差别仅在于多克隆位点的插入方向彼此相反。(2) 重组DNA技术中常用的噬菌体载体主要有x噬菌体和一些单链DNA噬菌体(如M13噬菌体)。野生型的λ噬菌体DNA含有多个常用限制酶切点，不宜作为载体。经过研究人员的多年努力，目前已经成功地构建了多种λ载体，这些载体可分为两类。①插入型载体(insertion vector)，它具有单一的酶切位点，可供外源DNA的插入。②置换型载体(replacement vector)，它具有成对的酶切位点．两个酶切位点之间的DNA片段可被外源DNA片段置换。由于λ噬菌体颗粒有效包装DNA的长度范围为野生型长度的78％～105％，也就是38～52kb，而λ噬菌体裂解生长必需基因组就占了28～30kb，冈此可克隆的最大外源DNA长度约为24kb。一般插入型载体可克隆的最大外源DNA长度在10kb以下，而置换型载体可克隆的外源DNA长度在9～24kb之间。λ在DNA文库的构建中非常有用。在中，还存在一类丝状噬菌体，如M13、fl和fd等，其噬菌体颗粒中包装的是单链(正链)的DNA。这类特殊的噬菌体在分子生物学中具有独特的地位。现在，M13噬菌体已经被发展成为一种通用的克隆载体。与上述载体相比，M13的一个突出优点是，可以方便地获得含目的基因的单链DNA。这种单链DNA可广泛应用于核苷酸序列测定、探针制备和寡核苷酸定点突变等。(3)柯斯质粒(cosmid) 柯斯质粒，又称黏粒，是由质粒中插入λDNA的包装识别序列cos位点构建而成。它是一种特殊的质粒载体。大多数常用的柯斯质粒载体大小约为6kb，因此它可克隆的外源DNA片段长32～46kb，比λ 可克隆的片段大了约一倍。柯斯质粒同时具有质粒和x噬菌体载体的某些特性。(4)噬菌粒(phagemid) 另一类由质粒和噬菌体组合而成的特殊质粒载体称为噬(菌)粒。噬菌粒是以普通质粒载体与丝状噬菌体M13或f1等为基础构建的，在质粒中插入了包括丝状噬菌体DNA合成起始和终止的顺式作用信号及丝状噬菌体颗粒装配所需的序列等丝状噬菌体主要基因，它同时具有质粒和丝状噬菌体的特征，因此称为噬(菌)粒(phagemid或phasmid)。与M13相比，噬菌粒分子量小、克隆能力大、遗传也更稳定。与普通的质粒载体相比，噬菌粒的主要优点是容易得到单链DNA。由pUCl8／19质粒发展而来的pUCll8／119质粒就是典型的噬菌粒载体。(5)大容量克隆载体 细菌人工染色体(bacterial artificial chlromosome，BAC)是以致育因子(F因子)为基础构建的合成载体，含F因子复制的起始基因和定向基因(oris和repE)。其特点为：拷贝数低，稳定，克隆的外源DNA的平均大小约120kb，个别BAC可克隆最大达300kb的基因组DNA。BAC可以通过电穿孔导人细菌细胞，其不足之处是对无选择性标记DNA的产率很低。P1人工染色体(P1 artificial chlromosome，BAC)是结合BAC和P1的优点而开发的克隆体系，可以包含60～150kb的外源DNA片段。(6)表达载体根据载体的不同用途，还有克隆载体和表达载体之分。克隆载体是指以繁殖DNA片段为目的的载体。这种载体一般本身较小，但可携带较大的外源DNA片段．在细胞内的拷贝数较高。表达载体则是用来将克隆的外源基因在寄主细胞内表达成蛋白质的载体。表达载体通常具有强而可控的启动子、转录终止子、翻译起始序列、翻译增强子和翻译终止子等与有关的序列。其中启动子是决定基因表达水平的关键因素。也是构建表达载体时优先考虑的环节．表达载体的启动子应在宿主中具有很强的启动效率。大肠杆菌表达载体常具有大肠杆菌操纵子的lac启动子、色氨酸操纵子的trp启动子、λ 噬菌体的PL启动子或者一些复合启动子等。其次，有些表达载体自身不带抑制物基因，使用这类载体时最好选择能产生抑制物蛋白的宿主菌，否则目的基因的表达不能调控，不利于高效表达。另外，用表达载体获取蛋白质产物时还要考虑宿主菌是否合适，因为很多宿主菌往往含有蛋白酶，会对表达产物产生降解作用。因此，用作基因表达的宿主菌一般都要经过改造，使其蛋白酶基因缺失或失活，以便于表达产物的积累。来源：中国微生物菌种网
贴吧热议榜
使用签名档&&
保存至快速回贴噬菌体是病毒吗?-学网-中国IT综合门户网站-提供健康,养生,留学,移民,创业,汽车等信息
> 信息中心 >
噬菌体是病毒吗?
来源：互联网 发表时间： 15:58:25 责任编辑：鲁晓倩字体：
为了帮助网友解决“噬菌体是病毒吗?”相关的问题，学网通过互联网对“噬菌体是病毒吗?”相关的解决方案进行了整理,用户详细问题包括:RT,我想知道:噬菌体是病毒吗?，具体解决方案如下：解决方案1：没错,是侵染细菌什么的病毒，高中有学的噬菌体是由D.Herelle和Twort各自独立发现的。噬菌体(bacteriophage, phage)是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的细菌病毒的总称。本世纪初在葡萄球菌和志贺菌中首先发现。噬菌体具有病毒的一些特性：个体微小。噬菌体基因组含有许多个基因，但所有已知的噬菌涪帝度郜道佃权顶护体都是细菌细胞中利用细菌的核糖体、蛋白质合成时所需的各种因子、各种氨基酸和能量产生系统来实现其自身的生长和增殖。一旦离开了宿主细胞，噬菌体既不能生长，也不能复制。噬菌体分布极广，凡是有细菌的场所，就可能有相应噬菌体的存在。在人和动物的排泄物或污染的井水、河水中，常含有肠道菌的噬菌体。在土壤中，可找到土壤细菌的噬菌体。噬菌体有严格的宿主特异性，只寄居在易感宿主菌体内，故可利用噬菌体进行细菌的流行病学鉴定与分型，以追查传染源。由于噬菌体结构简单、基因数少，是分子生物学与基因工程的良好实验系统。 噬菌体颗粒在结构上有很大差别，一般可分成三种类型，即无尾部结构的二十面体，有尾部结构的二十面体和线状体，迄今已知的噬菌体大多数是有尾部结构的二十面体。噬菌体颗粒感染一个细菌细胞后可迅速生成几百个子代噬菌体颗粒，每个子代颗粒又可感染细菌细胞，再生成几百个子代噬菌体颗粒。如此重复只需4次，一个噬菌体颗粒便可使几十亿个细菌感染而死亡。当把细菌涂布在培养基上，长成一层菌苔时，一个噬菌体感染其中一个细菌时，便会同上面所说的那样，把该细菌周围的成千上万个细菌感染致死，在培养基的菌苔上出现一个由于细菌被噬菌体裂解后造成的空斑，这便称为噬菌斑(plaque)。每一噬菌体除了能使宿主细菌裂解死亡外，还有一些噬菌体感染细菌后，并不使细胞死亡，称为温和噬菌体，这些噬菌体感染细菌后，将其自身的基因组整合进宿主细胞的基因组，此时，这种宿主细菌称为溶原性细菌。溶原性细菌内存在的整套噬菌体DNA基因组称为原噬菌体(prophage)，溶原性细菌不会产生许多子噬菌体颗粒，也不会裂解；但当条件改变使溶原周期终止时，宿主细胞就会因原噬菌体的增殖而裂解死亡，释放出许多子代噬菌体颗粒。溶原性细菌有两个特点。第一，溶原性细菌在被噬菌体感染并溶原化后，不会被同种噬菌体再次感染，这是超感染免疫性。第二，经过若干世代后，溶原性细菌会开始进入溶菌周期，即溶原性细菌的诱发。此时，原噬菌体从宿主基因组上切离下来进行增殖。λ噬菌体载体不具有质粒载体的抗生素抗性的标记基因；因此，对λ重组分子的选择主要有下面几种方法。① cI基因功能选择 cI基因编码的阻遏蛋白可使感染了λ噬菌体的大肠杆菌进入溶原化状态。如果在插入型载体的克隆位点上，或是置换型载体的可置换片段中，放上一个cI基因，当外源DNA插入或取代时，便破坏了cI基因，使出现cI-表型。此时，λ重组分子生成的是透亮的噬菌斑，而未重组的λ噬菌体由于仍保有cI基因，所以宿主细菌是溶原化的，就生成混沌的噬菌斑。②lac Z基因功能选择 lac Z基因的产物为卢―半乳糖苷酶，在Xgal―IPTG培养基上显现蓝色。在插入型载体的lac Z基因序列中引入限制性内切核酸酶的切点，外源DNA插入这个克隆位点就会破坏lac Z基因，于是在上述培养基上出现无色的噬菌斑。如果没有同外源DNA形成λ重组分子，则lac Z基因未遭破坏，在培养基上出现蓝色的噬菌斑。③spi-选择 λ噬菌体的red和gam基因产物可抑制噬菌体在宿主细菌中正常生长，red-和gam-突变型λ噬菌体则可正常生长。当置换型载体的可置换片段中......余下全文>>
放上red和gam基因后，外源DNA片段取代了置换片段，则同时除去了red、gam基因，就可在宿主菌中生长，否则就不能正常生长。
解决方案2：寄生在细菌体内的病毒叫噬菌体寄生在植物体内的叫植物病毒寄生在动物体内的叫动物病毒
解决方案3：不是，好像噬菌体真菌。
相关文章：
最新添加资讯
24小时热门资讯
Copyright © 2004- All Rights Reserved. 学网 版权所有
京ICP备号-1 京公网安备02号下列不能作为基因工程运载体的是A.噬菌体B.质粒C.病毒D.大肠杆菌 题目和参考答案——精英家教网——
成绩波动大？难提高？听顶级名师视频辅导，
& 题目详情
下列不能作为基因工程运载体的是A.噬菌体B.质粒C.病毒D.大肠杆菌
D试题分析：基因工程常用的运载体：质粒、噬菌体和动植物病毒。故选D考点：本题考查基因工程的运载体。点评：本题考查考生的识记能力，属于容易题。
请在这里输入关键词：
科目：高中生物
来源：学年福建省莆田一中高二上学期期末考试生物试卷（带解析）
题型：单选题
下列不能作为基因工程运载体的是（&&&）A．噬菌体B．质粒C．病毒D．大肠杆菌
科目：高中生物
来源：学年四川绵阳市第三学期期末教学质量测试生物卷（解析版）
题型：选择题
下列不能作为基因工程操作工具的是A．限制酶&&&&&&& B．DNA连接酶&&&&&&&& C．DNA聚合酶&&&&&&&& D．噬菌体&
科目：高中生物
来源：2014届福建厦门大学附属科技中学高二下学期期中考试生物试卷（解析版）
题型：选择题
下列不能作为基因工程中的载体的是&&&&&&&&&&（&&&）A．细菌质粒&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& B．噬菌体C．细菌拟核的DNA &&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& D．动植物病毒&
科目：高中生物
来源：2014届福建省高二上学期期末考试生物试卷（解析版）
题型：选择题
下列不能作为基因工程运载体的是（&&&）A．噬菌体&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& B．质粒C．病毒&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& D．大肠杆菌&
科目：高中生物
来源：2010年福建省厦门市高二下学期质量检测生物试题
题型：选择题
下列不能作为基因工程中的载体的是&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& （&&& ）&&&&&& A．细菌质粒&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& B．噬菌体&&&&&& C．细菌拟核的DNA &&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& D．动植物病毒&
精英家教网新版app上线啦！用app只需扫描书本条形码就能找到作业，家长给孩子检查作业更省心，同学们作业对答案更方便，扫描上方二维码立刻安装！