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随时随地聊科研人类免疫缺陷病毒(hiv)抗体检测
HIV-testing
人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体检测
基于1个网页-
方法对357例吸毒人员进行面对面问卷调查和人类免疫缺陷病毒（HIV）抗体、梅毒快速血浆反应素环状片试验（RPR）检测。
Methods A face to face questionnaire investigation was conducted among 357 drug users, and the subjects were tested for HIV antibody and syphilis RPR.
目的评价人类免疫缺陷病毒（HIV）抗体快速检测试剂检测全血、血清或血浆样品中HIV抗体的敏感性及特异性。
Objective To evaluate the sensitivity and specificity of rapid diagnostic kit for HIV antibody in test for HIV antibody in whole blood, serum or plasma samples.
目的：通过对酶联免疫吸咐试验（ELISA）双抗原夹心一步法和二步法检测人类免疫缺陷病毒（HIV）抗体的比较，探讨各自特点。
Objective:To compare the characteristics of the one step and two steps ELISA(Enzyme Linked Immunosorbent Assay) diagnostic kit in detecting of human immunodeficiency virus(HIV) antibodies.
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小鹅瘟病毒VP3基因的克隆表达及抗小鹅瘟病毒单克隆抗体的研制
Expression of Gosling Plague Virus VP3Gene and Development of Monoclonal Antibodies Against GPV
作者中文名
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预防兽医学
VP3基因,生物学特性,重组杆状病毒,单克隆抗体
鹅细小病毒感染(Goose Parvovirus Infection),又称为小鹅瘟(Gosling plaque),是由鹅细小病毒(Goose parvovirus, GPV)引起的一种急性、高度接触性、败血性传染病。主要侵害30日龄以内雏鹅和雏番鸭,以渗出性肠炎、心、肝、肾等实质器官炎症为特征,致病性强,死亡率高,是目前危害养鹅业的主要疾病之一。本研究对GPV疫苗株SYG61和流行株P.1的VP3基因进行了克隆测序及序列比较分析,进而对两者的部分生物学特性进行了比较研究,并应用杆状病毒表达系统对GPV疫苗株SYG61的VP3基因进行了表达；利用GPVSYG61免疫BalB/c小鼠,制备了2株抗GPV的单克隆抗体,为GPV的检测和防治提供了优良的生物学材料。1.小鹅瘟病毒VP3基因的克隆与表达本研究对GPV疫苗株SYG61和流行株P.1的VP3基因进行克隆测序及序列比较分析,测序结果表明,两株不同GPV毒株的VP3基因核苷酸序列长均为1605bp,编码534个氨基酸。序列对比结果显示,两株不同GPV毒株的VP3基因核苷酸同源性为95.8%,氨基酸同源性为98.1%。与GenBank上发表的国内外其他GPV毒株的核苷酸同源性为93.6%-99.9%,氨基酸同源性为96.3%-99.8%。虽然GPV疫苗株SYG61和流行株P.1的VP3基因同源性较高,但从进化树分析来看,仍表现出一定的地区差异性。ELD50和LD50的测定结果为GPV P.1株对鹅胚的半数致死量(ELD50)为10-5.29/0.2mL,对雏鹅的半数致死量(LD50)为10-2.33/0.2mL; GPV SYG61株对鹅胚的半数致死量(ELD50)为10-60/0.2mL对雏鹅的半数致死量(LD50)为10-3.45/0.2mL。表明两株GPV毒株毒力、致病力没有明显差异。利用雏鹅制备的抗GPV SYG61株和P.1株的免疫血清,通过鹅胚中和试验测定了两株不同GPV株抗血清的PD50,并通过血清交叉保护试验对两株不同GPV株的抗原性进行比较,经过计算后得出两者抗原性相关系数R为85.41%,表明这两株GPV毒株之间存在血清交叉反应,且抗原性交叉较大,属于同一血清型。应用Bac-to-Bac系统对GPV毒株SYG61VP3基因进行了表达。首先利用BamHI和Xhol双酶切将VP3基因片段从pGEM-T-VP3重组载体中切下,连接至杆状病毒转移载体pFastBac1中,获得重组转移质粒pFastBac1-VP3,并转座含有杆状病毒穿梭质粒的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,筛选出重组穿梭质粒rBacmid-VP3,转染Sf9昆虫细胞,获得了重组杆状病毒rBac-VP3。根据杆状病毒载体序列,经过PCR鉴定,证实基因片段VP3已经重组到杆状病毒基因组中；用抗GPV多抗血清进行间接免疫荧光检测,结果出现亮绿色荧光,证明VP3基因获到了良好表达。2.抗GPV单克隆抗体的制备与鉴定本研究利用GPV SYG61作为抗原免疫BalB/c小鼠。免疫三次后取其脾细胞与SP2/0细胞进行融合,通过间接免疫荧光检测杂交瘤细胞上清,筛选获得了2株抗GPV的单克隆抗体,分别命名为GPV-Mab-2C5, GPV-Mab-4G9。亚类鉴定结果表明,2株单抗均为IgM亚类。2C5单抗腹水和细胞上清的IFA效价分别为1：0,4G9单抗腹水和细胞上清的IFA效价分别为1：256和1：64。琼脂扩散试验证明2株单抗腹水都能与浓缩的小鹅瘟抗原产生明显的沉淀线。并且均能与杆状病毒表达系统表达的GPV VP3蛋白反应,产生特异性的亮绿色荧光。本研究所获得的两株单抗为小鹅瘟抗原诊断方法的建立奠定了基础。
Goose parvovirus infection known as gosling plague is caused by goose parvovirus (GPV). It is an acute, highly contagious and septic infectious diseases that is susceptible to less than30days old goslings and Muscovy Duck. It is characterized by the substance of the exudative enteritis, liver, kidney, heart and other organs inflammation. Gosling plague that has strong pathogenicity and high mortality is one of the major diseases that endanger the goose industry. In this study, we cloned and sequenced VP3gene of the GPV vaccine strain SYG61and field strain P.I, and analyzed the sequences. We compared some biological characteristics of the two GPV strains. VP3capsid protein of GPV vaccine strain SYG61was expressed by a baculovirus expression system. After that two monoclonal antibodies against GPV were developed by cell fusion between sp2/0cells and spleen cells from BalB/c mice immunized with GPV SYG61. This study provides good reagents for further detection and prevention of gosling plague.1. Cloning and expression of goose parvovirus VP3gene.In this study, we cloned and sequenced VP3gene of the GPV vaccine strain SYG61and field strain P.1, respectively.The result showed that both of the VP3genes from two different GPV strains contain1605bp which encode534amino acids. Nucleotide and Amino acid sequences homology of VP3gene were95.8%and98.1%between GPV SYG61and GPV P.1strain. When compared with the other GPV stains published in GenBank, the nucleotide and amino acid homology of VP3sequences were93.6%-99.9%and96.3%～99.8%. In order to study and compare biological characteristics of the two different GPV strains SYG61and P.1, we detected ELD50and LD50respectively. The ELD50and LD50of GPV P.1were10-5.29/0.2mL and10-2.33/0.2mL. The ELD50and LD50of GPV SYG61were10-6.0/0.2mL and10-3.45/0.2mL. The results showed that the virulence of GPV SYG61strain was slightly stronger than GPV P.1strain. At the same time, we prepared two kinds of antiserum by gosling immunization with GPV SYG61and GPV P.1, respectively. PD50of the two kinds of antiserum was tested by goose embryo neutralization. The results showed that the antigenicity of correlation coefficient R is85.41%, which indicated that the two different GPV strains belonged to the same serotype. In order to express the VP3capsid protein by Bac-to-Bac expression system, VP3fragment was digested from the recombinant plasmid pGEM-T-VP3by BamHI and XhoI enzymes and cloned into the baculovirus transfer vector pFastBac1. Then pFastBac1was recombined with the baculovirus shuttle vector Bacmid by transforming DHlOBac competent cells. The positive recombinant was transfected into Sf9cell and the recombinant baculovirus was obtained, named rBac-VP3. PCR analysis showed that VP3gene had been inserted into Bacmid. The VP3protein expression in rBacmid-VP3was found in indirect fluorescent assay (IFA) with polyclonal antibody against GPV,2. Development and identification of monoclonal antibodies against GPVBalB/c mice were immunized with GPV SYG61goose embryo allantoic fluid. After boost three times the spleen cells of immunized mice were fused with SP2/0myeloma cells. Hybridoma cells were screened by indirect fluorescent assay (IFA). Two positive monoclonal antibodies were obtained, named as GPV-Mab-2C5and GPV-Mab-4G9. The immunoglobulin subtypes of monoclonal antibodies were identified with a commercial capture-ELISA kit. The results showed that both of the two monoclonal antibodies belonged to IgM subgroup. The ascite titer of GPV-Mab-2C5monoclonal antibody was1:3200and its cell supernatant titer was1:256. The ascite and cell supernatant titers of GPV-Mab-4G9monoclonal antibody were1:800and1:64respectively. The results of agar preciptation test showed that the two monoclonal antibody ascites could react with gosling plague antigen to produce significant precipitiation line. The two monoclonal antibodies also could recognize VP3protein expression in rBacmid-VP3systerm, in which specific bright green fl
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本类论文推荐抗体芯片技术应用于慢性肾病研究的进展_图文_百度文库
抗体芯片技术应用于慢性肾病研究的进展
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ｊ蝎露窿释．
抗体芯片技术应用于慢性肾病研究的进展
张翠薇△（综述），马跃荣※（审校）
（泸州医学院，四川泸州６４６０００）
中图分类号：Ｐ，３６５
文献标识码：Ａ
文章编号：１００６－２０８４（２０ｉ０）１４－２１５６－０４
摘要：抗体芯片作为蛋白质芯片的一种，具有微型化、集成化、高通量化的特点，可以用于检测某一特定的生理或病理过程相关蛋白的表达丰度，目前主要用于信号转导、基础蛋白质组学研究、肿瘤及其他疾病相关分子的发现、诊断和治疗。在慢性肾病的进程中，复杂的细胞因子网络共同参与了肾闻质纤维化的发生、发展，用抗体芯片来鉴定肾组织中的异常表达蛋白，进而进行慢性肾病的早期诊断和治疗监测有较大的Ｉ临床价值。
关键词：抗体芯片；慢性肾病；肾间质纤维化
ｏｆＡｎｔｉｂｏｄｙＣｈｉｐＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＵｓｅｄｉｎＣｈｒｏｎｉｃＫｉｄｎｅｙＤｉｓｅａｓｅＺＨＡＮＧＣｕｉ－ｗｅｉ，ＭＡＹｕｅ—
ｔｏｎｇ．（ＬｕｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｌｕｚｈｏｕ６４６０００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｓａｋｉｎｄｏｆｐｒｏｔｅｉｎｃｈｉｐｓ。ａｎｔｉｂｏｄｙｍｉｅｒｏａｒｒａｙｈａｓｔｈｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｗｉｔｈｍｉｎｉａｔｕｒｉｚｅｄ，ｉｎｔｏ－
Ｒｅｓｅａｒｃｈ
量、平行性分析研究而产生的，为满足蛋白组学研究的需要在基因芯片的基础上发展起来的生物芯片家族的新成员¨Ｊ。广义上的蛋白芯片包括表达谱蛋白芯片、多肽芯片和抗体芯片等，其中抗体芯片因为技术要求相对较低，成本相对低廉而受到青睬。抗体芯片上固定的是特异性抗体，可以将能与不同抗原特异性结合的多种抗
ｇｒａｔｅｄ。ａｎｄｈｉｇｈ—ｐａｓｓｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ，ｗｈｉｃｈｃａｎｂｅｕｓｅｄｐｒｏｃｅｓｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎａｂｕｎｄａｎｃｅ．Ａｔ
ｐｒｅｓｅｎｔ，ｉｔ
ｄｅｔｅｃｔｔｈｅｐａｒｔｉｃｕｌａｒｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｏｒｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ
ｈａｓｂｅｅｎｍａｉｎｌｙｕｓｅｄｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，ｄｉａｇｍｏ－
ａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｆｏｒｄｉｓｅａｓｅ—ｒｅｌａｔｅｄｍｏｌｅｃｕｌｅｉｎｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ．ｂａｓｉｃｐｒｏｔｅｏｍｉｅｓｒｅｓｅａｒｃｈ，ｃａｎｃｅｒａｎｄｏｔｈｅｒｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｃｏｍｐｌｅｘｄｉｓｅａｓｅ．ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｎｅｔｗｏｒｋｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃｐｒｏｃｅｓｓｅｓｏｆｃｈｍｎｌｃｋｉｄｎｅｙｄｉｓｅａｓｅ．Ｃｈｉｐｗｉｔｈａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙｔｈｅａｂｎｏｒｍａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｒｅｎａｌｔｉｓｓｕｅｐｒｏｔｅｉｎ．ａｎｄｔｌｌｅｎ
ｔｈｅｅａｒｌｙｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｃｈｒｏｎｉｃｋｉｄｎｅｙｄｉｓｅａｓｅａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇｏｆａｇ［－ｅａｔｅｒｅｌｉｎｉｃａｌｖａｌｕｅ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ａｎｔｉｂｏｄｙｍｉｃｒｏａｒｒａｙ：Ｃｈｒｏｎｉｃｋｉｄｎｅｙｄｉｓｅａｓｅ；Ｒｅｎａｌｉｎｔｅｒｓｔｉｆｉａｌｆｉｂｒｏｓｉｓ
慢性肾病是由各种肾脏损害因素引起的肾脏结构的进行性损毁和肾功能的进行性恶化，由肾功能体高密度地固定到载体上，使待测样品通过芯片表面，经过洗脱把非特异性结合的蛋白洗掉，通过特异性免疫反应捕获待测样品中的抗原，从而实现高通
量免疫检测。利用这种技术可以定量检测蛋白一蛋白、蛋白－ＤＮＡ、蛋白－ＲＮＡ以及蛋白．配体之间的相互
不全逐渐发展为肾衰竭、尿毒症，并不可避免地进展
成为终末期肾病，是严重影响人类健康和生存质量的常见病。慢性肾病的实质是肾脏纤维化，是由于肾间质炎性细胞浸润，成纤维细胞增殖、转化，基质蛋白合成增多、基质降解受抑制造成细胞外基质大量堆积导致的。肾小球硬化和小管问质纤维化。可见，炎性反应是肾问质纤维化（ｒｅｎａｌ
ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｆｉｂｒｏ－
作用雎］。抗体芯片的优点主要有：①由于抗原与抗
体阵列芯片探针结合的特异性高、亲和力强，可简化
样品的前处理，实用性强；②检测范围广，可达
５—２５００００
ｎｇ／Ｌ；③能够快速高通量定量分析大量
ｓｉｓ，ＲＩＦ）的启动因素，炎性细胞间质浸润并激活趋化因子是ＲＩＦ的关键环节。因此，研究细胞因子的地位和作用对慢性肾病的发生、发展、迁延和转归有重要的意义。近年来，抗体蛋白芯片的问世为同步、高通量检测细胞因子水平的变化提供了技术可行性。现就影响慢性肾病发展的相关蛋白和细胞因子，以及抗体芯片技术在慢性肾病研究中的应用前景综述如下。
１抗体芯片技术及其应用
抗体芯片，又称为抗体微阵列，是蛋白质芯片的一种，是指将抗体、抗原或受体等结合在固相载体表
的蛋白样品，平行性完成样品的检测；④操作相对简
单，在同一系统中集分离、纯化、鉴定和检测为一体，
从而使整个过程变得简单易行，结果正确率也较高；⑤相对于传统的酶联免疫吸附试验分析，芯片采用
光敏染料标记，敏感度更高、准确性更好；⑥所需试剂和样品量少。抗体芯片是微型化、集成化、高通量化的研究蛋白表达的一个非常好的工具ｐ－。
抗体芯片技术是从整体的角度定性和定量检测生物样品中蛋白质分子的重要平台，因此被广泛应用于疾病相关分子的发现、疾病的分子诊断和治疗、新药开发及基础蛋白组学的研究等领域。蛋白芯片还可联合检测多种肿瘤标志物，得到了广泛的临床应用ＭＪ。除此之外，抗体蛋白芯片还在常规自身抗体检测和血液病、肝炎、慢性肾病、自身免疫性等疾病的诊断方面得到越来越广泛的运用垆Ｊ。在基础研究方面，抗体芯片被广泛用于基础蛋白组学分析、胞
面，利用微电子技术使其成为捕获抗原或抗体、配体
等特异生物分子的微阵列。抗体微阵列作为一种特
殊的蛋白质芯片，是为满足人们对蛋白质的大信息
基金项目：四川省卫生厅科研课题（０８０１６２）
贡献者：反冲力57
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