ELISA实验设置阴性、阳性和空白对照的作用_ELISA_中生网
&>&&>&&>&ELISA实验设置阴性、阳性和空白对照的作用
一．ELISA试验有效性与三项对照 什么是“有效性”（Validity）？要获得准确的检测结果“有效性”评价，就会关系到：为什么要设置“阴性、阳性和空白”等不可缺少的三项对照？要用什么样的物质担当“阴性、阳性和空白对照（品）”？这“三项对照”如何设置、需要设置几个孔位？获得的测定值如何“认可、取舍与计算”？随后，又如何依照阳性对照均值（PCx）与阴性对照均值（NCx）的差值（P-N，或N-P）大小做出“试验结果有效性”的最终裁决呢？…等等，这一连串的问题，在国外“正规”品牌的ELISA试剂《使用说明书》中都有明细和详尽的说明。既有理论要点提示，又有具体细致的举例解说。很可惜，在90年前后，国内兴起ELISA检测热潮之际，在一片“国外试剂说明书太详细、太复杂、不容易看明白、…”等等“一片埋冤”声中，正好迎合国内商家的“意愿”。从此以后，国产ELISA试剂的说明书，越来越简单。这其中商家就有两个“好处”：好处之一，用A4、或B5，甚至比B5还要小的一张纸，代替国际试剂的好几页的“使用说明书”（等同于一份“操作手册”），每年就可节省一大笔印刷成本费；好处之二，如同国际试剂说明书上向用户交待的各种表明本试剂质量有关的详尽内容，国产试剂的所谓“说明书”上统统可以“删除、回避、拒绝”向用户通报和承诺。我90年前后收集的&美&雅培、&法&巴斯德、&荷&阿克苏等相关试剂的原文说明书，几经搬动全都处理，很是可惜。近日，杭州检疫局朋友送了一份生物梅里埃中国有限公司的中文版《人类免疫缺陷病毒抗原抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）使用说明书》。对照阅读之下，深深感到这才是一份真正意义上的《使用说明书》呀！在我下文提到的若干“概念、问题”，从中都可以找到答案。我现在参照我本人1993年的《肝炎ELISA试剂质量与检测结果有效性评价》会议讲稿相关内容，就“三项对照与检测结果有效性”表示如下认识和讨论。 二．三项对照要求与用途 ELISA检测，按照试剂说明书要求，每次试验、每块扳上都要设置以下3项对照和用途：&& 1．空白对照：仅用稀释液代替检测样本、用以观测最终反应的显色“本底”、并用于酶标仪消除、扣除“本底”，即：以本底为“零”读取阳性、阴性对照孔和样本检测孔的吸光值（A）；或者，在计算阴性对照均值（NCx）、阳性对照均值（PCx）、样本读数的S/C.O.值时减去空白对照的本底吸光值。早年的酶标仪无自动扣除空白对照孔读数功能，这种酶标议现已淘汰不用了，写上这段话的意思是补充说明设置空白对照的用途。空白孔具体如何读取读数，则依照说明书操作。例如，生物梅里埃中国有限公司的中文版《人类免疫缺陷病毒抗原抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）使用说明书》上提示：以空气读空白（不放板架和板条），在450nm（单波长）、或450nm和620―700mn（底物是TMB）参考波长进行读数。& 2．阴性对照（品）：& （1）阴性对照（品）的概念与要求：所谓阴性对照（品），应当是本项检测试验中采用与待捡物（样品、人用试剂就是人的血清等）具有同源性和同质性，又不含有待检物质，并能客观比较和鉴别处理因素（血清免疫学试验中有特异性抗原与抗体反应）之间的差异。因此，用动物血清或其制品（如牛血清白蛋白等）代替阴性人血清作为对照品，从理论和实践上都是不可取的，弊端甚多，无须细述。注意：据我所知，国产ELISA试剂中，有的厂牌是用动物血清制品稀释配置、或与部分人血清混合配置的；其二，阴性对照读数，并非是“越低越好”。NCx值接近0.00X水平，这是假象！试想一下，真正采用“阴性人血清”的阴性对照品，NCx值会如此之低吗？举个例子，雅培乙肝六项EIA试剂的NCx值，分别为：0.010（HBsAg）、0.027（抗―HBs）、0.035（HBeAg）、1.083（抗―HBe）、1.065（抗―HBc）、0.045（抗HBc-IgM）。生物梅里埃的HIV试剂NCx是0.091。辨别试剂NCx值是否合理的一个很简单的方法，只要对比大量阴性样本的实际读数就“一目了然”啦！& 一个题外插曲：表明ELISA试剂内在质量的一个重要统计标志，就是要看：阴性样本的的上限不应当大于、必须小于C.O.I.=1.00；反之，阳性样本的的下限不可小于、应当大于C.O.I.=1.00！早年我用SPSS软件输出阿克苏HIV和国产甲、乙试剂检测600例左右的健康人体检血清的三幅直方图，可以表明阴性样本的不同分布特征，颇有意思。&&& 我为什么要如此细说NCx呢？因为NCx值在Cut&off值计算中是相当举足轻重的（详后）。&（2）阴性对照（品）分为两类& 一是代表受检人血清中并不含有、或方法学灵敏度未能检出的待检物的基准水平，并且是结果判断值（Cut&off）计算式中决定“是”（阳性）、或“否”（阴性）的唯一可变值。阴性对照值高，导致假阴性；反之，导致假阳性。如：HBsAg、HBeAg、抗―HBc等。二是阴性对照设置，在方法学上要求加入指示性定量标准品，如中和剂HBeAg，定量HBcAg等，用以检测抗―HBe、抗―HBc。或者，选取代表平均水平的正常人血清用作阴性对照，如检测抗―HBc&IgM。此类Cut&off&值计算时，多数均包括阴性和阳性对照值2个可变值。&&&&&&&&&&&&&&&& 3．阳性对照（品）：& （1）阳性对照（品）的概念与要求：同阴性对照（品），只是采用“精选”的含有待检物质的人血清制备而成。所谓“精选”，就是把收集的阳性人血清经过数种试验进行“筛试”、把含有“干扰性物质”的血清剔除、不用，以避免出现“假阳性”干扰试验结果。&& （2）阳性对照（品）设置，也可区分为两种类型与用途：& 一是阳性对照主要用于评价该项试验结果是否有效和试验结果的稳定性与可比性。而所设的阳性对照的测量值不列入Cut&off值计算、但是不可不做。如HBsAg、抗―HBs、HBeAg等。& 二是阳性对照的设置，不仅用于评价试验结果是否有效和试验结果的稳定性与可比性，而且计入Cut&off的计算。此时的Cut&off值的含义是代表该标志物在健康（正常）人群中正常值范围的上限。待检样本检测值超过该上限（Cut&off）时表示有诊断意义。例如抗―HBe、抗―HBc、抗―HBc&IgM等。
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Copyright& All Rights Reserved.&&酶标仪未设置空白对照如何解决(空白对照,酶标仪,单波)
01:12:51&&&来源：&&&评论：&&
[酶标仪未设置空白对照如何解决(空白对照,酶标仪,单波)] 酶标仪检测平板od时，未设置空白对照bl，是在单波长测量下。请问得出的数据能否继续使用？菜鸟刚开始做实验。。。各位达人请指点下啊，谢谢！ 关键词:[空白对照 酶标仪 单波]…
检测平板od时，未设置空白对照bl，是在单波长测量下。请问得出的数据能否继续使用？菜鸟刚开始做实验。。。各位达人请指点下啊，谢谢！
回复试验中有对照孔，只是设置参数时没有设置空白。对照孔设置了3个，用测得的数据将去这3个对照孔的平均值可以吗？回复自己把所有数据都减去那个空白孔的OD值就可以了回复测定时，为了提高准确性最好设定参考波长，即双波长检测。回复你那所谓的对照是什么对照？空白对照还是阴性对照？回复你那所谓的对照是什么对照？空白对照还是阴性对照？空白对照。现在清楚了，用所得的OD值都减去这个空白OD。
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下列有关生物实验设计的叙述正确的是下列有关实验设计的叙述正确的是A．实验的材料数量、温度和时间都可能是实验的变量B．各种实验都必须设置空白对照组,确保单一变量C．数据测量应力求精确,因而需要多
下列有关实验设计的叙述正确的是A．实验的材料数量、温度和时间都可能是实验的变量B．各种实验都必须设置空白对照组,确保单一变量C．数据测量应力求精确,因而需要多次测量求平均值D．探究实验设计中,实验结果总是与提出的假设一致请说明理由
A实验变量是指在实验中会发生变化的相关量B 错误原因空白对照组不是用来确保单一变量的,而是为了对照用的在你的实验组中往往会添加一些化学物质或者某些物质比如无机盐会过量添加,或者是一些特殊的环境比如高温、缺水、高pH值等等,来进行实验,而空白组则是在常态下,也就是一般反应所需的正常物质成分以及环境条件下进行的反应组所谓的对照就是某些物质的添加与否或者过量与否以及某种特殊环境对实验对象所造成的影响需要设立空白对照组的实验往往是添加外部条件的实验C平均值本身的作用就是可以减少实验误差每个生物个体都是有差别的,所以在数据测量是如果只取定一个值必然是存在相当大的误差的,多次测量求平均值就可以减少误差的存在D错误原因所谓的探究性实验设计是指对未知的结论进行探求所以说提出的假设只是一种愿望,而实验结果并不一定符合这种假设或者说人为的愿望.探究的目的就是为了验证这种假设与真正的实验结果是否一致,从而进行进一步的探讨和研究
您可能关注的推广回答者：关于ABC免疫酶染色法实验过程中的阳性对照、阴性对照、空白对照、和抑制试验如何设置的问题(染色法,空白对照,阴性对照,阳性对照)
10:20:11&&&来源：&&&评论：&&
[关于ABC免疫酶染色法实验过程中的阳性对照、阴性对照、空白对照、和抑制试验如何设置的问题(染色法,空白对照,阴性对照,阳性对照)] 下面这个实验中的阳性对照、阴性对照、空白对照和抑制试验如何设置啊？急急！！ABC免疫酶染色法　　ABC法是ABC免疫酶染色法的简称,又称卵白素-生物素-酶复合物染色法，是目前最敏感的免疫细胞化学染色法之一。其基本原理是将特异性一抗与组织细胞相应抗原结合后，通过生物素花桥与一抗结合，借助卵白素与生物素的天然亲和性将生物素化辣根过氧化物酶链接为复合物，通过酶促反应，显示组织细胞相应的抗原。 使用的主要 关键词:[染色法 空白对照 阳性对照 阴性对照 免疫 盖片 小鼠]…
下面这个实验中的阳性对照、阴性对照、空白对照和抑制试验如何设置啊？急急！！ABC免疫酶染色法　　ABC法是ABC免疫酶染色法的简称,又称卵白素-生物素-酶复合物染色法，是目前最敏感的免疫细胞化学染色法之一。其基本原理是将特异性一抗与组织细胞相应抗原结合后，通过生物素花桥与一抗结合，借助卵白素与生物素的天然亲和性将生物素化辣根过氧化物酶链接为复合物，通过酶促反应，显示组织细胞相应的抗原。 使用的主要材料　　使用的主要材料：PBS；T-ris-HCl缓冲液；底物溶液；ABC盒；小鼠（兔）特异性抗体；盖片染色缸。湿盒，显微镜等。 染色的基本步骤　　染色的基本步骤：
　　1：细胞准备。将7mm x 22mm盖片置于培养瓶中，加入对数生长期细胞悬液于培养瓶中，待细胞长成单层，取出盖片，用PBS洗2次；悬浮生长的细胞离心后用PBS离心洗涤2次，制成细胞涂片。
　　2：细胞固定。用醋酸/甲醇或95%酒精固定20-30min。
　　3：取已固定的细胞盖片，用PBS洗5min，浸入37℃的0.75%H2O2-PBS中3min，以阻断内源性过氧化物酶。
　　4：PBS振洗2次，每次3min。
　　5：滴加正常马血清，在湿盒内，37℃保温30min，以消除非特异性染色。
　　6：弃去正常马血清，滴加小鼠特异性抗体，在湿盒呢37℃保温30-60min或4℃过夜。
　　7：PBS振洗2次，每次3min。滴加生物素化马抗小鼠IgG,在湿盒内37℃ 30min。
　　8：PBS振洗3次，每次3min，滴加ABC，在在湿盒内37℃ 30min.
　　9：PBS振洗2次，THB振洗1次，每次3min，浸入新鲜配制的底物溶液，在室温下置暗处10-20min。
　　10：自来水洗5min
　　11：细胞核染色。浸入苏木精染液染色2min，自来水洗，迅速过盐酸酒精溶液，自来水洗，过氨水溶液，自来水洗。
　　12：逐级脱水。过70%酒精1次，95%酒精2次，无水乙醇3次，每次1min。
　　13：透明，过二甲苯溶液3次，每次1min。
　　14：将有细胞的面向下，用中性树脂封片。
　　此种染色方法应设置阳性对照、阴性对照、空白对照及抑制试验，以排除非特异性染色。要控制显色反应时间，以阳性反应着色最强，而有的是刚开始着色为佳。滴加的量要适当，防止液体干涸。空白对照用PBS做一抗。抑制试验是将待检标本与未标记特异性反应后，再用自己标记的特异性抗体进行染色，结果阳性强度减弱或转为阴性。
　　此法染色结果在光镜下观察，阳性部分呈棕褐色。
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& 实验与探究知识点 & “（9分）下列关于“探究生长素类似物促进插...”习题详情
270位同学学习过此题，做题成功率73.7%
（9分）下列关于“探究生长素类似物促进插条生根的最适浓度”的实验：（1）该实验的自变量是&&&&,观测指标一般是&&&&。（2）实验中用生长素类似物处理插条的方法可选用&&&&或&&&&（3）在制定实验方案过程中，下列哪一项可以不考虑&&&&A．严格控制无关变量&&&&&&&&B．配置一系列浓度梯度C．两个人为一组&&&&&&&&&&&&D．查资料或预实验，确定浓度范围（4）有关操作合理的是&&&&A．处理扦插枝条最好在强光下进行B．先设计一组生长素类似物浓度梯度比较小的预实验进行探究C．不设置用蒸馏水处理扦插枝条的对照组D．选择的枝条，大小和芽的数量一致（5）请设计一个表格,记录探究2，4-D促进月季插条生根最适浓度的实验结果。&
本题难度：一般
题型：解答题&|&来源：2012-福建省莆田一中高一下学期期末考试生物试题
分析与解答
习题“（9分）下列关于“探究生长素类似物促进插条生根的最适浓度”的实验：（1）该实验的自变量是____,观测指标一般是____。（2）实验中用生长素类似物处理插条的方法可选用____或____（3）在制定实验方案过程...”的分析与解答如下所示：
该实验探究的问题是促进某种植物插条生根的生长素类似物的最适浓度；该实验的自变量是生长素类似物的浓度，无关变量(如枝条长度、生长素类似物处理的时间等)应控制为等量；实验前做一个预实验，目的是为正式实验摸索条件，减少实验误差。不同浓度的吲哚乙酸处理扦插枝条的时间应相同。本实验如果不设用蒸馏水处理扦插枝条的对照组，就不知道某一浓度是促进还是抑制。使扦插枝条产生相同根数的吲哚乙酸浓度有两个，一个低于最适浓度，一个高于最适浓度。
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（9分）下列关于“探究生长素类似物促进插条生根的最适浓度”的实验：（1）该实验的自变量是____,观测指标一般是____。（2）实验中用生长素类似物处理插条的方法可选用____或____（3）在制定实...
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等考点的理解。
因为篇幅有限，只列出部分考点，详细请访问。
实验与探究
与“（9分）下列关于“探究生长素类似物促进插条生根的最适浓度”的实验：（1）该实验的自变量是____,观测指标一般是____。（2）实验中用生长素类似物处理插条的方法可选用____或____（3）在制定实验方案过程...”相似的题目：
下列是有关显微镜使用的叙述，前一项是操作，后一项是目的，其中正确的是转动转换器——换用不同放大倍数的目镜调节细准焦螺旋——调节放大倍数调节光圈——调节视野的大小调节反光镜——调节视野的亮度
下列各项中，依次为实验试剂、作用或实验结果，其中不正确的是吡罗红,把RNA染成红色，观察RNA的分布健那绿，活细胞染料，把线粒体染成蓝绿色重铬酸钾溶液，检验CO2，溶液由蓝→绿→黄醋酸洋红，使染色体着色，观察有丝分裂中染色体行为
下列为减少实验误差而采取的措施，错误的是&&&&选项实验内容减少实验误差采取的措施A对培养液中酵母菌数量进行计数多次计数取平均值B探索2，4—D促进插条生根的最适浓度预实验确定浓度范围C调查人群中红绿色盲发病率调查足够大的群体，随机取样并统计D比较有丝分裂细胞周期不同时期的时间长短观察多个装片、多个视野的细胞并统计&
“（9分）下列关于“探究生长素类似物促进插...”的最新评论
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