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黄曲霉毒素检测方法研究进展
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黄曲霉毒素B1具有致畸作用，给妊娠地鼠黄曲霉毒素B可引起胎鼠发生畸变，畸形包括无脑、小脑子、神经管颅端畸形、心脏异位、唇袭及脐疝等。
我国食品卫生标准中规定了几种主要易受污染的食物...黄曲霉毒素B1具有致畸作用的相关内容日期：龋齿具有遗传倾向 龋齿是否具有遗传性的问题，不少口腔专家作了大量的研究。在动物实验中，成功培育出了对龋敏感和龋免疫的鼠种。在对人类的研究中，通过观察家族性、双生子龋患情况，得出了结论：在同一家族中，父母和子女的龋齿发病情况有显著关系。若父母的龋齿多，其子日期：60年代反应停药物致畸的原因 发生在20世纪60年代的“反应停”事件，是一个典型的药物导致胎儿畸形的例子。 当时一家西德药厂生产了一种治疗早期妊娠反应的新药，有很好的止吐作用。许多有呕吐反应的早期妊娠妇女，服用此药后，可迅速把妊娠反应性呕吐停住，因而取名为“反应日期：优质奶粉具有5个条件 近来，劣质奶粉事件弄得许多父母惊恐万分。那么一款优质奶粉必须具备哪些条件呢？ 1、成分 除营养均衡外，应针对宝宝需求作机能性选择，对于奶粉中所添加的特殊配方，也应有临床实验证明或报告...日期：优质奶粉具有5个条件 近来，劣质奶粉事件弄得许多父母惊恐万分。那么一款优质奶粉必须具备哪些条件呢？ 1、成分 除营养均衡外，应针对宝宝需求作机能性选择，对于奶粉中所添加的特殊配方，也应有临床实验证明或报告。 2、品牌 挑选奶粉时应首先考虑较大的生产厂家生产的，尤日期：霉菌毒素是怎样污染食品的？ 霉菌毒素是怎样污染食品的？ 霉菌也叫真菌，广泛存在于各类食品中。当水分、温度合适时，霉菌就可以生长繁殖，引起食物的霉变。有一些霉菌还可以产生一些对人有毒害的化合物，这些化合物就称为霉菌毒素。容易产生毒素的食品主要是含碳水化合物较日期：酱油、黄酱中有黄曲霉毒素吗？ 酱油、黄酱中有黄曲霉毒素吗？ 酱油、黄酱都是将大豆（或豆饼）、小麦原料经天然或人工发酵后制成的发酵食品，是我国特有的一种调味品，已有悠久的历史。利用人工接种或自然界存在的黄曲霉的作用，原料中的蛋白质被分解为氨基酸，而使酱油和酱日期：黄曲霉毒素污染食品后对人体有何危害 黄曲霉毒素污染食品后对人体有何危害？ 黄曲霉毒素的毒性极强，比氰化钾还毒，可与眼镜蛇毒性相当。急性中毒主要是侵犯肝脏，引起肝脏坏死。１９７４年印度有２００个村庄暴发因食用霉玉米而引起的黄...
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　- - - - - - - -黄曲霉毒素M1 -
黄曲霉素黄曲霉毒素M1&(Aflatoxin&M1，缩写AFM1)属于一类结构相似的中的一种，该类毒素是由常见的黄曲霉菌(Asperillus&Flavus)&和寄生曲霉菌(Asperillus&Parasiticus)&产生的代谢产物，在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率最高。AFM1是黄曲霉毒素B1的代谢物，其基本结构为一个二呋喃环的。溶于多种有机溶剂，如氯仿、、甲醇和水，但不溶于、、等非极性溶剂中，物理化学性质相当稳定，不被巴氏消毒破坏。其中黄曲霉毒素B1是最主要的一种毒素，哺乳类动物摄入被黄曲霉毒素B1污染的饲料或食品后，在体内的肝微粒体单氧化酶系催化下，通过细胞色素P-448调节作用，AFB1末端呋喃环C-10被羟化而生成AFM1。AFM1&也可由一些黄曲霉菌和寄生曲霉直接产生，但与其他毒素(如B1&、B2&、G1&、G2&)&相比，比例相当低。黄曲霉毒素是一种强烈的，而且是等菌类的高毒代物。大多数政府机构都对人体和动物可摄入的黄曲霉毒素量有严格的法规限制。很多国家已经对牛奶和乳制品中的黄曲霉毒素M1含量有了明确的限量标准。 黄曲霉毒素1993年被世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构划定为1类致癌物。
黄曲霉毒素M1 -
黄曲霉毒素M1 的结构式分子式为C17H12O7，MW：328，熔点299&℃，形状为长方形片状，无色结晶。在365nm&的紫外光下产生蓝紫色荧光。
黄曲霉毒素M1 -
谷物类：例如霉变的大米、面粉、瓜干、玉米等霉变谷类中。一般多存在于含有油脂的干果中，如花生、果仁等。还有霉变饲料中。&
黄曲霉毒素M1 -
AFB1转化成AFM1的反应式AFM1毒性主要表现在致癌性和致突变性，对人及动物肝脏组织有破坏作用，严重时，可导致甚至死亡。
生理学致癌机制的研究表明：AFM1的远端呋喃环结构与体内DNA嘌呤残基共价结合，从而造成DNA的某些损伤，引起DNA结构和功能的改变，产生癌变，与黄曲霉毒素B1的致癌性基本相似，但毒性低于黄曲霉毒素B1，然而与和相比，仍属特别剧毒物质，为强致癌剂。 流行病学研究结果表明：肝癌高发区的发病率与AFB1的摄入以及转化为尿中的AFM1的转化率有密切关系，但随着饮食结构的调整，人体直接摄入AFB1的机会越来越少，而动物乳中AFM1的存在对人类的危害变得至关重要。由于相当稳定，也无法将其杀灭，所以检测黄曲霉毒素M1不仅要在饲料原料中检测，而且在最终产品中也需要进行鉴定。乳业专家王丁棉 表示，牛奶中的来源于奶牛的饲料中，即使超量一点点，随着人在食物中的摄入，慢慢在人体积累也会致癌。
黄曲霉毒素M1 -
在欧盟，牛奶和奶粉中的黄曲霉毒素M1含量被限制在0.05&mg/L&或50ppt。在中国，黄曲霉毒素M1国家规定的最高值为0.5μg/kg。 国家地区&牛奶中黄曲霉毒素M1含量规范&&&欧盟（比利时、瑞士、瑞典） &低于0.05毫克/吨&亚洲、美洲（中国、日本、巴西、墨西哥、美国） &低于0.5毫克/吨&
黄曲霉毒素M1 -
自1963年Allcroft发现牛奶中含有AFM1以来，对AFM1的检测方法各国科学家做了大量的研究，取得了很大的进展，现分类介绍如下：薄层色谱法(TLC)原理：样品经提取、浓缩、薄层分离后，AFM1在波长365nm的紫外光下产生蓝紫色荧光，根据其在薄层板上显示荧光的最低检出量与标准溶液的荧光强度相比较来测定含量。
高效液相色谱法(HPLC)检测试剂AOAC&International1986年首次通过了乳液中的AFM1及AFM2采用高效液相色谱法作为公认定检测方法。原理：用C18柱抽提纯化样品中的AFM1，对C18柱洗涤，再用CH2Cl2-乙醇洗脱AFM1，然后加入(TFA)对AFM1进行衍生化处理，利用液相色谱荧光检测器检测，并与标准AFM1-&TFA的衍生物比较，进行定性、定量分析。免疫亲和柱法原理：试样经过离心、脱脂、过滤后，滤液经过键合有AFM1特异性单克隆抗体的免疫亲和柱净化，AFM1被柱吸附，先用某一溶剂洗涤杂质，再用洗脱液将AFM1洗下，得到较纯的AFM1洗脱液，最后结合荧光光度计或高效液相色谱仪进行AFM1含量的测定。酶联免疫吸附法(ELISA)原理：该方法结合了抗原抗体的特异性免疫反应和酶的高效催化显色反应。首先将抗AFM1抗体包被于固相的微孔上，加入作为抗原的AFM1标准品或含AFM1的样品，同时加入AFM1酶结合物，与抗体进行免疫竞争反应，然后加入酶基质：显色剂进行显色，通过标准品孔、样品孔的颜色深浅来确定样品中AFM1的含量。Helica&&Aflatoxin&M1&assay&kit检测试剂盒则能够提供快速而准确的分析。测定的基础是。微孔板包被有针对黄曲霉毒素M1的特异性单克隆抗体。加入黄曲霉毒素标准或样品溶液、黄曲霉毒素酶标记物，游离黄曲霉毒素与黄曲霉毒素酶标记物竞争黄曲霉毒素抗体（竞争性酶联免疫分析法）。没有连接的酶标记物在洗涤步骤中被除去。将基质/发色剂加入到孔中并且孵育。结合的酶标记物将基质/发色剂转化为蓝色的产物。加入反应停止液后使颜色由蓝转变为黄色。在450nm处测量，吸收光强度与样品中的浓度成反比。
黄曲霉毒素M1 -
食品安全事件
日，中国公布了对200种液体乳产品质量的抽查结果。抽查发现蒙牛、长富纯牛奶两种产品黄曲霉毒素M1项目不符合标准的规定。 其中，蒙牛乳业（眉山）有限公司生产的一批次产品被检出黄曲霉毒素M1超标140%。对此，日蒙牛在其官网承认这一检测结果并“向全国消费者郑重致歉”。&2012年7月，广州市工商行政管理局公布了第二季度第二次乳制品及含乳食品的抽检结果。5批次婴幼儿奶粉被检出黄曲霉毒素M1含量不合格。湖南出产的奶粉在广州被通报后，湖南省长沙市立即在南山奶粉生产现场开展彻查。抽检中发现，南山奶粉被抽检的5个批次倍慧婴幼儿奶粉，全部含有强致癌性物质黄曲霉毒素M1。长沙市食安委表示，对南山奶粉质量调查将会认真彻底，查明情况后会依法采取措施加以处置。
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保存二维码可印刷到宣传品玉米中黄曲霉毒素降解与去除的研究--《中国农业科学院》2010年硕士论文
玉米中黄曲霉毒素降解与去除的研究
【摘要】：
黄曲霉毒素是一种毒性很强的真菌次级代谢产物,由于生长条件不良或储存不当都可能导致玉米感染黄曲霉毒素。玉米作为我国第二大粮食产物,染毒后严重威胁人类及动物身体健康。因此探究降解或去除玉米中黄曲霉毒素的方法或技术日益成为研究热点。本实验试图通过氨气熏蒸法及氢氧化钙浸泡湿磨法来降解或去除玉米中的黄曲霉毒素。因为黄曲霉毒素B1毒性最强且稳定性最高,因此本实验的降解指标以黄曲霉毒素B1为主,辅以黄曲霉毒素G1。
确定了玉米中黄曲霉毒素的提取、净化、衍生及HPLC检测方法。通过单因素试验确定了利用氨气熏蒸法降解玉米中的黄曲霉毒素的主要影响因素,在此基础上通过二次回归正交试验设计及SAS 9.0分析确定了氨气熏蒸法降解玉米中黄曲霉毒素的最优工艺参数,以最低成本获得了较高的降解率。通过单因素试验确定了氢氧化钙浸泡湿磨法降解玉米中的黄曲霉毒素的主要影响因素,在此基础上通过L9(34)正交设计及DPS分析对氢氧化钙浸泡湿磨法的各个工艺参数进行优化,从而使降解率得到大幅提高。并通过检测重复性试验各个步骤废弃物(残渣及残液)中的毒素含量,确定了各步骤对毒素降低的贡献率。
具体结果如下:
1、确定了玉米中黄曲霉毒素的提取、净化、衍生及HPLC检测方法:用8 mL乙腈:水(84:16, V/V)回旋振荡提取2g玉米中的黄曲霉毒素1h,取2mL提取液氮吹至干。吹干后的氮吹管中加入200μL正己烷和100μL TFA,立即于涡旋振荡器上剧烈混合30s,静置5min,再加入900μL水:乙腈(9:1, V/V),剧烈混合30s,静置10min,待其分层;准确移取下层液体于1.5mL离心管中10000r/min,离心10min。取上清液于HPLC检测,所用的流动相为:甲醇:乙腈:水(17:17:70, V:V:V),在此条件下得到的AFB1回收率达到85%以上,RSD5%。
2、确定了影响氨气熏蒸法降解玉米中黄曲霉霉毒B1的主要因素为:氨熏温度、玉米含水量、氨气浓度及氨熏时间。通过二次回归正交设计及SAS9.0分析得出影响氨气熏蒸法降解玉米中AFB1各因素的主次关系依次为:玉米含水量氨熏温度氨熏时间氨气浓度,并得到AFB1降解率与各因素之间的二次回归模型为:Y=-514.67+12.75X1+21.13X2+6.24X3+1.66X4-0.16X12+ 0.-0.-0..-0.-0.-0.-0.X3-0.,此模型相关性达到0.9612。根据二次回归方程得出了各因素的最优组合方案为玉米含水量为20%,氨熏温度37℃,氨熏时间为96h,氨气浓度为7.05%,在此条件下玉米中AFB1降解率的模型预测值为90.4%,实测值为92%,两者较接近。
3、确定了影响湿磨法降解玉米中黄曲霉霉毒B1及G1的主要因素为:浸泡次数、浸泡时间、氢氧化钙浓度、温度。再通过L9(34)正交表及DPS分析确定影响玉米中AFB1及G1降解率各因素主次关系依次为:浸泡次数温度Ca(OH)2浓度时间,并确定最优参数组合:浸泡次数为4次,浸泡温度为25℃,Ca(OH)2浓度为0.015mol/L,浸泡时间为24h。在此条件下玉米中AFB1和AFG1降解率分别为:96.33%和98.90%。
4、通过检测氢氧化钙浸泡湿磨法验证试验各个步骤的废弃物(残渣及残液)中的毒素含量可以得出以下结论:氢氧化钙浸泡湿磨法通过两种作用使玉米中的黄曲霉毒素得到降低,第一,水的清洗作用,这一作用大约可以降低60%的黄曲霉毒素;第二,氢氧化钙的降解作用,大约可以降低36%的黄曲霉毒素。
【关键词】：
【学位授予单位】：中国农业科学院【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2010【分类号】：TS210.7【目录】：
Abstract7-15
第一章 引言15-22
1.1 黄曲霉毒素简介15-17
1.1.1 黄曲霉毒素的理化性质15-16
1.1.2 玉米中黄曲霉毒素的产生与污染状况16
1.1.3 黄曲霉毒素的毒性16-17
1.2 玉米中黄曲霉毒素的检测方法17-18
1.2.1 紫外荧光法17
1.2.2 薄层层析法(TLC 法）17
1.2.3 高效液相色谱法(HPLC 法)17-18
1.2.4 酶联免疫吸附法(ELISA 法)18
1.2.5 免疫亲和柱净化荧光光度法18
1.3 黄曲霉毒素的降解及去除方法18-21
1.3.1 物理方法18-19
1.3.2 化学法19-20
1.3.3 生物法20-21
1.4 研究目的和意义21-22
第二章 黄曲霉毒素 B_1提取与检测方法的确定22-32
2.1 材料和方法22-23
2.1.1 试验材料与试剂22
2.1.2 主要仪器22-23
2.2 试验方法23-24
2.2.1 玉米中黄曲霉毒素B_1 的粗提取23
2.2.2 黄曲霉毒素B_1 粗提取液的净化23
2.2.3 黄曲霉毒素B_1 的衍生方法23-24
2.2.4 色谱条件的选择24
2.3 结果与分析24-29
2.3.1 玉米中黄曲霉毒素B_1 提取方法的确定24-26
2.3.2 玉米中黄曲霉毒素B_1 粗提取液净化方法的确定26-27
2.3.3 玉米中黄曲霉毒素B_1 衍生方法的确定27
2.3.4 高效液相色谱检测条件的确定27-28
2.3.5 黄曲霉毒素B_1 含量的计算方法28-29
2.4 黄曲霉毒素检测方法的评价29-31
2.4.1 黄曲霉毒素B_1 检测方法的回收率实验29
2.4.2 黄曲霉毒素B_1 标准品的线性范围与检出限29-30
2.4.3 精密度实验30-31
2.5 本章小结31-32
第三章 氨气熏蒸法降解玉米中的黄曲霉毒素 B_132-47
3.1 综述32
3.2 材料与方法32-34
3.2.1 主要试剂与设备32-33
3.2.2 样品准备33
3.2.3 水分含量调节33
3.2.4 黄曲霉毒素提取及检测方法33
3.2.5 黄曲霉毒素B_1 浓度计算33-34
3.2.6 氨气熏蒸处理方式34
3.2.7 试验设计及统计分析34
3.3 结果与分析34-46
3.3.1 单因素试验34-37
3.3.2 二次回归正交设计试验37-45
3.3.3 氨熏前后黄曲霉毒素谱图对比45-46
3.4 讨论46
3.5 本章小结46-47
第四章 氢氧化钙浸泡湿磨法降解玉米中的黄曲霉毒素 B_1和 G147-65
4.1 引言47
4.2 材料与方法47-52
4.2.1 主要试剂与设备47-48
4.2.2 样品准备48
4.2.3 湿磨法总体方案的确定48-50
4.2.4 试验设计及统计分析50
4.2.5 重现性实验50-51
4.2.6 验证实验的设计51
4.2.7 黄曲霉毒素提取及检测方法51
4.2.8 黄曲霉毒素B_1 及黄曲霉毒素G1 毒素浓度的计算51-52
4.3 结果与分析52-63
4.3.1 玉米样品中黄曲霉毒素浓度的控制52-53
4.3.2 备选方案结果分析53
4.3.3 单个因素对氢氧化钙浸泡法降解玉米中黄曲霉毒素B_1 和G1 的影响53-56
4.3.4 正交实验确定氢氧化钙浸泡法降解玉米中黄曲霉毒素B_1 和G1 的最佳条件56-58
4.3.5 浸提重复性实验结果58-59
4.3.6 氢氧化钙浸泡湿磨前后玉米中黄曲霉毒素谱图对比59-60
4.3.7 验证实验结果60-63
4.4 讨论63
4.5 本章小结63-65
第五章 结论65-67
5.1 主要结论65-66
5.2 创新点66
5.3 建议66-67
参考文献67-72
个人简介73
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专家：黄曲霉毒素的毒性是砒霜68倍 可致肝病
来源：新华网
　　继三聚氰胺之后，又一个原本生僻的名词开始进入公众视野黄曲霉毒素。质检总局日前发布的公告显示，个别企业产品中黄曲霉毒素M1超标。　　引发公众高度关注的黄曲霉毒素究竟为何物？其危害有多大？如何防范黄曲霉毒素损害我们的健康？针对这些问题，新华社“新华视点”记者采访了有关部门及权威专家。　　一问：黄曲霉毒素危害有多大？　　虽然黄曲霉毒素是最近才进入公众视野的，但它其实不是什么新鲜事物。　　据国家糖业质量监督检验中心有关专家介绍，黄曲霉毒素被世界卫生组织的癌症研究机构划定为1类致癌物，是一种毒性极强的剧毒物质。在天然污染的食品中，以黄曲霉毒素B1最为多见，其毒性和致癌性也最强。　　中国农业大学教授何计国说，容易受黄曲霉毒素污染的食品包括玉米、花生、大米，其次是大麦、小麦等。　　据介绍，生产企业如果使用劣质的原料，如霉化的花生、菜子、玉米等生产食用油，则有可能造成黄曲霉毒素超标；哺乳动物摄入被黄曲霉毒素B1污染的饲料和食品后，部分黄曲霉毒素B1可在哺乳动物体内生成黄曲霉毒素M1，并存在于哺乳动物的乳汁中，可导致其生产加工的乳制品中出现黄曲霉毒素M1污染。　　黄曲霉毒素危害性有多大呢？据专家介绍说，黄曲霉毒素的毒性是氰化钾的10倍，砒霜的68倍。误食了黄曲霉毒素污染的食品的患者，轻则可能出现发热、腹痛、呕吐、食欲减退等症状，重则可能出现肝区疼痛、下肢浮肿及肝功能异常等中毒性肝病症状。1984年印度曾经发生过黄曲霉毒素中毒，致使十几个孩子死亡。　　广州市奶业协会会长王丁棉说，在自然条件下，黄曲霉毒素在食品中稳定性很强，一般的温度难于将其杀灭，即使用100℃的温度进行20个小时的灭菌，也不一定能将其彻底杀灭或去除。　　二问：黄曲霉毒素超标缘由？　　经过四川、福建两省质监部门组织专家进行的分析研判，个别企业抽查的液体乳不合格是由于奶牛食用了霉变饲料，从而导致乳汁中黄曲霉毒素M1超标。　　对于广东三家企业生产的花生油问题，广东省质监局有关负责人说，主要原因是花生原料在种植、运输及储存过程中受到黄曲霉等霉菌污染，企业在生产时没有严格检测，没有采用精炼工艺或工艺控制不足。　　液体乳和花生油的黄曲霉毒素超标缘由大多指向原料。有业内人士指出，由于我国农业基础薄弱，生产经营方式呈现低、小、散的局面，因此奶牛饲料、花生原料等初级农产品的储存、运输方式仍较为落后，质量无法得到保证。　　据了解，这次发现黄曲霉毒素问题的四川省眉山市，近年大力推进奶牛规模化养殖，但散户养殖为主体并未改变，奶源六成仍主要来自散户。　　眉山市畜牧局副局长蔡健介绍说，由于精饲料价格较高，奶农或者养殖场可能会使用一些陈化粮，这些饲料容易产生黄曲霉毒素。此外，一些奶农将精饲料放在潮湿地面上，致使底部饲料容易变质发霉。　　中国农业大学经济管理学院教授乔娟介绍说，奶牛生产周期长，一头小牛到能产奶要一两年，成本较高。一些牛奶企业依赖大量外购原料奶，质量控制乏力。　　据调查，一些食品中发现黄曲霉毒素超标，有的问题出在原料上，还有的是企业自检过程中没有发现，说明其生产和质量控制存在明显缺陷。　　三问：如何防范黄曲霉毒素超标？　　这次几家企业产品被检出黄曲霉毒素后，有关部门已作了处理：质检总局责成四川、福建两省质监部门，责令并监督乳企召回不合格产品，对问题产品做销毁处理，查清原因进行整改，并依法进行处理；一些地方质监局责令相关油脂企业停止生产，对不合格产品进行召回，并暂扣其生产许可证，查封有关产品，立案查处。　　如何防范黄曲霉毒素超标及引发食品安全事故？　　何计国等专家认为，食品企业要避免黄曲霉毒素污染，必须从源头上保证原料质量，比如油脂企业要保证花生等原料没有霉变，奶牛养殖企业要购买没有霉变的粮食作饲料，饲料储藏时要防止霉变。　　乳业专家表示，为保证原料奶的质量，乳品企业应发展自有牧场，加强对饲料、疫情的控制。另一方面，应加强与大型牧场合作，避免在市场大幅扩张情况下，由于原料奶供应不足，而放松对质量的要求。　　“现在一些乳企被检出食品安全问题，说明一些企业在生产和质量控制方面还存在死角。”王丁棉说，“乳品企业对原料选材、奶源质量控制、产品加工质量控制、仓储、运输等，每一个危机风险点，都必须有严格监管。”　　“虽说企业需要自律，但是仅靠自律是不够的。当前食品安全事件频发，一个重要原因就是对违法行为处罚力度不够，违法成本过低；相反，消费者维权成本很高。”北京君合律师事务所律师陈长洁说，“国家应进一步完善法律法规，对检出质量问题的食品企业采取严厉措施，切实保障消费者合法权益。”(采写记者陈玉明、朱立毅、欧甸丘、叶建平、李江涛)
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