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益母草碱灭螺效果及其机理研究
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杀螺剂室内筛选实验方法标准化的研究Ⅳ不同月份钉螺对氯硝柳胺乙醇胺盐可湿性粉剂的敏感性
中国血吸虫病防治杂志２０１２年第２４卷第１期Ｃｈｉｎ Ｊ［文章编号】１００５．６６６１（２０１２）０１４）０３５Ｄ５ＳｃｈｉｓｔｏＣｏｎｔｒｏｌ ２０１２，Ｖ０１．２４，Ｎｏ．１?３５??论著?杀螺剂室内筛选实验方法标准化的研究Ⅳ不同月份钉螺对氯硝柳胺乙醇胺盐可湿性粉剂的敏感性李幼子，邢云天，李洪军，曲国立，汪伟，魏剑英，梁幼生，戴建荣＋［摘要］ 目的了解不同月份钉螺对氯硝柳胺乙醇胺盐可湿性粉剂（ＷＰＮ）的敏感性，为制定杀螺药筛选与药效评价标准化方法提供参考依据。方法自２０１０年６月至２０１１年５月每月采集江苏省镇江市江滩钉螺，实验室饲养２４ ｈ后随机分 组，用现配制的ＷＰＮ药液在温度（２５±１）ｏＣ、湿度６０％、光照充足的培养箱内对上述钉螺进行浸杀试验，采用敲击法鉴别钉 螺死活并计数，计算钉螺死亡率及其半数致死浓度（ＬＣ，。）。结果０．５ ｍＣＬ及以上浓度ＷＰＮ浸杀钉螺２４ ｈ，各月采集的钉 螺死亡率均为１００％；浓度为０．２５ ｍｇ／Ｌ时，钉螺死亡率为６０％。１００％；浓度为０．１２５ ｍｇ／Ｌ时，钉螺死亡率为３％～２７％；浓度为０．０６２ ５ ０．５ｍｇ／Ｌ时，钉螺死亡率为３％～２０％；０．０３２ ｍｇ／Ｌ及以下浓度钉螺死亡率均为ｏ；浸杀２４ ｈ钉螺ＬＣｓｏ为０．１４０―０．２０９ｍｇ／Ｌ。ｍｇ／Ｌ及以上浓度ＷＰＮ浸杀钉螺４８ ｈ，各月采集的钉螺死亡率均为１００％；浓度为ｏ．２５ ｍｇ／Ｌ时，钉螺死亡率为９０％～１００％；浓度为０．１２５ ｍｇ／Ｌ时，钉螺死亡率为３％～５７％；浓度为０．０６２ ５ ｍｇ／Ｌ时，钉螺死亡率为３％～１３％；浓度为０．０３２ ｍｇ／Ｌ 时，钉螺死亡率为０―１０％；０．０１６ ｍｇ／Ｌ及以下浓度时，钉螺死亡率均为０；浸杀４８ ｈ钉螺ＬＣｓｏ为０．１１２～０．１７０ ｍｇ／Ｌ。不同月份 钉螺经ＷＰＮ浸杀２４ ｈ与４８ ｈ时的死亡率差异均无统计学意义（Ｐ均＞０．０５）。结论全年不同月份采集的钉螺对ＷＰＮ的 Ｌｃｓｏ波动范围不大，敏感性变化较小，对杀螺药筛选以及药效评价结果影响有限，在实验误差范围内。 ［关键词］湖北钉螺；５０％氯硝柳胺乙醇胺盐可湿性粉剂（ＷＰＮ）；杀螺效果；半数致死浓度（ＬＣ，。） ［中图分类号］Ｒ３８３．２４ ［文献标识码］ＡＳｔｕｄｉｅｓｏｎｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｍｏｌｌｕｓｃｉｃｉｄｅｓ ｉｎ ｌａｂｏｒａｔｏ．Ｇｕｏ－ｌｉ，Ｗａｎｇ Ｗｅｉ，Ｗｅｉ Ｊｉａｎ－ｙｉｎｇ，Ｌｉａｎｇ Ｙｏｕ―ｓｈｅｎｇ，Ｄａｉ Ｊｉａｎ－ｒｏｎｇ＋ｏｎｒｙ ＩＶ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｏｎｃｏｍｅｌａｎｉａ ｓｎａｉｌｓ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍｏｎｔｈｓ ｔｏ ｎｉｃｌｏｓａｍｉｄｅＬｉＹｏｕ－ｚｉ，肠增Ｙｕｎ―ｔｉａｎ，Ｌｉ Ｈｏｎｇ－ｊｕｎ，ＱｕｏｆＪｉａｎｇｓｕ ＩｎｓｔｉｔｕｔｅＰａｒａｓｉｔｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅｓ；Ｋｅｙ ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｆｏｒＰａｒａｓｉｔｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ，ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＨｅａｌｔｈ；ＣｅｎｔｅｒｆｏｒＰｅｓｔｉｃｉｄｅＥｆｆｅｃｔＥｖａｌｕａｔｉｏｎ，ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，耽施２１４０６４，Ｃｈｉｎａ ＋Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］０ｂｊｅｃｔｉｖｅａｓＴｏ ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄ ｔｈｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｏｎｃｏｍｅｌａｎｉａ ｓｎａｉｌｓ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍＯＢｔＩｌＳ ｔｏ ｎｉｃｌｏｓａｍｉｄｅ，ｓｏｔｏｐｒｏｖｉｄｅ ｔｈｅ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｍｏｌｌｕｓｃｉｃｉｄｅ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ａｎｄ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｉｎ ｌａｂｏｒａ― Ｔｈｅ ｓｎａｉｌｓ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｍａｒｓｈｌａｎｄ ｏｆｔｏｒｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍａｙ ２０１１．Ｍｔｅｒｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅＺｈｅｎｊｉａｎｇＣｉｔｙ，Ｊｉａｎｇｓｕ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ ｍｏｎｔｈ ｂｙ ｍｏｎｔｈ ｆｒｏｍ Ｊｕｎｅ ２０１０ ｔｏｂｅｉｎｇ ｒａｉｓｅｄ ｉｎ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ ２４ ｈ，ｔｈｅ ｓｎａｉｌｓ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｇｒｏｕｐｅｄ，ａｎｄ ｔｈｅｎ ｉｍｍｅｍｅｄ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａ?ａｏｆ ５０％ｗｅｔｔａｂｌｅ ｐｏｗｄｅｒ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｉｃｌｏｓａｍｉｄｅ ｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ ｓａｌｔ ａｔ ｆ２５±１１ ｏＣ ｗｉｔｈ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｎｄ ｃｏｕｎｔｅｄ，ａｎｄ ｔｈｅ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ｒａｔｅ ｏｆ ｓｎａｉｌｓ ａｎｄ ｍｅｄｉａｎ ｌｅｔｈａｌｗｅｒｅｈｕｍｉｄｉｔｙ ｏｆ ６０％．Ｔｈｅ ｄｅａｄ ｓｎａｉｌｓ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ＬＣ５０）ｗｅｒｅＷｈｅｎ ｔｈｅ ｓｎａｉｌｓｉｍｍｅｍｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ ｏｆ ｎｉｃｌｅｓａｍｉｄｅ ａｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ０．５ ｍｇ／Ｌ ｆｏｒ ２４ ｈ．ａｌｌ ｔｌｌｅ ｓｎａｉｌｓ ｃｏｌ―ｗｅｒｅｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍｏｎｔｈｓｄｅａｄ，ｗｈｉｌｅ ６０％一１００％ｏｆ ｔｈｅ ｓｎａｉｌ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ｗａｓ ａｃｈｉｅｖｅｄｆｏｒ ０．２５０ ｍｇ／Ｌ ｎｉｃｌｏｓａｍｉｄｅ． ０．０３２３％一２７％ｆｏｒ ０．１２５ ｍｇ／Ｌ ｎｉｃｌｏｓａｍｉｄｅ．ａｎｄ ３％－２０％ｆｏｒ ０．０６２ ５ ｍｇ／Ｌｎｉｃｌｏｓａｍｉｄｅ．矾ｅｎ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎｍｇ／Ｌ，ｔｈｅ ｎｉｃｌｏｓａｍｉｄｅ ｗａｓ ｎｏｔ ｔｏｘｉｃ ｔｏ ｔｈｅ ｓｎａｉｌｓ ｗｉｔｈｉｎ ２４ ｈ．Ｔｈｅ ＬＣ５０ ｖａｌｕｅ ｗａｓ ０．１４０―０．２０９ ｍｇ／Ｌ ｆｏｒ ２４ ｈ．Ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｓｎａｉｌｓ ｗｅｒｅ ｉｍｍｅｒｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ ｏｆ ｎｉｃｌｏｓａｍｉｄｅ ａｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｍｏｒｅｔｈａｎ０．５ ｍｇ／Ｌ ｆｏｒ ４８ ｈ，ａｌｌ ｔｈｅ ｓｎａｉｌｓ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｏｎｔｈｓ ｗｅｒｅ ｄｅａｄ，ｗｈｉｌｅ ９０％－１００％ｏｆｔｈｅ ｓｎａｉｌ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ｗａｓ ａｃｈｉｅｖｅｄ ｆｏｒ ０．２５０ ｍｇ／Ｌ ｎｉｃｌｏｓａｍｉｄｅ，３％一５７％ｆｏｒ ０．１２５ ｍｇ／Ｌ ｎｉ． ｃｌｏｓａｍｉｄｅ．３％－１３％ｆｏｒ ０．０６２ ５ ｍｇ／Ｌ ｔｈａｎ ０．０１６ ｍｇ／Ｌ．ｔｈｅ ｎｉｃｌｏｓａｍｉｄｅ ｗａｓｗｅｒｅｎｏｎｉｃｌｏｓａｍｉｄｅ．ａｎｄｎｏｔ０―１０％ｆｏｒ ０．０３２ ｍｇ／Ｌ ｎｉｃｌｏｓａｍｉｄｅ．Ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ｌｏｗｅｒｔｏｘｉｃ ｔｏ ｔｈｅ ｓｎａｉｌｓ ｗｉｔｈｉｎ ４８ ｈ．Ｔｈｅ ＬＣｓｏ ｖａｌｕｅ ｗａｓ ０．１１２―０．１７０ ｍｇ／Ｌ ｆｏｒ ４８ ｈ．Ｔｈｅｒｅａｔｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ｏｆ ｓｎａｉｌｓ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ ｎｉｃｌｏｓａｎｆｉｄｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｂｓｅｒｖｅｄ Ｔｈｅｒｅａｒｅ２４ ａｎｄ ４８ ｈ ｆＰ ｖａｌｕｅｓ＝０．３７４ａｎｄ ０．２６７．ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓｌｉｔｔｌｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｓｎａｉｌｓ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍｏｎｔｈｓ ｔｏ ｎｉ．ａｃｌｏｓａｍｉｄｅ．ｗｉｔｈ ｍｉｎｏｒ ｆｌｕｃｔｕａｔｉｏｎｓ ｉｎ ＬＣ５０ ｖａｌｕｅｓ．Ｓｕｃｈｆｉｎｄｉｎｇ ｉｎｄｉｃａｔｅｓ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｓｎａｉｌｓ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍｏｎｔｈｓ ｈａｖｅ ｆｅｗ［基金项目］国家自然科学基金（８１０７１３７９）；国家科技支撑计划（２００９ＢＭ７８８０６）；江苏省医学领军人才项目（ＬＪ２０１１３２）；江苏省卫生厅项目 （Ｘ２０１１０３）［作者单位】 ［作者简介］江苏省血吸虫病防治研究所、卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室、农业部杀虫剂药效评价中心（无锡２１４０６４） 李幼子，女，硕士研究生。研究方向：血吸虫病防治及杀螺药物研究 ４通信作者Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｊｒ０００８＠ｈｏｔＩｎａｉｌ．ｃｏｎｌ万方数据?３６?ｅｆｆｅｃｔｓｏｎ李幼子等：杀螺剂室内筛选实验方法标准化的研究ＩＶ不同ｆｌ份钉螺对氯硝柳胺乙醇胺盐可湿性粉剂的敏感性ｓｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆ ｍｏｌｌｕｓｃｉｃｉｄｅｓ ａｎｄ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ．［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］Ｏｎｃｏｍｅｌａｎｉａ ｓｎａｉｌ；５０％ｗｅｔｔａｂｌｅ ｐｏｗｄｅｒ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｉｃｌｏｓａｍｉｄｅ ｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅｓａｌｔ何ＰＮ）；Ｍｏｌｌｕｓｃｉｃｉｄａｌｅｆ－ｆｅｅｔ；Ｍｅｄｉａｎ ｌｅｔｈａｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ＬＣ５０）低，是目前ＷＨＯ唯一推荐现潲的杀螺药…。该药的应用大大推动了我国血吸虫病防治工作进程陋。５］。 力于新型杀螺药筛选和已有杀螺药的剂型改造睛。１“， 而无论是筛选新型杀螺药还是对已有杀螺药进行剂 型改造均需要有标准化的筛选和药效评价方法。为 了增加不同实验结果间的可比性，ＷＨＯ统一了杀螺 药筛选方案要求，国内不同实验室进行杀螺药筛选与氯硝柳胺因其杀螺效果好，对非靶生物毒性较３钉螺浸杀试验 取１６个１００ ｍｌ烧杯，分为２４ ｈ和４８ ｈ浸杀２组 后，烧杯按照１、０．５、０．２５、０．１２５、０．０６２ｍｇ／Ｌ和０．０００８ ５、０．０３２、０．０１６但是氯硝柳胺难溶于水，现场使用不方便，且对鱼类 等水生动物具有一定毒性哺４１。因此，研究人员仍致ｍｇ／Ｌ药物浓度编号。每杯中放入１０ 只钉螺，然后分别倒人１００ ｍｌ上述配制的药液，烧杯上覆盖塑料纱网以防止钉螺爬出液面。将上述装有 药液和钉螺的烧杯置于温度（２５＿＋１）℃、湿度６０％、光 照充足的培养箱内，分别浸杀２４ ｈ和４８ ｈ后倒去药 液，用清水清洗３次，加入１５ ｍｌ脱氯自来水复苏１ ｈ， ２４ ｈ后再次复苏１ ｈ，２４ ｈ后用敲击法鉴别其死活并 计数，计算钉螺死亡率。每月采集的钉螺均按上述方 法进行浸杀试验，并重复３次。 ４统计分析 根据钉螺死亡数，利用ＳＰＳＳ １３．０统计软件中Ｐｒｏ． ｂｉｔ回归模型计算半数致死浓度（ＬＣ，。）及其９５％可信 区间；以钉螺采集月份与ＷＰＮ药液浓度为自变量，钉 螺死亡率为因变量，对不同浓度ＷＰＮ浸杀采自不同 月份钉螺的死亡率进行Ｌｏｇｉｓｔｉｃ多因素回归分析ｎ 结果 １不同浓度ＷＰＮ浸杀２４ ｈ钉螺死亡情况 ｍｇ／Ｌ及以上浓度ＷＰＮ浸杀不同月份采集的 钉螺２４ ｈ，钉螺死亡率均为１００％；浓度为０．２５ ｍｇ／Ｌ 时，钉螺死亡率为６０％～１００％；浓度为０．１２５ ｍｇ／Ｌ时， 钉螺死亡率为３％～２７％；浓度为０．０６２ ５ ｍｇ／Ｌ时，钉螺 死亡率为３％～２０％；０．０３２ ｍｇ／Ｌ及以下浓度时，钉螺死 亡率均为０（表１）。不同浓度ＷＰＮ浸杀钉螺２４ ｈ的ＬＣ，。为０．１４０～０．２０９ ｍｇ／Ｌ（表２），各月采集钉螺的ＬＣ，。０．５７｜。药效评价时也正在制定和形成统―粝滩。戴建荣等ｎ２。４］调查了药液体积、钉螺数量以及实验钉螺饲养时间对 杀螺效果的影响，为杀螺药室内筛选实验方法标准化 的建立提供了理论基础。但目前尚无实验室内传代 的标准株钉螺供杀螺药筛选与药效评价，而是需要从 血吸虫病疫区现场采集实验钉螺，每年的不同时间进 行杀螺药筛选以及药效评价时的实验用螺均为当时 采集后用于实验。但是，钉螺的活动、代谢、发育与繁 殖等情况因温度、光照、植被等情况的不同而存在差 异口５｜。不同月份采集的钉螺对ＷＰＮ的敏感性是否存 在差异，以及这种差异会否对杀螺药筛选和药效评价 产生影响尚未见报道。本研究自２０１０年６月至２０１１ 年５月逐月从江苏省镇江市血吸虫病疫区现场江滩 采集钉螺，通过室内统一标准的浸杀实验观察不同月 份钉螺对ＷＰＮ的敏感性，为制定杀螺药筛选与药效 评价的标准化方法提供参考依据。材料与方法１杀螺药配制 ５０％氯硝柳胺乙醇胺盐可湿性粉剂（ＷＰＮ），为黄 色粉末，产品质量符合ＷＨＯ／ＳＭＦ／１２Ｒ３规格要求，由 南京艾金化工有限责任公司生产，批号：１０１２０３１。 ＷＰＮ称重后用脱氯自来水配制成药物浓度分别为１、０．５、０．２５、０．１２５、０．０６２变化见图１。２不同浓度ＷＩ Ｎ浸杀４８ ｈ钉螺死亡情况ｍｇ／Ｌ及以上浓度ＷＰＮ浸杀不同月份采集的 钉螺４８ ｈ，钉螺死亡率均为１００％；浓度为０．２５ ｍｇ／Ｌ０．５５、０．０３２、０．０１６和０．０００８ ｍｇ／Ｌ时，钉螺死亡率为９０％～１００％；浓度为０．１２５ ｍｇ／Ｌ时， 钉螺死亡率为３％～５７％；浓度为０．０６２ ５ ｍｇ／Ｌ时，钉螺 死亡率为３％～１３％；浓度为０．０３２ ｍｇＣＬ时，钉螺死亡率为０～１０％；０．０１６ ｍｇ／Ｌ及以下浓度时，钉螺死亡率均的药液待用。 ２实验钉螺 实验用钉螺系２０１０年６月至２０１１年５月逐月在 江苏省镇江市江滩现场采集，为湖北钉螺指名亚种肋 壳钉螺。现场采集的钉螺于实验室内适应性饲养２４ ｈ后选取７～８旋、活力较强的成螺用于实验ｎ“。 万方数据为Ｏ（表３）。不同浓度ＷＰＮ浸杀钉螺４８ ｈ时的ＬＣ，。为０．１０２～０．１７０ｍｇ／Ｌ（表２），各月采集钉螺的Ｌｃ，。变化见图２。中国血吸虫病防治杂志２０１２年第２４卷第１期Ｃｈｉｎ ＪＳｃｈｉｓｔｏ Ｃｏｎｔｒｏｌ ２０１２，Ｖ０１．２４，Ｎｏ．１?３７?表１不同浓度ＷＰＮ浸杀２４ｈ时钉螺死亡情况Ｔａｂｌｅ １Ｍｏｒｔａｆｉｔｙｏｆ ｓｎａｉｌｓ ｉｍｍｅｒｓｅｄ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆＷＰＮｆｏｒ２４ ｈ（％）ｓｎ嚣篆鬻器。。！型竺兰坠生型鉴丝竺些塑竺坠型！鉴墨婴堕！竺坐！竺竺型垫塑堕！业拼㈨ｍ９５％６＂／４８ ｈＬＣｓｏ ９５％Ｃ／表２ＷＰＮ浸杀钉螺的ＬＣ，及其可信区间（９５％ａ）Ｌｃ∞（ｍｅ／Ｌ）０３０ ０ ２５ ０ ２０ ０１５ ０１０ ０ ０５ ０Ｌｃ∞（ｍｇ几）０ ３０ ０２５ ０２０ ０１５ ０１０ ００５ ０｝三二』２０品ｊＬ＿｝ｊ一§ｏｌｌ：；－』ｊ月份Ｍｏｎｔｈ｛．！！９２０品！！！！ｏ上‰。二』一月份Ｍｏｎｔｈ图１不同浓度ＷＰＮ浸杀不同月份钉螺２４Ｆｉｇ．１ｈＬＣ。值变化ｏｆＣｈａｎｇｅｓ ｏｆ ＬＣｓ，ｖａｌｕｅｓ ｏｆ ｓｎａｉｌｓ ｃｏＨｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ图２不同浓度ＷＰＮ浸杀不同月份钉螺４８ｈＬＣ。值变化 Ｆｉｇ．２ Ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ＬＣ∞ｖａｌｕｅｓ ｏｆ ｓｎｌｌｍ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍｏｎｔｈｓ ｉｍｍｅｒｓｅｄ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍｏｎｔｈｓ ｉｍｍｅｒｓｅｄ ｉｎｄｉｍｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓＷＰＮｆｏｒ２４ｈＷＩＮｆｏｒ４８ｈ万方数据?３８?李幼子等：杀螺剂室内筛选实验方法标准化的研究Ｉｖ不同月份钉螺对氯硝柳胺乙醇胺盐可湿性粉剂的敏感性表３不同浓度ＷＰＮ浸杀驰ｈ时钉螺死亡情况Ｔａｂｌｅ ３Ｍｏｒｔａｌｉｔｙｏｆ ｓｎａｉｌｓ ｉｍｍｅｒｓｅｄ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆＷＰＮ ｆｏｒ鹌ｈ（％）３钉螺死亡率Ｌｏｇｉｓｔｉｃ多因素回归分析 对不同浓度ＷＰＮ浸杀不同月份钉螺的死亡率进 行Ｌｏｇｉｓｔｉｃ多因素回归分析显示，２４ ｈ与４８ ｈ组药液 浓度因素参数估计值分别为１７．３０与１６．９７，Ｐ值均为 ０，说明在控制月份因素条件下，不同药液浓度问钉螺 死亡率差异有统计学意义；而２４ｈ与４８ ｈ组钉螺月份 因素参数估计值分别为一０．０１８与一０．０２１，Ｐ值分别为 ０．３７４与０．２６７，说明在控制药液浓度条件下，２４ ｈ与４８本研究采集不同月份钉螺进行室内浸杀试验，结 果显示，０．５ ｍｇ／Ｌ及以上浓度ＷＰＮ浸杀２４ ｈ时，钉螺 死亡率均为１００％；０．０３２ ｍｇ／Ｌ及以下浓度时，钉螺死 亡率均为０。０．５ ｍ玑及以上浓度ＷＰＮ浸杀４８ ｈ时， 钉螺死亡率均为１００％；０．０１６ ｍｇ／Ｌ及以下浓度时，钉 螺死亡率均为０，即死亡率差异出现的范围分别在０．０６２ ５－０．２５ｍｒＣＬ与０．０１６～０．２５ ｍｇ／Ｌ。ＷＰＮ浸杀不同月份钉螺２４ ｈ与４８ ｈ的ＬＣ，。分别为０．１４０～０．２０９ ｍｇ／Ｌ与０．１０２～０．１７０ ｍｇ／Ｌ，极差分别为０．０６９ ｍｇ／Ｌ与 ０．０６８ ｍｒＣＬ，ＬＣ，。值波动范围较小。Ｌｏｇｉｓｔｉｃ多因素回 归分析发现，在控制药液浓度条件下，不同月份钉螺 死亡率差异无统计学意义。结果提示，全年不同月份 采集的钉螺对ＷＰＮ的Ｌｃ，。值波动范围不大，敏感性 变化较小，在实验误差允许范围内，钉螺采集时间因 素对室内杀螺药筛选及药效评价影响有限。 不同月份钉螺对ＷＰＮ的敏感性较稳定，但仍存 在波动，其原因可能有：①春秋季钉螺活动较强，实 验时易于接触药物；而夏冬季钉螺多处于夏蛰和冬眠 状态，极少开厣活动，影响与药物的接触陋３｜。②杀螺 药物可通过不同程度地抑制钉螺耗氧而发挥杀螺作 用，而钉螺耗氧量以及对缺氧的耐受能力可能存在季 节性差异，使得对药物的敏感性出现差异阱１。③不 同季节钉螺组织中的酶含量与活性及其发育与繁殖 等均存在差异∞崩１。这些差异可能会在一定程度上 影响钉螺对药物的敏感性，但影响程度有限，不足以 对ＷＰＮ的药效评价和标准化方法产生显著影响。提 示全年各个月份在控制温度、湿度和光照的标准化浸ｈ组不同月份钉螺死亡率差异均无统计学意义。讨论目前，日本血吸虫病仍是一种严重危害我国居民 身体健康的重要人畜共患寄生虫病。钉螺是日本血 吸虫的唯一中间宿主，药物杀螺是控制和阻断血吸虫 病传播的重要措施之一掣。ＷＨＯ对杀螺药物提出的 总要求是低浓度时对螺有较高的毒性，对非靶生物无 毒，药物进入食物链不产生不良反应，药物须至少稳 定１８个月ｎ乳２０｜。曾在我国大规模现场使用的五氯酚 钠因致癌、致畸、致突变作用而在国、内外先后被禁止 使用；而目前因高效低毒在我国得到大规模推广应用 的氯硝柳胺仍存在低水溶性、使用不便等缺陷乜１。２２｜。因此，不断进行新型杀螺药开发以及对现有杀螺药剂 型进行改造仍是我国血防工作的重点。杀螺药筛选 和药效评价标准化方法的建立将大大加强和提升我 国创新性杀螺药的研发能力，对促进和推动我国血吸 虫病防治事业的发展亦非常必要。 万方数据中国血吸虫病防治杂志２０１２年第２４卷第１期ＣｈｉｎＪＳｃｈｉｓｔｏ Ｃｏｎｔｍｌ ２０１２，Ｖ０１．２４，Ｎｏ．１?３９?杀条件下，采集各月钉螺进行杀螺实验对药效评价效 果影响较小，即全年不同月份采集的钉螺均可用于杀 螺药药效评价。 ［参考文献］ｌ １ Ｊ ＷＨＯ．Ｔｈｅｒｏｌｅ ｏｆ ｍｏｌｌｕｓｃｉｃｉｄｉｎｇ ｉｎ ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍｉａｓｉｓ研究ＩＩ钉螺数对杀螺效果的影响［Ｊ］．中国血吸虫病防治杂志，２００２， １４（４）：２６３―２６５． ［１４］戴建荣，梁幼生，张燕萍，等．杀螺剂室内筛选实验方法标准化的 研究ｌＩＩ实验钉螺饲养时间对杀螺效果的影响［Ｊ］．中国血吸虫病防治 杂志，２００３，１５（５）：３４６―３４８． ［１５ｊ周晓农．实用钉螺学［Ｍ］．北京：科学出版社，２００５：６９―７５． ［１６］戴建荣，陈昌，梁幼生，等．不同样品的氯硝柳胺乙醇胺盐可湿性ｃｏｎｔｒｏｌ［Ｒ Ｊ．Ｇｅｎｅ―粉剂的杀螺效果与质量比较［Ｊ］．中国血吸虫病防治杂志，１９９８， １０（２）：８６．８８． ［１７］方积乾，徐勇勇，余松林，等．医学统计学与电脑实验［Ｍ］．上海： 上海科学技术出版社，１９９７：１６９．１７８． ［１８］ＷａｎｇＬＤ，Ｕｔｚｉｎｇｅｒ Ｊ，ＺｈｏｕＸＮ．Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍｉａｓｉｓｅｓｖａ：ＷＨ０，１９９２：１０７．［２］毛守白．血吸虫生物学与血吸虫病防治［Ｍ］．北京：人民卫生出版 社．１９９０：７１４―７１８．［３］中华人民共和国卫生部疾病控制司．血吸虫病防治手册［Ｍ］．３版．上海：上海科学技术出版社，２０００：１０３．【４ Ｊ ＹｕａｎＹ，ＸｕＸＪ，ＤｏｎｇＨＦ，ｅｔａｌ．Ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍｉ．ａｓｉｓｃｏｎｔｒｏｌ：ｅｘｐｅｒｉｅｎｅ―ａｎｄ ｌｅｓｓｏｎｓ ｆｒｏｍＣｈｉｎａ［Ｊ］．Ｌａｎｃｅｔ，２００８，３７２（９６５２）：１７９３―１７９５．ｊａｐｏｎｉｃａ：ｉｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎａｎｄ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｎａｉｌ ｃｏｎｔｒｏｌ［１９］ＷｏｒｌｄＨｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍｉａｓｉｓ．［Ｒ］．Ｇｅ－ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｓ［Ｊ Ｊ．ＡｃｔａＴｒｏｐ，２００５，９６（２／３）：１９１．１９７．ｎｅｖａ：ＷＨＯ，１９８５：１１３．［５］吴向阳，仰榴青，张联恒，等．灭螺药物研究进展［Ｊ］．中国血吸虫病防治杂志，２００６，１８（６）：４７４－４７６． ［６］修瑞琴，陈昌，许永香，等．氯硝柳胺对鱼类和潘类的毒性研究［Ｊ］． 中国血吸虫病防治杂志，１９９６，８（６）：３５５．３５７． ［７］张涛，姜庆五．氯硝柳胺的毒理学研究［Ｊ］．中国血吸虫病防治杂 志，２００２，１４（３）：２３４―２３６． ［８］ＷｅｉＦＨ，Ｘｕ［２０］Ａｎｏｎ．Ｍｏｌｌｕｓｃｉｃｉｄｅｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ａｎｄｅｖａｌｕａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｂｕｌｌ Ｗｏｒｌｄ ＨｅａｌｔｈＯｒｇａｎ，１９６５，３３（４）：５６７―５８１． ［２１］戴建荣，徐年凤，梁幼生，等．氯硝柳胺悬浮剂的研制及其杀螺效 果评价［Ｊ］．中国血吸虫病防治杂志，２００３，１５（１）：３―７．［２２］陶海全．我国灭螺药的研究目标［Ｊ］．中国血吸虫病防治杂志，２００３，１５（６）：４７８．４７９． ［２３］Ｊｅｌｎｅｓ ＪＥ．Ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｒＭ １９７７，７１（５）：４５１． ［２４］陈心陶，余炳桢，刘启文．钉螺在不同季节气候条件下对缺氧的 耐受力观察［ｃ］／／卫生部医学科学研究委员会血吸虫病专题委员 会．血吸虫病研究资料汇编．南京：南京大学出版社，１９８５：２２５．２２６． ｏｆ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｍｏｌｌｕｓｃｉｃｉｄｅＸＪ，Ｌｉｕ ＪＢ，ｅｔ ａ１．Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ ｏｆａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｍｏｌｌｕｓｃｉ―ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎ Ｓｃｈ括ｔｏｓｏ－ Ｍｅｄ Ｈｙｇ，ｃｉｄｅ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍｔｈｅｐｌａｎｔＳｏｌａｎｕｍｘａｎｔｈｏｃａｒｐｕｍ：ａ ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｓｔｕｄｙｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ ｈｏｓｔ ｆｒｏｍＩｒａｎ［Ｊ］．ＴｒａｎｓＲ Ｓｏｃ Ｔｒｏｐ［Ｊ］．Ａｎｎ ［９］ＫｅｎａｗｙＴｒｏｐ ＭｅｄＰａｒａｓｉｔｏｌ，２００２，９６（３）：３２５―３３１．ｅ１．Ｒ，Ｒｉｚｋ ｅｌ―Ｓ．Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｒｅｌｅａｓｅ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆｖｅｃｔｏｒｎｉｃｌｏｓａｍｉｄｅ ｆｏｒ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｂｉｏｍｐｈａｌａｒｉａ ａｌｅｘａｎｄｒｉｎａ，ｔｈｅ ｏｆｓｎａｉｌｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍｉａｓｉｓ［Ｊ Ｊ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ Ｂｉｏｓｃｉ，２００４，４（２）：１１９―１２８．ＹＳ，ｅｔ ａ１．Ａ ｎｏｖｅｌ ｍｏｌｌｕｓｃｉｃｉｄａｌ ｆｏｒｍｕｌａ―［１０］Ｄａｉ ＪＲ，Ｗａｎｇ Ｗ，Ｌｉａｎｇｔｉｏｎｏｆｎｉｃｌｏｓａｍｉｄｅ［Ｊｊ．Ｐａｒａｓｉｔｏｌ Ｒｅｓ，２００８，１０３（２）：４０５?４１２．Ｙ，Ｄｏｎｇ ＨＦ，Ｘｕ［２５］杨坤，周晓农，梁幼生，等．春季温度变化对钉螺酶组织化学的影 响［Ｊ］．中国人兽共患病杂志，２００４，２０（６）：５１５―５１８ ［２６］杨坤，周晓农，梁幼生，等．冬季温度变化对钉螺一氧化氮合酶的 影响［Ｊ］．中国血吸虫病防治杂志，２００３，１５（６）：９３―９７．［１１］ＹｕａｎＸＪ，ｅｔ ａ１．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆａｎｅｗｍｏｌｌｕｓｃｉｃｉｄｅｆｏｒ ｃｏｕｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ ｔｈｅｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｓｎａｉｌ ｈｏｓｔ ｏｆ Ｓｃｈ括ｔｏｓｏｍａｊａｐｏｎｉ―ｃｕｍ［Ｊ］．Ｍａｌａｃｏｌｏｇｉａ，２０１１，５３（２）：２１７―２２７． ［１２］戴建荣，张燕萍，姜玉骥，等．杀螺剂室内筛选实验方法标准化的 研究Ｉ药液体积对杀螺效果的影响［Ｊ］．中国血吸虫病防治杂志， ２００２，１４（２）：１２２―１２４． ［１３］戴建荣，奚伟萍，梁幼生，等．杀螺剂室内筛选实验方法标准化的［收稿日期］２０１１－１１－２０［编辑］汪伟（上接第３４页）［７］Ｋａｋｋａｒｎｏｖｅｌ Ｒ，Ｌｅｅ ＲＴ．Ｔｈｅ ＩＬ一３３／ＳＴ２ ｐａｔｈｗａｙ：ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｒｅｖ Ｄ．ｒｕｇ ｔａｒｇｅｔａｎｄ［１３］ｄｅ ＪｅｓｕｓＡＲ，Ｓｉｌｖａ Ａ，Ｓａｎｔａｎａ ＬＢ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ ｅｖａｌｕａ― ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈａｃｕｔｅｂｉｏｍａｒｋｅｒ［Ｊ］．ＮａｔＤｉｓｃｏｖ，２００８，７（１０）：８２７―８４０．ｔｉｏｎ ｏｆ ３１ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍｉａｓｉｓｍａｎｓｏｎｉ ｌＪ Ｊ．ＪＩｎｆｅｃｔ［８］Ｓｔａｄｅｃｋｅｒ ＭＪ，Ａｓａｈｉｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ｉｎＨ，Ｆｉｎｇｅｒ Ｅ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ＴｈｌＤｉｓ，２００２，１８５（１）：９８―１０５． ［１４］郝阳，吴晓华，郑浩，等．２００７年全国血吸虫病疫情通报［Ｊ］．中 国血吸虫病防治杂志，２００８，２０（６）：４０１－４０４． ［１５］郝阳，郑浩，朱蓉，等．２００８年全国血吸虫病疫情通报［Ｊ］．中国 血吸虫病防治杂志，２００９，２１（６）：４５１．４５６． ［１６］郝阳，郑浩，朱蓉，等．２００９年全国血吸虫病疫情通报［Ｊ］．中国 血吸虫病防治杂志，２０１０，２２（６）：５２１．５２７． ［１７］Ｈｏｏｇｅｒｗｅｒｆ ＪＪ，Ｔａｎｃｋ ＭＷ，ｖａｎｍａ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ Ｚｏｅｌｅｎ ＭＡ，ｅｔ ａ１．Ｓｏｌｕｂｌｅ ＳＴ２ｓｅｖｅｒｅｈｉｇｈ―ｐａｔｈｏｌｏｇｙｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍｉａｓｉｓ［Ｊ］．１ｍｍｕｎｏｌＲｅｖ，２００４，２０１：１６８―１７９．［９］ＣａｌｄａｓＩＲ，Ｃａｍｐｉ－Ａｚｅｖｅｄｏ ＡＣ，Ｏｌｉｖｅｉｒａ ＬＦ，ｅｔ ａ１．Ｈｕｍａｎ ｓｃｈｉｓｔｏｓｏ―ａｃｕｔｅｍｉａｓｉｓ ｍａｎｓｏｎｉ：ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｄｕｒｉｎｇ ｏｆｔｈｅａｎｄｃｈｒｏｎｉｃ ｐｈａｓｅｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＡｅｔａＴｒｏｐ，２００８，１０８（２／３）：１０９一１１７．ＣＮ，Ｓｏｕｚａａｃｕｔｅ［１０］ＭｏｒａｉｓＪＲ，Ｍｅｌｏ ＷＧ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｐｒｏｆｉｌｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｊ １．Ｍｅｍ［ｎｓｔ Ｏｓ―ｃｈｒｏｎｉｃ ａｎｄ ｗａｌｄｏｈｕｍａｎ ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍｉａｓｉｓ ｍａｎｓｏｎｉｐｌａｓ―Ｃｒｕｚ，２００８，１０３（６）：５６１．５６８．Ｍ，Ｘｕ Ｄ，Ｌｉ Ｙ．ＩＬ一３３ ｉｓａｐｒｅｄｉｃｔ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ｉｎｓｅｐｓｉｓｌＪ Ｊ．Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ［１１］Ｋｏｍａｉ―ＫｏｍａＴｈ２ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔｆｏｒ ｈｕｍａｎＣａｒｅＭｅｄ，３６（４）：６３０―６３７．ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．ＥｕｒＪ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００７，３７（１０）：２７７９―２７８６．ＮＩ，ＭｃＩｎｎｅｓ ＩＢ．Ｄｉｓｅａｓｅ．ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ＩＬ［１２］Ｌｉｅｗ ＦＹ，Ｐｉｔｍａｎ一３３：ｔｈｅｎｅｗ［收稿日期］２０１１―０９－２１［编辑］汪伟ｋｉｄ ｉｎ ｔｈｅ ＩＬ―ｌｆａｍｉｌｙ【Ｊ Ｊ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１０，１０（２）：１０３―１ｌＯ．万方数据杀螺剂室内筛选实验方法标准化的研究Ⅳ不同月份钉螺对氯硝柳胺 乙醇胺盐可湿性粉剂的敏感性作者： 李幼子， 邢云天， 李洪军， 曲国立， 汪伟， 魏剑英， 梁幼生， 戴建荣， Li You-zi， Xing Yun-tian， Li Hong-jun， Qu Guo-li， Wang Wei， Wei Jian-ying， Liang You-sheng， Dai Jian-rong 江苏省血吸虫病防治研究所、卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室、农业部杀虫剂药效评价中 心,无锡,214064 中国血吸虫病防治杂志 Chinese Journal of Schistosomiasis Control )作者单位： 刊名： 英文刊名： 年，卷(期)：参考文献(26条) 1.吴向阳;仰榴青;张联恒 灭螺药物研究进展[期刊论文]-中国血吸虫病防治杂志 .Yuan Y;Xu XJ;Dong HF Transmission control of schistosomiasis japonica:implementation and evaluation of different snail control interventions ) 3.Kenawy el-R;Rizk el-S Polymeric controlled release formulations of niclosamide for control of Biomphalaria alexandrina,the vector snail of schistosomiasis .Wei FH;Xu X J;Liu JB Toxicology of a potential molluscicide derived from the plant Solanum xanthocarpum:a preliminary study[外文期刊] .张涛;姜庆五 氯硝柳胺的毒理学研究[期刊论文]-中国血吸虫病防治杂志 .修瑞琴;陈昌;许永香 氯硝柳胺对鱼类和潘类的毒性研究 .戴建荣;梁幼生;张燕萍 杀螺剂室内筛选实验方法标准化的研究Ⅱ实验钉螺饲养时间对杀螺效果的影响 .戴建荣;奚伟萍;梁幼生 杀螺剂室内筛选实验方法标准化的研究Ⅱ钉螺数对杀螺效果的影响 .戴建荣;张燕萍;姜玉骥 杀螺剂室内筛选实验方法标准化的研究Ⅰ药液体积对杀螺效果的影响 .Yuan Y;Dong HF;Xu XJ Evaluation of a new molluscicide for counteracting the intermediate snail host of Schistosoma japonicum .Dai JR;Wang W;Liang YS A novel molluscicidal formulation of niclosamide[外文期刊] .中华人民共和国卫生部疾病控制司 血吸虫病防治手册 2000 13.杨坤;周晓农;梁幼生 冬季温度变化对钉螺一氧化氮合酶的影响 .杨坤;周晓农;梁幼生 春季温度变化对钉螺酶组织化学的影响 .陈心陶;余炳桢;刘启文 钉螺在不同季节气候条件下对缺氧的耐受力观察 1985 16.Jelnes JE Evidence of possible molluscicide resistance in Schistosoma intermediate host from Iran .陶海全 我国灭螺药的研究目标[期刊论文]-中国血吸虫病防治杂志 .戴建荣;徐年凤;梁幼生 氯硝柳胺悬浮剂的研制及其杀螺效果评价[期刊论文]-中国血吸虫病防治杂志 .Anon Molluscicide screening and evaluation .毛守白 血吸虫生物学与血吸虫病防治 1990 21.World Health Organization The control of schistosomiasis 1985 22.Wang LD;Utzinger J;Zhou XN Schistosomiasis control:experiences and lessons from China ) 23.方积乾;徐勇勇;余松林 医学统计学与电脑实验 1997 24.戴建荣;陈昌;梁幼生 不同样品的氯硝柳胺乙醇胺盐可湿性粉剂的杀螺效果与质量比较 .周晓农 实用钉螺学 2005 26.WHO The role of mollusciciding in 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