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有关稀释涂布平板法的叙述错误的是
A．首先将菌液进行一系列的梯度稀释B．然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面C．其核心是防止杂菌污染，保证培养液的纯度D．结果都是在培养基表面由单个细胞形成单个的菌落
题型：单选题难度：偏易来源：专项题
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据魔方格专家权威分析，试题“有关稀释涂布平板法的叙述错误的是[]A．首先将菌液进行一系列的梯..”主要考查你对&&微生物的实验室培养&&等考点的理解。关于这些考点的“档案”如下：
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微生物的实验室培养
微生物的实验室培养：1．培养基的概念、种类及营养构成 (1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。 (3)营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。2．无菌技术 (1)关键：防止外来杂菌的入侵。(2)具体操作 ①对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。 ②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。 ③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触。(3)消毒和灭菌
3、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。4、接种方法：平板划线法和稀释涂布法。（1）平板划线操作：①挑取他含菌样品：选用平整、圆滑的接种环，按无菌操作法挑取少量菌种。②划A区：将平板倒置于煤气（酒精）灯旁,左手拿出皿底并尽量使平板垂直于桌面，有培养基一面向着煤气灯（这时皿盖朝上，仍留在煤气灯旁)，右手拿接种环先在A区划3—4条连续的平行线(线条多少应依挑菌量的多少面定）。划完A区后应立即烧掉环上的残菌，以免因菌过多而影响后面各区的分离效果。在烧接种环时，左手持皿底并将其覆盖在皿盖上方(不要放入皿盖内)，以防止杂菌的污染。③划其他区：将烧去残菌后的接种环在平板培养基边缘冷却一下，并使B区转到上方，接种环通过A区（菌源区）将菌带到B区，随即划数条致密的平行线。再从B区作C区的划线。最后经C区作D区的划线，D区的线条应与A区平行，但划D区时切勿重新接触A、B区，以免极该两区中浓密的菌液带到D区，影响单菌落的形成。随即将皿底放入皿盖中。烧去接种环上的残菌。④等平板凝固后，将平板倒置。（2）稀释涂布法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，在适宜条件下培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。能够测定样品中活菌数的方法是：稀释涂布平板法。纯化大肠杆菌的无菌操作和菌种保存： 1．大肠杆菌 (1)特性：革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌。 (2)用途：是基因工程技术中被广泛采用的工具。 2．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 (1)计算：依据是培养基配方的比例。 (2)称量：牛肉膏比较黏稠，可同称量纸一块称取。牛肉膏和蛋白胨易吸潮，称取时动作要迅速，称后及时盖上瓶盖。 (3)溶化：牛肉膏和称量纸+水加热取出称量纸→加蛋白胨和氯化钠→加琼脂（注意：要不断用玻璃棒搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯破裂）→补加蒸馏水至100mL。 3.纯化大肠杆菌（1）方法 ①平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。 ②稀释涂布平板法：将骏业进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。（2）鉴定：将接种后的培养基和一个未接种的培养基（对照组）都放入到37℃恒温箱中，培养12h和24h后，分别观察并记录结果。 （3）菌种保存
知识点拨：1、无菌技术操作原则：（1）操作前准备：①操作环境应清洁、宽敞、定期消毒；物品布局合理；无菌操作前半小时应停止清扫工作、减少走动、避免尘土飞扬。②工作人员应做好个人准备，戴好帽子、口罩，修剪指甲并洗手，必要时穿无菌衣、带无菌手套。（2）操作中保持无菌①工作人员应面向无菌区，手臂应保持在腰部或操作台台面以上，不可跨越无菌区避免面对无菌区谈笑、咳嗽、打喷嚏。②用无菌持物镊取用物品；无菌物品一经取出，即使未用，也不可放回无菌容器内；一套无菌物品仅供一位患者使用，避免交叉感染。 ③无菌操作中，无菌物品疑有污染或已被污染，应予更换并重新灭菌。（3）无菌物品保管：①无菌物品必须与非无菌物品分开放置。②无菌物品不可暴露于空气中，应存放于无菌包或无菌容器中，无菌包外须标明物品名称、灭菌日期，并按失效期先后顺序排放。③定期检查无菌物品的灭菌日期及保存情况。无菌包在未被污染的情况下保存期一般为7天，过期或受潮应重新灭菌。2、划线分离操作中的有关问题：（1）在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环，在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环。
②在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线，以免接种环温度太高，杀死菌种。 ③在进行第二次以及其后的划线操作时'要从上一次划线的末端开始划线。每次划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 (2)进行恒温培养时，要将培养皿倒置的原因如果正放培养皿，则皿盖上形成的水滴会落入培 养基表面并且扩散开。如果培养皿中已形成菌落，则茵落中的细菌会随水扩散，菌落间相互影响，很难再分成单菌落，达不到分离的目的。因此恒温培养时，培养皿必须倒置。 (3)培养后判断是否有杂菌污染的方法 ①从菌落的形态看，是否湿润、透明、黏稠，呈何种颜色等等，是区别细菌、酵母菌、放线菌和霉菌的关键指标。 ②用显微镜镜检观察其形态、大小，看是否有菌丝、孢子、芽孢等，这也是区别细菌、酵母菌、放线菌和霉菌的关键指标。 知识拓展：1、对异养微生物来说，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作为营养要素成分时并不是起单一方面的作用。2、并不是所有微生物都需添加特殊营养物质，有些微生物需添加，原因是它们自身缺乏合成这些物质所需要的酶或合成能力有限。3、含抗生素的牛奶不能发酵为酸奶的原因：牛奶发酵成酸奶是利用乳酸菌来完成的，乳酸菌属于细菌， 4、化学药剂的消毒方法，其作用原理是使细菌体内蛋白质变性，但是化学物质很难透过孢子或芽孢的坚硬外层进入细胞内，因此化学方法难以消灭孢子和芽孢。5、体积分数为70%的乙醇杀菌效果最强，浓度过低，杀菌力弱，浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固形，成一层保护膜，乙醇分子不能渗入其内，因此杀菌效果受影响。 6、倒平板的方法：右手持盛培养基的试管或三角瓶置火焰旁边，用左手将试管塞或瓶塞轻轻地拨出，试管或瓶口保持对着火焰；然后用右手手掌边缘或小指与无名指夹住管（瓶）塞（也可将试管塞或瓶塞放在左手边缘或小指与无名指之间夹住。如果试管内或三角瓶内的培养基一次用完，管塞或瓶塞则不必夹在手中）。左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝，迅速例入培养基约15mL，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面上，待凝后即为平板。7、在斜面培养基上接种时，其正确的操作顺序： ①用左手大拇指、食指和无名指夹住菌种试管和待接种的斜面试管，管口并齐，使斜面向上成水平状态 ②右手拧松棉塞，但不取下③右手拿接种环，在火焰上灼烧灭菌 ④在火焰边用右手无名指和小指夹两个棉塞，将它们取下，同时左腕转动，灼烧管口一周 ⑤将接种环伸入管内，让环先接触培养基上未长菌的部位，使环冷却，然后轻轻挑取少量菌体⑥在火焰旁边迅速将沾有菌体的接种环伸到培养基的底部，由里向外轻轻画蛇形细线 ⑦抽出接种环，再用火焰灼烧管口，并在火焰上方将棉塞塞上 8、自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差别在于碳源。9、平菇培养的操作程序：配制棉籽壳培养基，高压蒸汽灭菌，接种，培养。10、菌种的保存：对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法；临时保藏的菌种一般是接种到试管的固体斜面培养基上；临时保藏的菌种容易被污染或产生变异；在临时保藏过程中，每3～6个月都要重新将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上；
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871448523595834959718108295317琼脂糖电泳有何优缺点?_作业帮
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琼脂糖凝胶电泳是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法.对于分子量较大的样品,如大分子核酸、病毒等,一般可采用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离.琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段,其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低,但它制备容易,分离范围广,尤其适于分离大片段DNA.普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2-20kb,利用脉冲电泳,可分离高达10^7bp的DNA片段.琼脂糖凝胶的特点天然琼脂（agar）是一种多聚糖,主要由琼脂糖（agarose,约占80%）及琼脂胶（agaropectin）组成.琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质,不带电荷,而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖,由于这些基团带有电荷,在电场作用下能产生较强的电渗现象,加之硫酸根可与某些蛋白质作用而影响电泳速度及分离效果.因此,目前多用琼脂糖为电泳支持物进行平板电泳,其优点如下.（1）琼脂糖凝胶电泳操作简单,电泳速度快,样品不需事先处理就可以进行电泳.（2）琼脂糖凝胶结构均匀,含水量大（约占98%~99%）,近似自由电泳,样品扩散较自由电流,对样品吸附极微,因此电泳图谱清晰,分辨率高,重复性好.（3）琼脂糖透明无紫外吸收,电泳过程和结果可直接用紫外光灯检测及定量测定.（4）电泳后区带易染色,样品极易洗脱,便于定量测定.制成干膜可长期保存.目前,常用琼脂糖作为电泳支持物,分离蛋白质和同工酶.将琼脂糖电泳与免疫化学相结合,发展成免疫电泳技术,能鉴别其他方法不能鉴别的复杂体系,由于建立了超微量技术,0.1ug蛋白质就可检出.细菌药敏试验方法(细菌,药敏试验,稀释法,抑菌圈)
01:13:18&&&来源：&&&评论：&&
[细菌药敏试验方法(细菌,药敏试验,稀释法,抑菌圈)] 目前常用的药敏试验方法如下：1、定性测定的纸片扩散法(disk diffusion test)，K-B法： WHO推荐的全球统一的标准方法。原理：含有定量抗菌货物的纸睡帖在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散，形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓 [关键词:细菌 药敏试验 稀释法 抑菌圈 药物 扩散法 接种 肉汤稀释法]…
目前常用的药敏试验方法如下：1、定性测定的纸片扩散法(disk diffusion test)，K-B法： WHO推荐的全球统一的标准方法。原理：含有定量抗菌货物的纸睡帖在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散，形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关。质控：标准菌株的抑菌圈直径应落在预期范围内，如果超出该范围，应视为失控而予以纠正。影响因素：培养基的质量、药敏纸片的质量、接种菌量、试验操作质量、孵育条件、抑菌圈测量工具的精度和质控菌株本身的药敏特性等均能影响试验结果的准确性。2、定量测定的稀释法(dilution test)，主要测定细菌对某药的最低抑菌浓度，包括肉汤稀释法和琼脂稀释法。琼脂稀释法：原理：将不同剂量的抗菌药物加入融化并冷至50℃左右的定量MH琼脂中，制成含有不同递减浓度药物的平板。接种待没测菌（可在一个平板上做多株测定），35℃孵育16－24h，无细菌生长的最低药物浓度为测试菌的MIC。本试验特点是可同时做多株菌株的MIC测定，结果的重复性优于肉汤稀释法，且易于发现污染或耐药突变菌，是新药证时常用的外药敏试验经典参照标准。3、E法(E test)，结合了扩散法和稀释法各自的优点。是结合了扩散法和稀释法各自的优点，操作简便同扩散法，又可以象稀释法一样直接定量测出抗菌药物对测试菌的最低MIC，结果准确，重复性好，但是价格昂贵。4、全自动药敏仪法，有Vitek、Microscan、Sensititre ARIS、ATB。 秀网友ljksbs 总结了常用药物抑菌圈直径大小来判断结果的标准，如下：
抗药 中介 敏感AMK9阿米卡星
30ug ≤14 15-16 ≥17CLI 克林霉素
≤14 15-20 ≥21GEN庆大霉素
≤12 13-14 ≥15OXA苯唑西林
≤10 11-12 ≥13PEN青霉素
10U ≤28 -
≥29AMS舒巴坦
≤11 12-14 ≥15AMP氨卞西林
10ug ≤13 14-16 ≥17PIP哌拉西林
≥18FZN头孢唑碄
≤14 15-17 ≥18CAZ头孢它定
≤14 15-17 ≥18CIP环丙沙星
≤15 16-20 ≥21ATM氨曲南
≤15 16-21 ≥22FRX头孢呋辛
≤14 15-17 ≥18IMP亚氨配南
≤13 14-15 ≥16 VAN万古霉素
≥15SXT复方新诺明 1.25/23.75 ug ≤10 11-15 ≥16
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【求助】琼脂稀释法药敏操作的一些问题
【求助】琼脂稀释法药敏操作的一些问题
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这个帖子发布于4年零59天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
最近要用琼脂稀释法做MIC试验了，想请教各位高手一些试验方法及操作方面的问题：1.各种抗生素的溶解液和稀释液，是不是就一定要按照规定的那样有些一定要用PBS溶解稀释，有些可以直接用双蒸水，而有些要用饱和碳酸氢钠等，可不可以都用双蒸水溶解稀释？2.大家最终配药物平板的时候药物溶液和琼脂的比例一般多少？我看有的地方说1:19，有的说1:14，不知道那个比例好点？后续问题做的时候再继续请教！
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请各位大侠多多指点
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抗生素的稀释，最好是按照要求来，因为之所以有这样的要求，那是有原因的，比如，有的要用碱性的碳酸氢钠稀释，是因为在中性或酸性溶液中根本就不溶解，你怎么稀释啊。。。至于琼脂和溶液的比例，这个我没看过相关文献，不过我觉得，应该是在保证药物浓度的前提下，尽可能少加一些溶液，避免琼脂被稀释过度而影响凝固。。。
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bahai 抗生素的稀释，最好是按照要求来，因为之所以有这样的要求，那是有原因的，比如，有的要用碱性的碳酸氢钠稀释，是因为在中性或酸性溶液中根本就不溶解，你怎么稀释啊。。。至于琼脂和溶液的比例，这个我没看过相关文献，不过我觉得，应该是在保证药物浓度的前提下，尽可能少加一些溶液，避免琼脂被稀释过度而影响凝固。。。支持楼上观点。楼主，看下这篇文献，可能对你有帮助。
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bahai 抗生素的稀释，最好是按照要求来，因为之所以有这样的要求，那是有原因的，比如，有的要用碱性的碳酸氢钠稀释，是因为在中性或酸性溶液中根本就不溶解，你怎么稀释啊。。。至于琼脂和溶液的比例，这个我没看过相关文献，不过我觉得，应该是在保证药物浓度的前提下，尽可能少加一些溶液，避免琼脂被稀释过度而影响凝固。。。谢谢bahai，我问了问我们实验室的同志，他们说可以0.5:20稀释，个人觉得0.5有点多，我就少稀释了几个药物浓度，分别以0.5:20,0.25:20,0.125:20来稀释的，不知道这样会不会影响结果，因为不同药物浓度的平板加的稀释液有点区别。。。。
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你好，你们有没有做过磷霉素的琼脂稀释法药敏，使用是么溶解和稀释的啊？我看有关资料上都没有，多谢bahai wrote:抗生素的稀释，最好是按照要求来，因为之所以有这样的要求，那是有原因的，比如，有的要用碱性的碳酸氢钠稀释，是因为在中性或酸性溶液中根本就不溶解，你怎么稀释啊。。。至于琼脂和溶液的比例，这个我没看过相关文献，不过我觉得，应该是在保证药物浓度的前提下，尽可能少加一些溶液，避免琼脂被稀释过度而影响凝固。。。
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呵呵，我用药物体积：培养基体积1：1,1:2,1:4,1:8,........做过，只不过加的药物体积过多，琼脂凝不住。不过我这是迫不得已，我就是没高清你为什么要加溶液？？？
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bahai 呵呵，我用药物体积：培养基体积1：1,1:2,1:4,1:8,........做过，只不过加的药物体积过多，琼脂凝不住。不过我这是迫不得已，我就是没高清你为什么要加溶液？？？嗯，我是用药物标准品做的，都是粉针剂，要先溶解再稀释配平板ps：上次利奈唑胺是直接用注射液，结果也有1:1配的平板，哎，估计刚能凝牢。。。。。
关于丁香园琼脂稀释法问题(琼脂稀释法,梯度,耐药,药敏试验)
14:55:38&&&来源：&&&评论：&&
[琼脂稀释法问题(琼脂稀释法,梯度,耐药,药敏试验)] 琼脂稀释法问题我想问一下，我做的琼脂稀释法药敏试验，比如AMP在CLSI标准上的MIC耐药为32ug/Ml，我的最高梯度稀释为32ug/Ml,预试验上该浓度平皿有细菌生长，说明耐药，那么我还需要增加梯度，比如说从64或者128ug/Ml开始稀释么？是不是一直要增加到所有的菌的MIC值被测出来才行呢？谢谢！ 关键词:[琼脂稀释法 耐药 梯度 药敏试验 细菌 平皿 预试验]…
稀释法问题我想问一下，我做的稀释法药敏试验，比如AMP在CLSI标准上的MIC耐药为32ug/Ml，我的最高梯度稀释为32ug/Ml,预试验上该浓度平皿有细菌生长，说明耐药，那么我还需要增加梯度，比如说从64或者128ug/Ml开始稀释么？是不是一直要增加到所有的菌的MIC值被测出来才行呢？谢谢！
回复不需要增加到所有菌的MIC值被测出来。最常见的是256 ug/ml，也有512 ug/ml的。如果还有细菌生长就表示为>256 ug/ml 或>512 ug/ml回复非常感谢，那稀释梯度要8个左右，怪不得有文献说琼脂稀释法费时费力呢！
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