简述K-B纸片扩散法琼脂扩散法原理及影晌因素。

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K-B纸片琼脂扩散法
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来源:海博生物
1)原理:将含有定量抗菌药物的纸片贴在测试菌的琼脂平板上,纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分溶解后不断地向纸片周围扩散,形成递减的浓度梯度。&&在纸片周围可抑菌浓度范围内测定菌的生长被抑制,从而形成无菌生长的透明圈即抑菌圈。&抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感性。&
(2)&制备抗菌药物纸片&&专用药敏纸片:用加样或浸泡的方法使每片的药量达到一定的规定量,冷冻干燥后密封,-20°C保存备用。&(3)配制培养基&&水解酪蛋白(Mueller-Hinton,MH)琼脂是对生长较快的需氧和兼性厌氧菌进行药敏试验的标准培养基,pH7.2-7.4,琼脂厚度为4mm。&&对营养要求较高的细菌进行药敏试验时,应在MH琼脂中加入相应的营养添加剂。&(4)细菌接种&&接种物的准备可采用生长法或直接菌落悬液法。&&为使药敏试验的接种浓度标准化,应使用0.5麦氏比浊标准的菌液浓度,制备好的菌液应在15min内接种完毕。&&置35℃孵育16-18h后读取结果,厌氧菌应孵育在含CO2的环境中,葡萄球菌和肠球菌必须孵育24h,以检测对苯唑西林和万古霉素的耐药性。&(5)&结果解释和报告&&用游标卡尺或直尺量取抑菌圈直径,参照NCCLS标准判断结果。常分为以下三级:敏感、中度敏感、低度敏感&(6)纸片法药敏结果的影响因素&&培养基的质量对结果的准确性有直接影响,如pH、硬度、湿度和深度等;&&药敏纸片的含药量是影响抑菌圈大小的重要因素;&&接种菌量正确与否是影响结果的重要因素之一;&&试验操作质量;培养条件和温度、时间;&&抑菌圈测量工具的精确度;&&质控菌株本身的药敏特性是否合格,有无变异。&(7)质量控制&&采用标准菌株是进行药敏试验质量控制的主要措施。&&常用的临床药敏质控标准菌株有:金黄色葡萄球菌ATCC25923,大肠杆菌ATCC25922,铜绿假单胞菌ATCC27853&等。
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简述K-B纸片琼脂扩散法原理及影晌因素。
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K-B纸片琼脂扩散法原理:将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上。纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后不断地向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制,从而形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度,并与该药对测试菌的最低抑菌浓度(MIC)呈负相关关系,即抑菌圈愈大,MIC愈小。
影响纸片法药敏试验结果的因素有:1培养基的质量,如pH、深度、硬度和表面湿度等。对每批商品化或自配MH琼脂必须用标准质控菌株进行检测,合格后方能使用;2药敏纸片的质量,含药量和保存方式;3接种菌量正确与否是影响结果的重要因素之一,取决于麦氏比浊标准的配制,正确使用和保存;4试验操作质量;5孵育条件,温度和时间;6抑菌圈测量工具的精度;7质控标准菌株本身的药敏特性是否合格,有无变异。
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